一种菜用大豆提取物的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种菜用大豆提取物的制备方法，及其检测方法。菜用大豆水提取物含有脱落酸，脱落酸具有提高果糖诱导的小鼠胰岛素的敏感性的作用，可有效地防止胰岛素抵抗；脱落酸能够很好地改善高脂饲料饲养的小鼠血清中的TC、TG、HDL-C水平，明显降低肝脏中MDA含量，升高SOD含量，脱落酸可以降低肥胖小鼠的体重，减少小鼠腹部脂肪，脱落酸具有抗肥胖效果。毛豆水提取物明显降低糖尿病小鼠空腹血糖，明显改善2型糖尿病小鼠口服糖耐量，明显降低2型糖尿病小鼠肝脏中MDA的含量，和提高SOD的含量；毛豆水提取物对糖尿病小鼠的肝脏具有保护作用，对糖尿病小鼠的脾脏、肾脏、胸腺和胰腺等均有积极保护作用。菜用大豆水提取物可以应用于糖尿病预防及治疗药品的开发，也可应用于相关领域的食品及保健品的开发。

【技术实现步骤摘要】
一种菜用大豆提取物的制备方法及其应用
本专利技术涉及菜用大豆（又名毛豆）的提取方法及其在医疗保健方面的应用。
技术介绍
菜用大豆是高营养并含有丰富的有益的植物化学物质，因此，被认为是营养药物或功能性食品作物。毛豆富含蛋白质且氨基酸种类齐全、人体必需的各种矿物质、维生素(VA、VC、VE)、不饱和脂肪酸、植物粗纤维以及近年来备受关注的大豆异黄酮等一类天然有益的植物次生产物,其中染料木黄酮含量较高[1]。这一系列物质确定了毛豆的营养价值和医疗作用。毛豆对一些疾病有预防和辅助治疗作用，如肥胖、高血脂、高血压、糖尿病、心血管疾病等，并因其独特的风味与口感，被誉为最美味、最富营养的绿色保健蔬菜[2]。O.H.Aziz[3]报告，大豆含有复杂碳水化合物和丰富的膳食纤维，有利于糖尿病人降低血糖并减少患糖尿病的风险。据专利（菜用大豆在预防治疗糖尿病中的医用用途CN103349675A）指出，菜用大豆对2型糖尿病具有预防治疗作用，对于2型糖尿病患者具有降低空腹血糖和改善糖耐量的作用，并具有降低血脂、总胆固醇，提高高密度脂蛋白等作用。Khushk,M.U.等[4]研究报告，大豆氯仿和酒精提取物对四氧嘧啶诱导的糖尿病兔具有降糖作用。FujitaH等[5]报告，豆豉水溶性提取物显示出葡萄糖苷酶抑制活性，表现出抗高血糖效果，并且对于非胰岛素依赖型糖尿病患者具有潜在作用。临床研究表明[6]，大豆异黄酮具有防止脂质过氧化的作用，因此能减少人类心血管疾病的风险。大豆异黄酮可增加高密度脂蛋白胆固醇，降低低密度脂蛋白胆固醇，从而可缓解糖尿病，增加骨密度，减少骨质疏松[7]。BehloulN[8]报告,大豆异黄酮，染料木素具有治疗肥胖和糖尿病的作用。BartkeA[9],等报告，不论是含有低异黄酮还是高异黄酮的大豆饮食，均能使空腹血糖水平降低，并且改善葡萄糖耐受性。也就是说与异黄酮含量无关，可能是膳食大豆蛋白降低了空腹血糖，提高了葡萄糖耐受能力。OrsolyaMezei等[10]研究表明，含有大豆异黄酮的的大豆蛋白能够改善改善脂质代谢，激活PPAR受体,具有抗糖尿病作用。此前不久，我们研究[11、12]报告，冷冻处理的毛豆中异黄酮含量最低，但是冷冻处理的毛豆灌胃给药2.20g/kg，连续灌胃28d后,对糖尿病小鼠血糖降低作用明显,小鼠空腹血糖比实验前降低29.78％，这可能是大豆蛋白、膳食纤维、异黄酮等活性物质共同作用的结果。本专利技术报告发现毛豆水提取物具有抗糖尿病作用，其主要活性物质是脱落酸。据报道显示[89]成熟大豆中脱落酸含量几乎为零，在毛豆中均有脱落酸分布，经检测毛豆脱落酸含量从2-30mg/kgfw。本专利技术报告每公斤毛豆水提取物含有500mg以上脱落酸。本专利技术公开对果糖诱导胰岛素抵抗小鼠，施以脱落酸0.75mg/kg就能明显地降低胰岛素抵抗小鼠的空腹血清血糖、空腹血清胰岛素水平和空腹胰岛素抵抗耐受指数（FIRI）。本专利技术公开毛豆水提取物对于高脂饲料饲养的db/db小鼠以链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）所致2型糖尿病小鼠具有降糖、降脂等作用。
技术实现思路
本专利技术提供了菜用大豆水提取物的制备方法，其特征在于:新鲜菜用大豆经真空冷冻干燥，冷水提取，所得提取物，经HPLC测定含有脱落酸。菜用大豆水提取物具有降血糖、改善葡萄糖耐量、调节血脂以及保护和修复受损胰岛的作用。脱落酸，能显著提高果糖诱导的胰岛素抵抗小鼠胰岛素的敏感性，防止胰岛素抵抗。脱落酸能够很好地改善高脂饲料饲养的小鼠血清中的TC、TG、HDL-C水平，明显降低肝脏中MDA含量，升高SOD含量；脱落酸可以降低肥胖小鼠的体重，减少小鼠腹部脂肪，因此脱落酸具有抗肥胖效果。本专利技术的积极效果在于：首次公开菜用大豆水提取物对2型糖尿病具有预防治疗作用，降低糖尿病患者空腹血糖和提高糖耐量，可降低糖尿病小鼠肝脏中MDA的含量；首次公开脱落酸具有抗肥胖作用。本专利技术可以以单一或组合物的形式通过口服给药方式施用于糖尿病治疗的患者。也可以制成饮品、冲剂等一切具有预防治疗2型糖尿病和其他心血管等疾病的药品、食品、健康功能性食品。附图1脱落酸标准品的高效液相色谱图（图中1为脱落酸）附图2杨氏三号毛豆高效液相色谱图（图中1为脱落酸）附图3毛豆水提物对糖尿病小鼠空腹血糖的影响*表示模型组与空白组相比，显著性（P＜0.05），**表示模型组与空白组相比，显著性（P＜0.01），***表示模型组与空白组相比，显著性（P＜0.001）。实施例1取新鲜菜用大豆50g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，冷却,真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取10g加50ml水，调pH至3，于10℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入400ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末约0.1g。经测定脱落酸0.5mg。实施例2取新鲜菜用大豆50g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取10g加50ml水，调pH至4，于10℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入400ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末0.095g。经测定脱落酸含量为0.2mg。实施例3取新鲜菜用大豆50g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取10g加50ml水，调pH至5，于10℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入400ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末0.102g。经测定脱落酸0.1mg。实施例4取新鲜菜用大豆500g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取100g加500ml水，调pH至2.8，于4℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入4000ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末约0.90g。经测定脱落酸含量5.7mg。实施例5取新鲜菜用大豆50g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取10g加50ml水，调pH至3，于20℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入400ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末约0.11g。经测定脱落酸0.33mg。实施例6取新鲜菜用大豆50g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取10g加50ml水，调pH至3，于25℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入400ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末约0.09g。经测定脱落酸0.27mg。实施例7取新鲜菜用大豆50g稍蒸，去皮，豆粒蒸熟，真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取10g加50ml水，调pH至3，于25℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入400ml95%乙醇，并进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末约0.11g。经测定脱落酸0.26mg。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菜用大豆提取物的制备方法，具体方法如下：取新鲜菜用大豆，稍蒸，去皮取出豆粒蒸熟，冷却,真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取一定量加5倍水，调pH 2.8‑5，于4‑30℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入4倍量的 95%乙醇，同时进行搅拌，低温条件下回收酒精，水溶液再行真空冷冻干燥，得干燥粉末。

【技术特征摘要】
1.一种菜用大豆提取物的制备方法，具体方法如下：取新鲜菜用大豆，稍蒸，去皮取出豆粒蒸熟，冷却,真空冷冻干燥，然后粉碎过60目筛，称取一定量加5倍水，调pH2.8-5，于4-30℃条件下提取2h，离心过滤，残渣如前再行提取过滤，合并2次滤液，徐徐加入4倍量的95％乙醇，同时进行搅...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁传波，杨成志，徐宝军，韩佳彤，赵婷，郑毅男，
申请(专利权)人：郑毅男，
类型：发明
国别省市：吉林;22