一种快速提取悬钩子属植物总RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速提取悬钩子属植物总RNA的方法；其特征在于取少量悬钩子属植物材料，液氮冷冻下研磨成粉，经过可选的去糖、离心步骤，或直接加入碱性细胞裂解液，进行温浴裂解；完成后通过酚-弱酸-氯仿抽提，离心去除蛋白以及绝大部分基因组DNA；上清液中加入醇进行沉淀；离心收集RNA沉淀，经过乙醇洗涤、风干后用DEPC灭菌水溶解，-80℃保存。本发明专利技术避免了使用LiCl沉淀，一步抽提去除蛋白、基因组DNA，用醇沉淀RNA，操作简单，整个过程在3小时内完成；本方法提取悬钩子属植物总RNA只需要0.1-0.2g材料，增加可选去糖步骤，适用于悬钩子属植物树莓、黑莓等多种植物材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物分子生物学领域，具体涉及一种快速提取悬钩子属植物总RNA的方法
技术介绍
获得高质量总RNA是进行分子生物学研究如基因表达水平研究、基因操作如RNA 干扰、转基因等下游研究的前提条件。悬钩子属植物的树莓、黑刺莓中富含有花青素苷、原花青素等多酚类次生代谢产物，这些物质给总RNA提取带来了重重困难酚类化合物极易被氧化成褐色物质，然后与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失，或形成不溶复合物导致在用氯仿抽提时RNA的大量丢失。商业试剂盒，比如Trizol试剂盒在应对该类植物总RNA提取时显得无能为力，而传统的总RNA提取方法如CTAB、SDS等需要较多的植物材料，且需要使用多步抽提来去除多糖、蛋白和基因组DNA。目前使用最多的方法是在植物细胞破碎后，使用LiCl进行RNA的选择性沉淀，达到去除基因组DNA或多糖的目的。但该方法最大的缺点是耗时太长，一般都选择沉淀过夜。若改成醇沉淀，DNA污染特别严重，需要进一步使用DNase处理，然后经过酚-氯仿抽提以灭活DNase，结果造成RNA的大量损失。另外，LiCl沉淀后的洗脱过程要求严格，因为残留的Li+，Cl_会对后续的逆转本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种快速提取悬钩子属植物总ＲＮＡ的方法，其特征在于以下操作：（１）取２ｍｌ离心管，向离心管中加入７００～１０００μｌ去糖缓冲液，并加入５～１５μｌ　β－巯基乙醇，于－２０℃预冷５～１０ｍｉｎ；（２）取新鲜植物材料或经液氮速冻后－８０℃保存的植物材料０．１～０．１５ｇ，加入０．１ｇ交联聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷冻条件下研磨成粉状，迅速转移至步骤（１）的离心管中，温柔上下颠倒混匀后于冰上静置１０ｍｉｎ；（３）在４℃下按照３２００×ｇ离心５～１０ｍｉｎ；（４）彻底去除步骤（３）离心所得上清液，向沉淀中加入７００～１０００μｌ　６５℃预热的细胞裂解液，涡旋１ｍｉｎ，于５５～６５℃保温２０～３０ｍｉ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汤浩茹，陈清，刘泽静，王小蓉，余昊唯，贾慧峰，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：51