一种用金磁微粒纯化植物种子基因组DNA的方法技术

本发明专利技术提供一种利用磁性纳米复合材料进行简便、快速纯化多种植物种子基因组DNA的方法。本发明专利技术样品裂解是取植物种子样本，加入200～800μl含有质量体积比为2％～5％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2％～5％的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和体积分数为0.5％～2％β-巯基乙醇的裂解液；混匀后于水浴中充分裂解5～30min，再加入10～50μl的10mg/ml?RNase溶液，得到含有基因组DNA的样品裂解液。本发明专利技术采用的裂解液，适用于所有植物种子。得到的基因组DNA不含有抑制下游PCR反应的抑制剂；DNA质量高、得率高，DNA完整性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取植物种子基因组DNA的方法。
技术介绍
转基因技术自70年代问世以来，已在多种作物品种改良得到应用。利用该项技术，不仅在品种间，而且在不同科属种间可以进行性状转移；克服远缘杂交的不亲合性；改良作物品质；提高作物抗逆性；从而实现多种目标性状的转移。实践证明，该项技术在作物品种改良方面具有广阔的应用前景，是一种行之有效的育种新途径。在该技术实现过程中， 对植物种子基因组DNA提取及纯化非常关键。核酸纯化方法大体上可分为两种，一种是酚氯仿抽提液相纯化法，一种是固相纯化法。酚氯仿抽提法主要通过有机相-水相分配来除去杂质达到纯化核酸的目的。固相纯化法则通过核酸与固相介质的非特异可逆性结合，从而达到纯化核酸的目的，其结合方式主要包括吸附结合和离子交换结合。传统的几种植物种子基因组DNA提取方法存在一些缺点。如CTAB法和SDS法需要酚氯仿反复抽提与离心，耗费大量的时间，人力、物力。此外，现有的植物种子基因组DNA 纯化的文献报道基本上都是针对一种植物，如针对含多糖较高的植物如水稻、含脂质较多的植物如棉花籽或含蛋白较多的植物如黄豆等开发的有针对性的方法。因为不同植物的组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用金磁微粒纯化植物种子基因组ＤＮＡ的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：１）制备含有基因组ＤＮＡ的样品裂解液取植物种子样本，加入２００～８００μｌ含有质量体积比为２％～５％的聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）、２％～５％的十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）和体积分数为０．５％～２％β－巯基乙醇的裂解液；混匀后于水浴中充分裂解５～３０ｍｉｎ，再加入１０～５０μｌ的１０ｍｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ溶液，得到含有基因组ＤＮＡ的样品裂解液；２）用氯仿抽提后离心用０．６ｍｌ～１．２ｍｌ氯仿在所述样品裂解液中进行样本抽提，然后８０００ｒｐｍ～１３０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，得到含有基因组ＤＮＡ的上清；３）结合取４０...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔亚丽，魏旭旭，晁旭，张景阁，赵稳操，李谭杰，
申请(专利权)人：西安金磁纳米生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：87