本发明专利技术提供一种精氨酸单糖苷(AF)人工合成方法，此合成方法合成率高，对环境友好，同时适用于工业化生产。即精氨酸与一种或者两种以上单糖的组合在一种或者两种以上溶剂中反应，此反应系统可以添加如下物质，维生素C、亚硫酸钠、可食用有机酸中的一种或者两种以上的混合物，加热时间为120℃‑200min，最佳反应温度为80℃，生成精氨酸双单糖苷。本发明专利技术揭示了合成后的精氨酸单糖苷能够很好的清除羟基自由基和超氧阴离子，同时能够抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长，提高免疫抑制小鼠的免疫力。
New synthetic method of arginine mono glycoside (AF) and its use in medicine
The invention provides a method for synthesizing arginine mono glycoside (AF), which has high synthesis rate, is friendly to environment and is suitable for industrial production. The combination of arginine and one or more than two kinds of monosaccharides in one or more than two kinds of solvent in the reaction, the reaction system can add the following substances, vitamin C, sodium sulfite, edible organic acid or a mixture of more than two, the heating time is 120 DEG C 200Min, the reaction temperature is 80 C, generation of arginine glycoside. The invention discloses that the synthesized arginine mono glycoside can well scavenge hydroxyl radical and superoxide anion, and can inhibit tumor growth of H22 tumor bearing mice and improve immunity of immunosuppressed mice.
【技术实现步骤摘要】
一种精氨酸单糖苷（AF）的新合成方法及其在医药方面的用途
本专利技术涉及一种精氨酸单糖苷（AF）的新合成方法及其在医疗方面的用途。
技术介绍
精氨酸单糖苷英文名为Arginyl-Fructose，简称AF，又称为精氨酸果糖苷，分子量为337.3，化学名称为1-（精氨酸-Nα基）-1-去氧-D果糖。纯化后的AF单体为白色粉末，AF极易溶于水，几乎不溶于甲醇等有机溶剂，具有吸湿性，对热不稳定。精氨酸单糖苷（AF），存在于自然界的许多植物中，郑毅男在鲜参加工成红参、生晒参的过程中，发现了AF的存在。AF在自然界中的含量非常低，但研究发现在人参加工成生晒参、红参时AF含量较高。AF是鲜人参经加热加工处理后，人参内的糖和氨基酸发生美拉德反应生成的[1,2]。研究发现，AF有很强的药理活性，在疾病治疗上发挥着积极作用。目前已有研究表明，AF在抗糖尿病[3,4]、抗氧化[5,6]、抗肿瘤[7]、保肝等治疗中发挥作用。目前精氨酸单糖苷合成的方法主要是专利“精氨酸果糖苷(AF)制备方法及其医用用途，申请号：201410305612.1”所报道的，但是其方法在合成过程中所选用的溶剂不仅污染环境，对人体有危害，合成率也较低，后续的分离纯化过程也较为复杂，本专利技术为克服上述合成缺陷上开发了一种新型的合成工艺，并公开了合成后精氨酸糖苷的部分生物活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是公开一种精氨酸单糖苷的合成方法及其医用用途。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法合成率大于63%，精氨酸和单糖的配比为1：0.5-2。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中所需要的精氨酸可以是L-精氨酸、D-精氨酸其中的一种或者两种的混合物。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中所需要的单糖可以是D-葡萄糖、D-果糖、D-半乳糖、D-木糖中的一种或者两种以上的混合物。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中所需要的合成时间为120-300min。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中所需要的合成温度为80℃。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中所需要的溶剂为丙二醇、丙三醇、丙醇、异丙醇中的一种或者两种以上的混合溶剂。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中还可以添加亚硫酸钠、维生素C、维生素E的中的一种或者两种以上的混合物。本专利技术公开的精氨酸单糖苷的合成方法中还可以添加柠檬酸、苹果酸等可食用的有机固体酸的中的一种或者两种以上的混合物。本专利技术公开的合成的精氨酸单糖苷具有清除羟基自由基和超氧阴离子自由基、抗肿瘤、提高免疫力的用途。本专利技术的积极效果在于：本专利技术中AF的合成方法，合成率有大幅提高，可达63%，同时降低了AF的生产成本，且粗合成物无刺激性气味，属于绿色环境友好型的合成方法。本专利技术通过实验表明，合成的AF具有清除自由基、抗肿瘤和提高机体免疫力的功效。实验例1.精氨酸单糖苷（AF）合成工艺1.1实验方法1.1.1标准曲线的绘制精密称取AF对照品5mg，用水定容于25mL容量瓶中，分别移取2、4、6、8mL对照品溶液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，得质量浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4mg/mL的对照品溶液。HPLC条件：Venusil-AA氨基酸分析专用柱(5μm，4.6mm×250mm)；流动相：A相-乙酸钠缓冲溶液（925mL纯净水，7.6g乙酸钠，2mL磷酸，2-3d冰乙酸，75mL乙腈），B相-有机相（乙腈∶水=4∶1）。流速1.0mL/min；检测波长254nm；柱温40℃；进样量20μL。1.1.2单因素试验1.1.2.1筛选最佳反应时间固定反应温度85℃，料液比1:20，苹果酸加入量0.75g,考察反应时间为60、90、120、150、180min对AF合成率的影响。1.1.2.2筛选最佳反应温度固定反应时间150min,料液比1:20，苹果酸加入量0.75g,考察反应温度为70、75、80、85、90℃对AF合成率的影响。1.1.2.3筛选最佳料液比固定反应时间150min，反应温度85℃,苹果酸加入量0.75g,考察料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30g/mL对AF合成率的影响。1.2.2.4筛选最佳苹果酸加入量固定反应时间150min，反应温度85℃,料液比1:20，考察苹果酸加入量0.5,0.75,1.0,1.25g对AF合成率的影响。1.1.3响应面法试验在单因素的基础上，采用统计分析软件DesignExpert8.0.6，根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理，以反应时间（X1）、反应温度（X2）、料液比（X3）、苹果酸加入量（X4）为自变量，AF合成率（Y）为响应值，进行优化，试验因素与水平编码如表1所示。表1响应面优化试验因素水平1.2试验结果1.2.1标准曲线的绘制测定不同浓度的AF对照品溶液在254nm下的峰面积，以质量浓度X(mg/mL)对峰面积Y绘制标准曲线，得到回归方程为：Y=298449.88X，R2=0.9991，在质量浓度0.1~0.5mg/mL内呈良好线性关系。1.2.2单因素试验1.2.2.1反应时间对AF合成率的影响在其它试验条件不变的情况下，随着时间的延长，苹果酸催化的AF合成率逐渐升高，当时间达到150min时，合成率达到最高点，随着反应继续，反应向AF减少方向进行。因此，Box-Behnken试验选取的反应时间的范围为120-180min（附图1）。1.2.2.2反应温度对AF合成率的影响多次试验发现，温度70-90℃之间时，AF的合成反应迅速发生，符合AF在红参中形成的温度条件，当温度达到85℃时，AF合成率达到最高点，随着温度继续升高，合成率降低。因此，Box-Behnken试验选取的反应温度的范围为80-90℃（附图2）。1.2.2.3料液比对AF合成率的影响在其它试验条件不变的情况下，以料液比为变量时，丙三醇加量过低时，反应不易混匀，且反应不彻底，合成率偏低，随着溶媒体积的增大，达到1:20g/mL时，AF合成率最高，随着丙三醇体积继续增加，合成率下降。因此，Box-Behnken试验选取的料液比的范围为1:15-1:25g/mL（附图3）。1.2.2.4苹果酸加入量对AF合成率的影响在其它试验条件不变的情况下，随着苹果酸加入量的增加，AF的合成率逐渐升高，苹果酸加入量达到0.75g时，合成率达到最大值，随后随着苹果酸含量的增加而有所降低。因此，Box-Behnken试验选取的苹果酸加入量的范围为0.5-1.0g（附图4）。1.2.3响应面法优化合成试验结果与分析1.2.3.1试验结果运用DesignExpert8.0分析软件进行Box-Behnken设计，设计方案及其试验结果见表2，试验号1-24位析因实验，试验号25-29位中心试验。1.2.3.2结果分析对表2的试验结果进行分析，得到AF合成率（Y）对反应温度（X1）、反应时间（X2）、料液比（X3）、加酸量（X4）的二次多项回归方程为：Y=67.79+2.96X1+1.74X2-1.77X3+1.05X4+1.24X1X2+1.53X1X3+1.72X2X3-1.55X2X4-2.01X3X4-5.15X12-6.09X22-5.49X32-6.62X42。表3为回归模型的方差分析结果，该模型F值为5本文档来自技高网...
【技术保护点】
在一定的温度、时间、溶剂下，利用氨基酸和单糖条件下合成糖苷，其特征在于氨基酸和单糖的比例为1：0.5‑2，合成率大于63%。
【技术特征摘要】
1.在一定的温度、时间、溶剂下，利用氨基酸和单糖条件下合成糖苷，其特征在于氨基酸和单糖的比例为1：0.5-2，合成率大于63%。2.根据权利要求1所述合成的糖苷，其特征在于合成过程中所需要的氨基酸可以是L-精氨酸、D-精氨酸其中的一种或者两种的混合物。3.根据权利要求1所述合成的糖苷，其特征在于合成过程中所需要的单糖可以是D-葡萄糖、D-果糖、D-半乳糖、D-木糖中的一种或者两种以上的混合物。4.根据权利要求1所述合成的糖苷，其特征在于合成过程中所需要的合成时间为120-300min。5.根据权利要求1所述合成的糖苷，其特征在于合成过程中所需要的最佳合成温度为80℃。6.根据权利要求1所述合成的...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁传波，宋明铭，李莹，赵婷，王佳琪，高铭彤，刘文丛，郑毅男，
申请(专利权)人：郑毅男，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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