本发明专利技术提供了一种间充质干细胞提取物、其提取方法和应用。所述提取方法包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养人脐血间充质干细胞，并分离人脐血间充质干细胞和培养液；B、将人脐血间充质干细胞裂解，并加入所述培养液得到蛋白悬液；C、将所述蛋白悬液浓缩，得到浓缩液，即为间充质干细胞提取物浓缩液。利用所述提取方法得到的间充质干细胞提取物中包含GDF11、IGFBP‑1和IGFBP‑2在内的许多强效抗衰老因子，能够应用于美容产品中，起到对皮肤抗衰老修复和美容作用。
Mesenchymal stem cell extract, extraction method and application thereof
The invention provides a mesenchymal stem cell extract, an extraction method and application thereof. The extraction method comprises the following steps: the cultured human umbilical cord blood mesenchymal stem cells without A, MSC, and isolation of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells and culture medium; B, human umbilical cord blood mesenchymal stem cell lysis, and added to the culture medium was C, the protein suspension; the protein suspension concentrate, concentrate is obtained, mesenchymal stem cell extract concentrate. Was extracted by using the method of mesenchymal stem cell extract contains GDF11, IGFBP 1 and IGFBP 2, many potent anti-aging factor, can be used in cosmetic products, to repair skin anti-aging and beautifying function.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种间充质干细胞提取物、其提取方法和应用。
技术介绍
成体干细胞维持着人体组织的新陈代谢，他们本身处于较为原始的状态，能够在环境信号的调节下增殖分裂，并分化为最终的功能性细胞。为维持干细胞的原始状态，干细胞自身分泌了许多调控性蛋白和信号因子。已经证明干细胞自身的蛋白成分和分泌组分对人的皮肤再生和修复过程有极好的促进作用。科学数据表明，干细胞随着人的年龄增长无论从数量和质量上都有所降低，这是人体衰老的关键因素。生存时间和复制次数的增加，会导致干细胞内基因水平上错误信号的积累，这意味着，即便能够获得这些细胞并实现扩增，这些细胞的干细胞特性也受到了损害。而目前的美容产品，无法提供干细胞抗衰老因子，从而造成皮肤抗衰老修复和美容效果有限。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术提供了一种间充质干细胞提取物、其提取方法和应用。利用所述提取方法得到的间充质干细胞提取物中包含GDF11、IGFBP-1和IGFBP-2在内的许多强效抗衰老因子，能够应用于美容产品中，起到对皮肤抗衰老修复和美容作用。本申请的专利技术人，从获得年轻态的间充质干细胞出发进行研究，脐血是胎儿组织因此脐血组织中的间充质干细胞是最年轻的一类干细胞，经专利技术人研究发现，人脐血间充质干细胞中包括高浓度的GDF11、IGFBP-1和IGFBP-2在内的许多强效抗衰老因子，故对其进行提取浓缩后，能够应用于美容产品中。本专利技术所采用的技术方案为：一种间充质干细胞提取物的提取方法，包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养人脐血间充质干细胞，并分离人脐血间充质干细胞和培养液；B、将人脐血间充质干细胞裂解，并加入所述培养液得到蛋白悬液；C、将所述蛋白悬液浓缩，得到浓缩液，即为间充质干细胞提取物浓缩液。所述间充质干细胞提取物浓缩液中含有多种强效抗衰老因子。为提高人脐血间充质干细胞的培养效率，优选的技术方案是，步骤A中，所述MSC无血清培养基还含有浓度为10ng/mL的bFGF和10ng/ml的EGF。进一步地，步骤A中，所述人脐血间充质干细胞为离体培养3代以后的人脐血间充质干细胞，其中90％以上的细胞的表面抗原表型为：CD34-、CD45-、CD3-、CD73+、CD105+且CD90+。为使人脐血间充质干细胞充分裂解，优选的技术方案是，步骤B中，将109人脐血间充质干细胞中加入1-10mL的1×PBS(pH值＝7.4)中混匀后，加入0.1-5ug蛋白酶抑制剂，并破碎离心，离心后去上清液，将上清液加入1L所述培养液中得到蛋白悬液。根据本专利技术的一个实施例，所述1×PBS的pH值为7.4。为进一步提高最终产品中强效抗衰老因子的含量，优选的技术方案是，步骤C中，将所述蛋白悬液使用醋酸纤维素膜或透析袋分离浓缩相对分子质量为100-1000的物质，得到间充质干细胞提取物浓缩液。为进一步便于保存和使用，还可以将所述间充质干细胞提取物制成冻干粉，具体操作为：步骤C中，将所述蛋白悬液浓缩后，将浓缩液冷冻干燥，得到间充质干细胞提取物冻干粉。本专利技术还提供了一种间充质干细胞提取物，所述间充质干细胞提取物由上述提取方法提取而成。本专利技术还公开了所述间充质干细胞提取物作为美容原料的应用。所述间充质干细胞提取物能够作为添加剂添加至美容产品中，使用不同的间充质干细胞提取物时，在美容产品的含量也不同：当所述间充质干细胞提取物为间充质干细胞提取物浓缩液时，所述间充质干细胞提取物浓缩液在美容产品中的质量分数为10-100％；当所述间充质干细胞提取物为间充质干细胞提取物冻干粉时，所述间充质干细胞提取物冻干粉在美容产品中的含量为2-1000ug/mL。所述美容产品为面霜、润肤露、爽肤水或面膜原料。本专利技术提供了一种间充质干细胞提取物、其提取方法和应用。利用所述提取方法得到的间充质干细胞提取物中包含GDF11、IGFBP-1和IGFBP-2在内的许多强效抗衰老因子，能够应用于美容产品中，起到对皮肤抗衰老修复和美容作用。具体实施方式下面结合实施例，更具体地说明本专利技术的内容。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。实施例1一种间充质干细胞提取物的提取方法，包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养离体培养3代以后的人脐血间充质干细胞，所述MSC无血清培养基还含有浓度为10ng/mL的bFGF和10ng/ml的EGF，其中90％以上的细胞的表面抗原表型为：CD34-、CD45-、CD3-、CD73+、CD105+且CD90+；培养完成后分离人脐血间充质干细胞和培养液；其中，离体培养液的成分为：向培养α-MEM培养基中添加0.5％的Pen-Strep，100ng/mL的b-FGF，5ng/mL的EGF和100ng/mL的TGF-β；其中，α-MEM为α-最小必需极限培养基；Pen-Strep为青霉素-链霉素，b-FGF为b-成纤维细胞生长因子，EGF为表皮细胞生长因子，TGF-β为转化生长因子。B、将109人脐血间充质干细胞中加入1mL的1×PBS(pH值＝7.4)中混匀后，加入5ug蛋白酶抑制剂，放置于冰上在超声破碎仪中破碎3分钟，破碎后在20000rpm离心15min，离心后去上清液，将上清液加入1L所述培养液中得到蛋白悬液；C、将所述蛋白悬液使用醋酸纤维素膜分离浓缩相对分子质量为100-1000的物质，得到间充质干细胞提取物浓缩液。实施例2一种间充质干细胞提取物的提取方法，包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养离体培养3代以后的人脐血间充质干细胞，所述MSC无血清培养基还含有浓度为10ng/mL的bFGF和10ng/ml的EGF，其中90％以上的细胞的表面抗原表型为：CD34-、CD45-、CD3-、CD73+、CD105+且CD90+；培养完成后分离人脐血间充质干细胞和培养液；其中，离体培养液的成分为：向培养α-MEM培养基中添加2％的Pen-Strep，5ng/mL的b-FGF，100ng/mL的EGF和5ng/mL的TGF-β；其中，α-MEM为α-最小必需极限培养基；Pen-Strep为青霉素-链霉素，b-FGF为b-成纤维细胞生长因子，EGF为表皮细胞生长因子，TGF-β为转化生长因子。B、将109人脐血间充质干细胞中加入10mL的1×PBS(pH值＝7.4)中混匀后，加入0.1ug蛋白酶抑制剂，放置于冰上在超声破碎仪中破碎10分钟，破碎后在10000rpm离心25min，离心后去上清液，将上清液加入1L所述培养液中得到蛋白悬液；C、将所述蛋白悬液使用截留分子量为100-1000的透析袋分离浓缩相对分子质量为100-1000的物质，得到间充质干细胞提取物浓缩液。实施例3一种间充质干细胞提取物的提取方法，包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养离体培养3代以后的人脐血间充质干细胞，所述MSC无血清培养基还含有浓度为10ng/mL的bFGF和10ng/ml的EGF，其中90％以上的细胞的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养人脐血间充质干细胞，并分离人脐血间充质干细胞和培养液；B、将人脐血间充质干细胞裂解，并加入所述培养液得到蛋白悬液；C、将所述蛋白悬液浓缩，得到浓缩液，即为间充质干细胞提取物浓缩液。
【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：A、使用MSC无血清培养基培养人脐血间充质干细胞，并分离人脐血间充质干细胞和培养液；B、将人脐血间充质干细胞裂解，并加入所述培养液得到蛋白悬液；C、将所述蛋白悬液浓缩，得到浓缩液，即为间充质干细胞提取物浓缩液。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤A中，所述MSC无血清培养基还含有浓度为10ng/mL的bFGF和10ng/ml的EGF。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤A中，所述人脐血间充质干细胞为离体培养3代以后的人脐血间充质干细胞，其中90％以上的细胞的表面抗原表型为：CD34-、CD45-、CD3-、CD73+、CD105+且CD90+。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤B中，将109人脐血间充质干细胞中加入1-10mL的1×PBS中混匀后，加入0.1-5ug蛋白酶抑制剂，并破碎离心，离心后去上清液，将上清液加入1L...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙博，
申请(专利权)人：北京雨泽瑞清生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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