【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于物质检验测定
,具体涉及一种测定非对称二甲基精氨酸浓度的试剂盒及方法。
技术介绍
非对称二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine,ADMA)是一种甲基化精氨酸,是内源性一氧化氮合酶(Nitric oxide sythase,NOS)抑制剂,其可竞争性抑制一氧化氮(Nitric oxide,NO)的合成。非对称二甲基精氨酸由细胞内蛋白质在精氨酸甲基转移酶作用下发生甲基化,再经水解反应所生成。许多细胞,如人的内皮细胞均可产生ADMA。正常人体内每天产生约300μmol(约60mg),体内浓度远远高于其他同样可产生NOS抑制作用的内源性精氨酸,故被认为是最重要的NOS抑制剂。ADMA从细胞进入血液循环后,一部分被进一步分解代谢直接通过肾脏由尿液排出,但大部分(达250μmol)通过广泛分布于肾脏、肝脏和心血管系统的二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)降解。因此通过DDAH降解被认为是ADMD最为重要的代谢途径。目前国内外多项研究证实在多种疾病,如动脉粥样硬化、冠心病、高脂血症、心衰和中风等患者的血浆中ADMA水平呈显著性 ...
【技术保护点】
一种测定非对称二甲基精氨酸浓度的试剂盒,其包括:试剂1:包括包被抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的乳胶颗粒;试剂2:包括包被非对称二甲基精氨酸‑惰性载体偶联物的乳胶颗粒。
【技术特征摘要】
1.一种测定非对称二甲基精氨酸浓度的试剂盒,其包括:试剂1:包括包被抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的乳胶颗粒;试剂2:包括包被非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物的乳胶颗粒。2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的试剂1包括包被抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的乳胶颗粒、缓冲液、免疫凝集促进剂、稳定剂和防腐剂;较佳地,所述的试剂1由包被抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的乳胶颗粒、缓冲液、免疫凝集促进剂、稳定剂和防腐剂组成;和/或,所述的试剂2包括包被非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物的乳胶颗粒、缓冲液、稳定剂和防腐剂;较佳地,所述的试剂2由包被非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物的乳胶颗粒、缓冲液、稳定剂和防腐剂组成。3.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体为Acris Antibodies,Inc.公司的AP02005PU-N ADMA抗体;所述的非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物是将非对称二甲基精氨酸与惰性载体通过化学交联剂进行化学交联获得;所述的惰性载体包括血蓝蛋白KLH、卵清蛋白OVA和牛血清白蛋白BSA中的一种或多种;所述的化学交联剂为EDAC和/或Sulfo-NHS。4.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,试剂1中,所述的包被抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的乳胶颗粒通过下述步骤制得:乳胶颗粒表面先经过EDAC和Sulfo-NHS活化,然后加入抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体,抗体的氨基端与活化后的乳胶颗粒产生交联反应,即得;所述的包被抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的乳胶颗粒较佳地通过下述步骤制得:将乳胶颗粒加入到MES缓冲溶液中,搅拌条件下加入EDAC和Sulfo-NHS,室温反应,离心除去上清液,加入含有抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的pH 8.3硼酸缓冲液,室温包被,再加入含甘氨酸的pH 8.3硼酸缓冲液,终止反应,离心清洗,超声分散,即得;和/或,试剂2中,所述的包被非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物的
\t乳胶颗粒通过下述步骤制得:乳胶颗粒表面先经过EDAC和Sulfo-NHS活化,然后加入非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物,偶联物的氨基端与活化后的乳胶颗粒产生交联反应,即得;所述的包被非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物的乳胶颗粒较佳地通过下述步骤制得:将乳胶颗粒加入到MES缓冲溶液中,搅拌条件下加入EDAC和Sulfo-NHS,室温反应,离心除去上清液,加入含有非对称二甲基精氨酸-惰性载体偶联物的pH 8.3硼酸缓冲液,室温包被,再加入含甘氨酸的pH 8.3硼酸缓冲液,终止反应,离心清洗,超声分散,即得;试剂1和试剂2中,所述的乳胶颗粒选自粒径为50~500nm、表面带有化学交联基团的聚苯乙烯核壳结构的球状聚合物;所述的乳胶颗粒较佳地为PolyMicrospheres公司的型号为CB0172E、CB0100E、CB0213E、CB0104D或CB0267D羧基微球;所述的乳胶颗粒的质量体积浓度较佳地为0.01%~0.5%,更佳地为0.05%~0.3%。5.如权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,试剂1和试剂2中,所述的缓冲液为3-(N-吗啉基)-丙磺酸缓冲液、3-...
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