改良疫苗制造技术

本发明专利技术揭示了改进型的疫苗，它包含与调控元件操作性连接的核苷酸序列，所述序列编码的是ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＴＮＦ－α，ＴＮＦ－β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８和／或ＢＬ－１。改进型疫苗包括ＤＮＡ疫苗、用于传递外源抗原的重组疫苗和减毒活疫苗。本发明专利技术还揭示了免疫接种个体的方法。还揭示了药物组合物，该组合物包含编码一种或多种免疫调节蛋白的核酸分子，所述的调节蛋白选自ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＴＮＦ－α，ＴＮＦ－β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８和ＢＬ－１。本发明专利技术还揭示了一种免疫调节蛋白，ＢＬ－１，和编码ＢＬ－１的核酸分子。还揭示了制造和使用ＢＬ－１的方法。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫疗法组合物和方法，以及改良的保护性和治疗性疫苗，还涉及用于预防性和/或治疗性诱导抗抗原免疫应答的改进方法。
技术介绍
疫苗可用于免疫个体以抵抗靶抗原，例如病原性抗原或与类疾病中涉及的细胞相关抗原。与参与人类疾病细胞相关的抗原包括癌相关性肿瘤抗原和参与自身免疫疾病的细胞相关抗原。各种免疫接种策略总的目标都是诱导特异性的免疫应答反应，这样的应答赋予被免疫者对某给定病原的终身保护。为达此目的的一个主要难题是，由某一种病原及其引起的保护作用的相互关系会因感染性因子的变化而变化。所以，一个临床上更有效的疫苗应该诱导对其靶病原产生特异性更强的免疫应答。根据已知的保护作用与特定病原的相互关系需要设计将免疫接种策略一直“聚焦”于特定的病原。在设计上述疫苗的过程中已经发现，能在接种个体的细胞内产生靶抗原的疫苗是能有效诱导免疫系统细胞免疫的疫苗。具体地说，减毒活疫苗、采用非致病性载体和DNA疫苗的重组疫苗都能在被接种个体的细胞内产生抗原，由此诱导免疫系统的细胞免疫。另一方面，只包含蛋白质的亚单位疫苗和死的或灭活的疫苗，诱导的只是体液应答反应，却不能诱导良好的细胞免疫应答反应。为了治疗病原感染、癌症或自身免疫病，常常需要细胞免疫应答反应来提供抵抗病原感染的保护力和有效的免疫介导治疗。所以，较好的是能够在免疫接种个体的细胞内产生靶抗原的疫苗，例如减毒活疫苗、采用无致病性载体和DNA疫苗的重组疫苗。核酸免疫是一种新的接种技术，它将编码某特定免疫原的DNA构建物递送给宿主。DNA疫苗除了能够同时诱导抗原特异性细胞和体液免疫应答之外，它还可能通过免疫学上重要分子的共同传递而操纵所产生的免疫应答反应。虽然上述疫苗通过预防性或治疗性免疫接种个体常能有效地抵抗病原感染或人体疾病，但仍然需要改进的疫苗，仍然需要产生增强的免疫应答的组合物和方法。专利技术概述本专利技术涉及基因构建物，它包含编码免疫调节蛋白的核苷酸序列，所述的调节蛋白可给予正在接受预防性或治疗性接种或治疗性免疫调节疗法的个体。这些免疫调节蛋白包括人体蛋白IL-12、GM-CSF、IL-1、TNF-α、TNF-β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-15、IL-18和一种新的分子BL-1。本专利技术涉及的基因构建物包括编码IL-12、GM-CSF、IL-1、TNF-α、TNF-β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-15、IL-18或BL-1的核苷酸序列；或者编码IL-12、GM-CSF、IL-1、TNF-α、TNF-β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-15、IL-18或BL-1中不少于两个的核苷酸序列。本专利技术希望，基因构建物能够包含同一核苷酸序列的多份拷贝。本专利技术涉及个体免疫接种的方法，即通过给予个体疫苗组合物导入免疫原并联合导入基因构建物，该基因构建物包括编码一种或多种免疫调节蛋白，从而可得到增强的和/或更理想的免疫应答的核苷酸序列。而且本专利技术还涉及调节个体免疫应答的方法，即给予包含一个或多个免疫调节蛋白编码核苷酸序列的基因构建物。对于免疫应答的调节可以是疫苗接种程序中的一个步骤其中将疫苗组合物和促进一种免疫应答形式的免疫调节蛋白共同给予患者，然后将疫苗组合物和促进另一种免疫应答形式的免疫调节蛋白共同给予患者进行加强免疫，由此将患者的免疫应答由主要为Th1转变成Th2，或由Th2转变为Th1。疫苗组合物最好是直接导入体内的质粒。类似地，包含一个或多个免疫调节蛋白编码核苷酸序列的基因构建物也最好是质粒。本专利技术涉及一种质粒，它包含编码人IL-12蛋白质的核苷酸序列，该序列与在真核细胞中表达所必需的调控元件操作性连接，还包含编码免疫原性靶抗原的核苷酸序列，该序列与在真核细胞中表达所必需的调控元件操作性连接。在某些较好的实施方式中，所述的免疫原性靶抗原是病原性抗原、癌相关抗原或与自身免疫疾病相关细胞连接的抗原。在某些实施方案中，该质粒包含一段编码单链人IL-12蛋白质的核苷酸序列，该序列与在真核细胞中表达所必需的调控元件操作性连接。单链IL-12蛋白是一种单体(single)蛋白，它由单一的编码序列编码，而且包括一个连接两亚基的接头。接头具有足够的大小和柔韧性，足以使得此单体蛋白能够折叠成原来功能性二亚基所显示的生物活性构象。本专利技术涉及一种诱导个体内针对某抗原的免疫应答的方法，它包括给予个体某种质粒的步骤，所述质粒包含编码人IL-12蛋白质的核苷酸序列，该序列与在该个体的细胞内表达所必需的调控元件操作性连接，还包含编码靶抗原的核苷酸序列，该序列与在该个体的细胞内表达所必需的调控元件操作性连接。在某些较好的实施方式中，靶抗原是病原性抗原、癌相关抗原或与自身免疫疾病相关细胞连接的抗原。在较好的实施方案中，诱导的针对靶抗原的免疫应答为治疗感染、疾病、紊乱和某些病症(与抗抗原免疫反应所针对的蛋白有关)提供了效果，和/或，诱导产生针对病原或某些细胞的保护性免疫反应，这些细胞所含的蛋白与抗抗原产生的免疫应答有交叉反应。在有些实施方案中，人IL-12蛋白质是一种单链IL-12蛋白。本专利技术涉及一种组合物，它包含多个质粒，它们集合了编码人IL-12两亚基和靶抗原的核苷酸序列，各编码序列分别与基因表达必需的调控元件操作性连接。在某些实施方案中，组合物包含两种质粒第一种质粒包含编码IL-12蛋白的核苷酸序列，它与在真核细胞内表达所必需的调控元件操作性连接；第二种质粒包含编码免疫原性靶抗原的核苷酸序列，它与在真核细胞内表达所必需的调控元件操作性连接。在某些实施方案中，一个质粒包含编码免疫原性靶抗原和人IL-12一个亚基的核苷酸序列，而第二个质粒则包含编码IL-12另一亚基的核苷酸序列。在某些实施方案中，提供3种不同的质粒其一包含编码免疫原性靶蛋白的核苷酸序列，其二包含编码人IL-12的p35亚基的核苷酸序列，另一则包含编码人IL-12的p40亚基的核苷酸序列。在有些实施方案中，该组合物包含两种质粒，第一质粒包含编码单链IL-12蛋白的核苷酸序列，该序列与在真核细胞内表达所必需的调控元件操作性连接，第二质粒包含编码免疫原性靶抗原的核苷酸序列，该序列也与在真核细胞内表达所必需的调控元件操作性连接。本专利技术涉及在个体内诱导针对某抗原的免疫应答的方法，它包括给予个体组合物的步骤，此组合物含有多个质粒，这些质粒集合了编码人IL-12两亚基和靶抗原的核苷酸序列，各编码序列均与基因表达必需调控元件操作性连接。在某些实施方案中，两种或三种上述质粒共同包含编码人IL-12两亚基和免疫原性靶蛋白的核苷酸序列，编码蛋白质的核苷酸序列与在个体的细胞内表达所必需的调控元件操作性连接。在较好的实施方案中，由靶抗原诱导的免疫应答与病原性抗原、癌相关抗原或与自身免疫病相关细胞连接的抗原发生交叉反应。本专利技术涉及免疫接种个体以抵抗病原、癌症或自身免疫病的方法。在较好的实施方案中，靶抗原是病原性抗原、癌相关抗原或与自身免疫病相关细胞连接的抗原。在有些实施方案中，人IL-12是单链IL-12蛋白。本专利技术涉及一种质粒，它所含的核苷酸序列编码人GM-CSF、IL-1α、TNF-α、TNF-β、IL-2、IL-15、IL-18、IL-4、IL-5h IL-10蛋白中一个或多个，所述核苷酸序列与在个体本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，包含第一质粒和第二质粒，其中：　　　　第一质粒包含与启动子操作性连接的编码ＩＬ－１２的ｐ３５亚基的核苷酸序列和与另一启动子操作性连接的编码ＩＬ－１２的ｐ４０亚基的核苷酸序列；　　　　第二质粒包含编码免疫原的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
US 1996-10-23 60/028,6131.组合物，包含第一质粒和第二质粒，其中第一质粒包含与启动子操作性连接的编码IL-12的p35亚基的核苷酸序列和与另一启动子操作性连接的编码IL-12的p40亚基的核苷酸序列；第二质粒包含编码免疫原的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的组合物，其中，第一质粒的与哺乳动物细胞内有效的调控序列操作性连接的核苷酸序列由与第一启动子操作...

【专利技术属性】
技术研发人员：JJ基姆，王宾，JD博耶，DB韦纳，V阿亚沃，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州立大学托管会，
类型：发明
国别省市：US[美国]