一种具有杀灭松材线虫活性的独活提取物制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种具有杀灭松材线虫活性的独活提取物制备方法及其应用。取独活干粉，经无水乙醇室温浸提，将提取液采用减压蒸馏浓缩得棕色粗提物，乙醇粗提物经乙酸乙酯‑水分液萃取三次，合并乙酸乙酯相，减压蒸馏获得具有强杀松材线虫活性的独活乙酸乙酯提取物，利用柱层析、重结晶等分离方法从中分离得到蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯、佛手柑内酯、花椒毒素等4种具有明显杀松材线虫活性的香豆素类化合物。独活提取物在1mg/mL浓度下72小时后对松材线虫的校正死亡率达95.27％。在本发明专利技术操作方法简单，原料来源便捷，成本低廉，高效低毒，安全环保，独活提取物在控制松材线虫病方面具有开发潜力，可应用于杀松材线虫的天然制剂。

Angelica extract preparation method and application thereof have the killing activity of pine wood nematode

The present invention relates to angelica extract preparation method and application thereof have the killing activity of pine wood nematode. Take angelica powder, after ethanol extraction at room temperature, the extract was concentrated by vacuum distillation to obtain Brown crude extracts, ethanol extracts of the three ethyl acetate water liquid extraction with ethyl acetate, and vacuum distillation to obtain the ethyl acetate extract of Angelica strong nematicide activity, using column chromatography and recrystallization separation methods such as isolated Osthol, two alcohol ester, hydrogen European mountain Qin Angelica bergapten, Xanthotoxin and other 4 kinds of coumarin compounds has obvious nematicide activity from. Lerivisiticum extract at the concentration of 1mg/mL 72 hours after the corrected mortality of Bursaphelenchus xylophilus reached 95.27%. The invention is simple in operation, the source of raw materials convenient, low cost, high efficiency and low toxicity, safety and environmental protection, has the potential of pubescent angelica root extract in controlling pine wilt disease, natural preparation can be used to kill pine wood nematode.

【技术实现步骤摘要】
一种具有杀灭松材线虫活性的独活提取物制备方法及其应用
：本专利技术涉及一种具有杀灭松材线虫活性的独活提取物制备方法及其应用，属于林业病虫害防治

技术介绍
：松材线虫病，又称松萎蔫病(Pinewiltdisease，PWD)，是一种极具毁灭性的松树病害,松树一经感染，蔓延迅速，涉及数十种松属植物，世界多个国家存在疫情。我国内地于1982年在南京中山陵园风景区首次发现松材线虫病，现已扩展至江苏、安徽、浙江、福建、江西、山东、河南、湖北、湖南、广东、广西、重庆、四川、贵州、云南、陕西等16个地区，蔓延迅速，发生面积不断扩大，危害程度不断加重，对我国的松树资源、自然景观和生态环境构成了严重威胁。松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)是松材线虫病主要的病原，松材线虫的防控对于控制松材线虫病至关重要。目前防控松材线虫最直接、有效的杀线虫剂主要是广谱性合成药剂，线虫易产生耐药性，且存在高毒、高残留、污染环境、对非靶标有益生物构成威胁等缺陷，这使得生态友好的天然杀线剂的开发显得尤为迫切。自然界植物资源丰富，植物源杀线剂近些年一直是松材线虫病研究的热点。独活是伞形科植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有杀灭松材线虫活性的独活提取物制备方法，其特征在于按照如下步骤操作：第一步，取干燥的独活于植物粉碎机中粉碎得独活干粉，加入无水乙醇室温下超声波震荡辅助避光浸提48小时，其中，独活干粉与乙醇料液比为50g:1L，然后真空过滤去渣，得乙醇提取液，重复提取一次，合并提取液；第二步，提取液采用旋转蒸发仪减压蒸馏浓缩得棕色乙醇粗提物；第三步，乙醇粗提物经体积比为1：1的乙酸乙酯‑水分液萃取三次，合并乙酸乙酯相；第四步，减压蒸馏，获得具有强杀松材线虫活性的独活提取物；所述独活提取物进行硅胶柱层析分离，采用石油醚‑乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱，石油醚：乙酸乙酯体积比＝15:1，10:1,9:1,8:1,6...

【技术特征摘要】
1.一种具有杀灭松材线虫活性的独活提取物制备方法，其特征在于按照如下步骤操作：第一步，取干燥的独活于植物粉碎机中粉碎得独活干粉，加入无水乙醇室温下超声波震荡辅助避光浸提48小时，其中，独活干粉与乙醇料液比为50g:1L，然后真空过滤去渣，得乙醇提取液，重复提取一次，合并提取液；第二步，提取液采用旋转蒸发仪减压蒸馏浓缩得棕色乙醇粗提物；第三步，乙醇粗提物经体积比为1：1的乙酸乙酯-水分液萃取三次，合并乙酸乙酯相；第四步，减压蒸馏，获得具有强杀松材线虫活性的独活提取物；所述独活提取物进行硅胶柱层析分离，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱，石油醚：乙酸乙酯体积比＝15:1，10:1,9:1,8:1,6:1,5:1,4:1,2:1,1:1,1:3,1:4；1:6,1:8,1:10,100％乙酸乙酯，洗脱组分经硅胶薄层层析GF254检测，合并相同组分，得到10个组分：Fr.1-Fr.10，经杀线活性测试确定F5和F6为高活性组分，1mg/mL浓度下在72小时校正死亡率>50％；对两组分进一步分离纯化，F5组分再进行硅胶柱层析，以体积比为8：1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，得到两个组分，分别于石油醚-乙酸乙酯中重结...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭群群，李荣贵，杜桂彩，梁晨燕，李咏幸，张明学，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东,37