一种利用二乙氨乙基葡聚糖提高基因转染猪皮转染效率的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用二乙氨乙基葡聚糖提高基因转染猪皮转染效率的方法，包括如下步骤：１）制备待转染的猪皮肤；２）使用浓度为５００－５０００μｇ／ｍｌ二乙氨乙基葡聚糖对１０↑［８］ＰＦＵ／ｍｌ　Ａｄ５重组腺病毒载体进行震荡混合，孵育后制备成转染液；３）将步骤２）制备的转染液对步骤１）制备的猪皮肤进行转染。本发明专利技术中二乙氨乙基葡聚与Ａｄ５重组腺病毒载体混合后转染猪皮肤细胞时，其携带的阳离子可中和腺病毒载体和细胞表面的阴离子，降低了腺病毒载体和细胞表面之间的静电排斥力，从而增加腺病毒载体与猪皮肤细胞的相互接触，提高腺病毒载体对猪皮肤的转染效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种提高携带外源基因的 重组腺病毒载体转染猪皮效率的方法。
技术介绍
烧伤是一类发生率及致残率均较高的特殊类型创伤，其根本问题就 是创面问题，如果烧伤创面得不到及时有效的覆盖、封闭，必将引起患者机体内环境的紊乱、感染及多脏器功能障碍的发生；此外，还可能出 现创面的非生理性愈合，使疤痕形成增加，残疾程度加剧。因此，对烧 伤创面进行皮肤移植的研究是现代烧伤治疗的迫切需要；也是烧伤研究 的热点及难点。深度烧伤创面需经皮肤移植才能愈合，而大面积、特大面积烧伤患 者自体皮源严重不足，需经非自体(同种异体或异种)皮覆盖创面方能取 得较好的临床效果，同种异体皮(主要是尸体皮)是目前烧伤创面治疗中 公认效果较好的生物敷料，但由于来源和伦理等多种条件限制，同种异 体皮无法满足临床需求。猪皮由于与人皮在组织结构和生理功能上的高 度相似性，是临床使用最为广泛的异种皮肤，但由于猪和人之间的种属差 异，其排斥反应比较严重，无法起到长期覆盖作用。专利申请号为00103528.2,专利技术名称是一种用重组基因转染的异 体皮肤，，的专利申请公开了利用传统的Ad5腺病毒载体携本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用二乙氨乙基葡聚糖提高基因转染猪皮转染效率的方法，其特征在于包括如下步骤：　１）制备待转染的猪皮肤；　２）使用浓度为５００－５０００μｇ／ｍｌ二乙氨乙基葡聚糖对１０８ＰＦＵ／ｍｌ　Ａｄ５重组腺病毒载体进行震荡混合，孵育后制备成转染 液；　３）将步骤２）制备的转染液对步骤１）制备的猪皮肤进行转染。

【技术特征摘要】
1、一种利用二乙氨乙基葡聚糖提高基因转染猪皮转染效率的方法，其特征在于包括如下步骤1)制备待转染的猪皮肤；2)使用浓度为500-5000μg/ml二乙氨乙基葡聚糖对108PFU/ml Ad5重组腺病毒载体进行震荡混合，孵育后制备成转染液；3)将步骤2)制备的转染液对步骤1)制备的猪皮肤进行转染。2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述猪皮肤是巴马香猪 皮肤。3、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述猪皮肤是小于6个 月猪龄的猪皮肤。4、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述猪皮肤是4-6月龄 的巴马香猪皮肤。5、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述猪皮肤的厚度为 0. 1-1. 0毫米。6、 根据权利要求l所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏泓，葛良鹏，刘志，吴军，
申请(专利权)人：重庆宗申军辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]