在受感染的人宿主中治疗乙型肝炎病毒感染的方法，包括给所说宿主施用有效量的１，５－二脱氧－１，５－亚氨基－Ｄ－葡糖醇的Ｎ－烷基衍生物以抑制乙型肝炎病毒毒粒的复制和分泌，其中所说烷基基团含有３至６个碳原子。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
相关申请本申请是1994年1月13日递交的共同未决申请流水号08/181,519的后续申请。
技术介绍
本专利技术涉及抑制乙型肝炎病毒的新方法，更具体地说，本专利技术涉及使用1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-D-葡糖醇的N-烷基衍生物以抑制受所说病毒感染的细胞中乙肝病毒的复制和分泌。乙型肝炎病毒(HBV)是急性和慢性肝病的病原体。尽管可得到有效的疫苗，但世界上仍有3亿多人受病毒的慢性感染。对他们而言，疫苗没有治疗作用。根据理查德.杜马博(国家传染病基金会的高级官员)的报道，仅美国每年估计有300,000例HBV感染发生。受HBV慢性感染的病人中有25-40％会发展成严重的肝病。因此，发现有效的抗HBV疗法很重要。α-干扰素已被用于治疗HBV感染，在某些病人中结果是乐观的。目前美国FDA允许的慢性HBV感染的唯一治疗药物是重组干扰素α-2b(内含子A，先灵-普劳分司)。由于20个病人中有6个出现与药物相关的肝脏障碍，故最近停止了使用核苷类似物fialuridine治疗慢性乙型肝炎的临床试验。因此很需要安全的乙型肝炎的药物治疗。最新报道表明病毒编码的DNA聚合酶是令人感兴趣的目标，所述DNA聚合酶行使逆转录酶的作用。尚未有针对其他病毒介导过程的抗病毒干涉方法。针对HBV的有效抗病毒疗法可能涉及多种策略，包括影响宿主免疫系统的药剂以及那些影响病毒生命周期之不同步骤的药剂。因此探查病毒生命周期中其他非聚合酶介导的步骤受干涉作用的伤害的可能性是令人感兴趣的。1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-D-葡糖醇(也已知为1-脱氧野尻霉素或DNJ)及其N-烷基衍生物是已知的N-连接寡糖加工酶，α-葡糖苷酶I和II的抑制剂。Saunier等，生物化学杂志257，14155-14161(1982)；Elbein，生化研究年鉴56，497-534(1987)。作为葡糖糖类似物，它们也具有抑制葡糖基转移酶的潜力。Newbrun等，口腔生物学进展28，516-536(1983)；Wang等，四面体通讯34，403-406(1993)。它们抗葡糖苷酶的抑制活性导致了这些化合物作为抗高血糖剂和抗病毒剂的开发。例见PCT国际申请WO87/03903和美国专利4,065,562；4,182,767；4,533,668；4,639,436；4,849,430；4,957,926；5,011,829；和5,030,638。到目前为止，由于缺乏允许的为检测目的的细胞培养系统，故有关抑制剂对乙型肝炎病毒(HBV)的作用的研究很少。即至今为止，没有繁殖和生产性地用病毒感染组织培养物的能力已成为发现有用抗HBV剂的严重局限。在一项研究中已报道了N-甲基脱氧野尻霉素可抑制小鼠肝炎病毒(MHV)的形成，因此细胞表面E2的出现得以延迟。见Repp等，生物化学杂志280，15873-15879(1985)；Datema等，临床药理学33，221-286，260(1987)。然而MHV与乙型肝炎病毒(HBV)不相关。在一个方面，HBV是嗜肝DNA病毒家族的成员，它是人体中小的病毒病原体。HBV大小约为42nm，其DNA基因组的大小为3.5Kb。另一方面，MHV是冠状病毒家族的成员，它是大的含RNA病毒，尽管可导致上呼吸道感染的人冠状病毒病原体是常见的，但MHV不是人的病原体。MHV的大小约为100-150nm(相当多效)，其RNA基因组的大小约为30Kb。HBV和MHV之间几乎无相似性。参照K.Holmes，病毒学，第二版，B.Fields编辑PP.841-856，Raven Press，纽约，纽约州，1990可得到冠状病毒(包括MHV)的其他背景信息和完整的描述。最近有两个不同的科学团体报道丁型肝炎病毒(HDV)的分泌并不依赖于HBVsAg的糖基化，从中可明显看出不能从一种病毒的结果预测另一种病毒的结果。W.Hui-Lin等，摘要115，和C.Gurean等，摘要117，1994年会议提交的论文摘要，“乙肝病毒的分子生物学”10月3-6日，1994年。巴斯德研究所，巴黎，法国。HDV并未指定其自身的被膜蛋白，它与HBV感染相同的细胞，并使用HBVS抗原(HBV被膜蛋白)以制成感染性的、成熟的HDV颗粒。区别在于HBV的分泌依赖糖基化作用和聚糖修饰。即尽管HBV和HDV由相同的被膜蛋白组成，但HDV的分泌不依赖于糖基化作用，而HBV对糖基化作用非常敏感。Pizer等，病毒学杂志34，134-153(1980)；Datema等，文献同上，270页中描述了糖基化作用抑制剂衣霉素对乙型肝炎病毒细胞培养物系统的作用。然而，衣霉素不必要地并完全地阻止了N-连接的寡糖类加入到新近合成的多肽中。即用衣霉素治疗可导致对蛋白质N-连接糖基化作用的完全抑制，对细胞非常有毒。而且，对受HBV感染的细胞进行衣霉素治疗不会导致HBV分泌的显著降低。本专利技术的简要描述根据本专利技术，提供了一种抑制受乙型肝炎病毒(HBV)感染的细胞中所说病毒的方法。此方法包括用有效量的1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-D-葡糖醇的N-烷基衍生物治疗所说细胞以抑制HBV病毒颗粒的复制和分泌，其中所说烷基基团含有3至6个碳原子。N-烷基基团优选为丁基。在本专利技术较优选的说明实施例中，N-丁基-1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-D-葡糖醇(NB-DNJ)在经稳定转染的Hep G2.2.15细胞和经HBV感染的HepG2细胞中都表现出可抑制HBV颗粒的分泌并可导致HBV DNA的胞内滞留。HepG2细胞是熟知的，广泛分布的，很容易得到的人肝癌细胞。美国专利4,393,133中描述了HepG2细胞系的建立和特征。此细胞系的样品也可得自美国典型培养物保藏中心(Rockville，Maryland)，入藏登记号为ATCC HB 8065，还可得自欧洲动物细胞培养物保藏中心(PortonDown UK)。在Broze和Miletich，美国国家科学院院刊84，1886-1890(1987)和美国专利4,996,852；5,106,833和5,212,091中，这些细胞已被用作多种蛋白质的来源，例如，组织因子抑制剂(TFI)，此抑制剂也已知为与脂蛋白相关的凝聚抑制剂(LACI)。HepG 2.2.15细胞是Hep G2细胞的衍生物，可如Sells等人在美国国家科学院院刊84，1005-1009(1987)中的描述制备。由于以前报道过用衣霉素治疗产生HBV的细胞会导致正常的HBV颗粒分泌，因此本专利技术的方法可抑制HBV颗粒的分泌非常出乎意料。见Grippon等，乙肝病毒分子生物学，圣迭哥，加州，摘要67页(1992)。本专利技术人已发现衣霉素可抑制HBV病毒颗粒而不是亚病毒颗粒的分泌。经由本专利技术方法的治疗而导致的胞内HBV DNA的增加也是出乎意料的。由于每分子HBV被膜蛋白仅含有一个或两个N-连接的聚糖，故DNJ的N-烷基衍生物抑制这种适度(由重量计)糖基化的蛋白质及它们的病毒粒子(毒粒)产物的分泌的能力与它们对含有重度糖基化之被膜蛋白的HIV的分泌的较小作用相比是令人惊奇的。还惊奇地发现含有大的共羧基末端的蛋白质LHB和中等大小MHB的HBV病毒粒子和颗粒比富含小SHB的颗粒对N-丁基DNJ更加敏感。使用规定的DNJ N-烷基衍生物的另一个本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：T·M·布罗克，B·S·布卢姆堡，R·A·德韦克，
申请(专利权)人：G·D·瑟尔公司，孟山都公司，
类型：发明
国别省市：
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