ＨＣＶ疫苗制造技术

公开了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疫苗，所述疫苗包含至少两种表位，各表位来自不同的热点表位，其中热点表位定义为包含选自下列序列的肽的表位：ＫＦＰＧＧＧＱＩＶＧ－ＧＶＹＬＬＰＲＲＧＰＲＬＧＶＲＡＴＲＫ，ＧＹＫＶＬＶＬ－ＮＰＳＶＡＡＴ，ＡＹＡＡＱＧＹＫＶＬＶＬＮＰＳＶＡＡＴ，ＤＬＭＧＹＩＰ（Ａ／Ｌ）ＶＧＡＰＬ，ＧＥＶＱＶＶＳ－ＴＡＴＱＳＦＬＡＴＣＩＮＧＶＣＷＴＶ，ＨＭＷＮ－ＦＩＳＧＩＱＹＬＡＧＬＳＴＬＰＧＮＰＡ，ＶＤＹＰＹＲＬ－ＷＨＹＰＣＴ（Ｖ／Ｉ）Ｎ（Ｆ／Ｙ）ＴＩＦＫ（Ｖ／Ｉ）ＲＭＹＶＧ－ＧＶＥＨＲＬ，ＡＡＷＹＥＬＴＰＡＥＴＴＶＲＬＲ，ＧＱＧＷＲＬＬＡＰＩＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧＣＩＶ，ＩＧＬＧＫＶＬＶＤＩＬＡＧＹＧＡＧＶＡＧＡＬＶＡＦＫ，ＦＴＤＮＳＳＰＰＡＶＰＱＴＦＱＶ，ＬＥＤＲＤＲＳＥＬ－ＳＰＬＬＬＳＴＴＥＷ，ＹＬＶＡＹＱＡＴＶＣＡＲＡＱＡＰＰＰ－ＳＷＤ，ＭＳＴＮＰＫＰＱＲＫＴＫＲＮＴＮＲ，ＬＩＮＴＮＧＳＷＨＩＮＲＴＡＬＮＣＮＤＳＬ，ＴＴＩＬＧＩＧＴＶＬＤＱ－ＡＥＴ，ＦＤＳ（Ｓ／Ｖ）ＶＬ－ＣＥＣＹＤＡＧ（Ａ／Ｃ）ＡＷＹＥ，ＡＲＬＩＶＦＰＤＬ－ＧＶＲＶＣＥＫＭＡＬＹ，ＡＦＣＳＡＭＹＶＧＤＬＣＧＳＶ，ＧＶＬＦＧＬＡＹＦＳＭＶＧＮＷ，ＶＶＣＣ　　ＳＭＳＹＴＷＴＧＡＬＩＴＰＣ，ＴＲＶＰＹＦＶＲＡＱＧＬＩＲＡ和ＴＴＬＬＦＮＩＬＧＧＷＶＡＱ。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及HCV疫苗。免疫系统是已演化出来以保护多细胞生物免受感染性微生物侵害的相互关联的细胞类型和分子之复杂网络。其可分为演化较早的先天(或天然)免疫和适应性(或获得性)免疫。先天免疫系统针对病原体的识别模式通常是广谱和基本的。对于这种有限数目的分子结构，已演化出种系编码的受体。相反地，适应性免疫系统-B细胞和T淋巴细胞—可识别大量种类的抗原性结构。受体，根据表达其的细胞类型称为B细胞受体(BCR，其可溶性版本被称为抗体)和T细胞受体(TCR，只有与细胞表面结合的形式)，由体细胞重组产生并且显示克隆性分布。因此，最初只有少量具有某些特异性的细胞。一旦接触抗原，这些细胞开始分裂(克隆性扩增)以产生能够与所述抗原结合的效应群体。在消除抗原后，特异性识别该抗原的特异性细胞亚群体作为免疫记忆保留下来。综合起来所述适应性免疫系统是慢速的(与天生免疫相比)，但却是特异性的并且其在反复暴露于给定的病原体/抗原后得到提高。T细胞在适应性免疫中具有中心作用。其受体(TCR)识别“主要组织相容性复合物”(MHC或HLA)细胞表面的肽复合物。这些肽称为T细胞表位，代表抗原的降解产物。存在两种主要类型的T细胞CD8-阳性细胞毒T细胞(CTL)被限定于MHC I类。CD4-阳性辅助T细胞(HTL)限定于MHC II类。HTL对适应性免疫的许多特征来说是必需的所谓“专门的抗原呈递细胞”(APC)的激活、免疫球蛋白(Ig)类型转换、生发中心反应和Ig亲和力成熟、CTL的激活、免疫记忆、免疫应答的调节等。MHC分子在细胞内部收集肽并将其在细胞表面上呈递给T细胞的TCR。有两种主要类型的MHC，由CD8-阳性CTL识别的I类和由CD4阳性HTL识别的II类。MHCI类分子由45kDa的膜锚定α链和12kDA的非共价附着b2微珠蛋白(b2m)组成。X射线晶体学(Stern和Wiley 1994)三维结构的解析显示α链拥有在两端都封闭的并且可容纳8至11个氨基酸长度的肽裂隙。I类分子是遍在表达的并且其提供来源于细胞质蛋白的肽。这些蛋白被蛋白酶体降解，所得的肽被主动地转运到内质网(ER)中。在那里，在几种伴侣蛋白的帮助下，形成了MHC肽复合物，并被转运至所述细胞表面(Heemels 1995)。因此，MHCI类蛋白反映了细胞表面的蛋白质组并允许T细胞识别细胞内的病原体或恶性肿瘤细胞。MHCII类分子由两个分别为35kDa和30kDa的膜锚定蛋白(α-和β-)组成。这些蛋白在一起形成了在两端开口的裂隙，其可容纳多种长度的肽，通常从12至25个氨基酸。尽管存在这些差异，但I类和II类分子具有惊人的结构相似性((Stern和Wiley 1994)。II类分子只在专门的APC(包括树突状细胞(DC)、B细胞和巨噬细胞/单核细胞)中表达。这些细胞在内体途径中专门化，以吸收和加工抗原。在其刚刚生物合成后，II类分子被所谓的恒定链(Ii)复合，这在ER中阻止肽的结合。当含有II类Ii复合物的囊泡与含有外源抗原的降解产物的囊泡融合时，Ii被降解直至所述MHC结合裂隙只与所谓的CLIP肽复合为止。后者在伴侣分子如HLA-DM的帮助下与抗原肽交换(Villadangos 2000)。最后，MHC肽复合物再被呈递至APC表面，其以多种方式与HTL相互作用。由于多基因和非常多态性的原因，MHC系统高度复杂。人中的I类α链存在称为HLA-A、-B和-C的三个基因座。同样，存在三个II类α链基因座(DRA、DQA、DPA)；II类β链基因座状况甚至更加复杂，因为存在4种不同的DRβ链(DRB1、2、3、5)以及DQB和DPB。除了单态DRα链DRA，在群体中，各基因座存在许多不同的等位基因(数打至数百)(Klein 1986)。不同的等位基因对肽具有显著不同的结合特异性。等位基因命名为例如HLA-A*0201或HLA-DRB1*0401或HLA-DPA*0101/DPB*0401。通过各种方法已鉴定了T细胞表位(Van den Eynde 1997)。T细胞系和克隆已经例如用于筛选cDNA表达文库(例如在经合适的HLA-分子转染的COS细胞背景中)。可选择地，也使用了生物化学方法。后者包括洗脱来自靶细胞表面的MHC分子的天然配体，通过几个层析步骤分离这些肽，在表位重建测定中分析其与淋巴细胞的反应性和通过质谱仪进行测序(Wolfel等人1994，Cox等人1994)。近年来高灵敏性的细胞因子检测测定法(如IFN-γ ELIspot)的出现允许使用淋巴细胞直接离体地筛选重叠的合成肽(Maecker 2001，Kern 2000，Tobery 2001)。最初，Kern等人(1999&2000)使用重叠的9mer肽库阵列在体外进行CD8+T细胞表位作图。后来，Tobery等人(2001)修饰了该方法并证明含有多至64个20mer的肽库可用于在小鼠中筛选CD8+和CD4+T细胞表位。这两种方法都基于监控抗原特异性应答，通过细胞内染色(Kern等人，2000)或ELLspot测定(Tobery等人，2001)测量IFN-γ产生来进行监控。CD4+T细胞在使用15mer的混合物时的应答与用完整的可溶性蛋白作为抗原时所测得的应答几乎相当，同时，令人毫不惊奇的是，CD8+T细胞的应答显著高于通常可忽略的用可溶性蛋白刺激后检测到的应答。此外，CD8+T细胞对15个氨基酸肽的混合物之应答与用8-12个氨基酸肽(经选择代表已知的MHC I类的最小表位)获得的应答相似。绝大部分与细胞膜结合的肽酶在这些情况下负责将肽“剪”成最优化的长度(Maecker等人，2001)。引人注目的另一种选择是用特异性淋巴细胞筛选合成的组合肽文库。例如，由以位置扫描形式排列的200种混合物组成的十肽文库已成功地用于鉴定刺激T细胞的克隆类型群体的肽配体(Wilson，等人，J.Immunol.，1999，1636424-6434)。通过所谓的“反向免疫学方法”(Rammensee 1999)已鉴定了许多T细胞表位。在这种情况下产生潜在的T细胞表位的蛋白是已知的，并且就HLA结合基序对其一级序列进行扫描。通常数打至数百的候选肽或甚至全套交叠肽被合成，并对其与HLA分子的结合进行检验。通常，选择最好的结合者以进一步表征其与T细胞的反应性。例如可通过在体外或体内在HLA转基因小鼠的帮助下活化(priming)T细胞来进行该测定。丙型肝炎病毒(HCV)是在世界范围内慢性感染大约1.7亿人口的黄病毒科的成员。现已描述了至少6种HCV基因型和超过50种亚型。在美国、欧洲和日本，基因型1、2和3最为普便。HCV基因的地理分布差异很大，在美国和部分西欧地区基因型1a占主导，而在南欧和中欧1b占主导(Bellentani 2000)。HCV是通过肠胃外或经皮肤传播的，并在肝细胞中进行复制。大约15％的患者遭受与病毒清除和恢复相关的急性自限性肝炎。大约80％经感染的人变成慢性携带者。感染通常无症状地持续缓慢发展数年，但最终HCV是导致硬化(肝脏疾病的最后阶断)和肝癌的主要原因(Liang 2000)。HTL和CTL应答的强度和质量决定患者是否康复(自发地或由于治疗的原因)或发展成慢性感染(Li本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含至少两种表位的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疫苗，其中各表位来自不同的热点表位，其中热点表位定义为包含选自下列的肽的表位：ＫＦＰＧＧＧＱＩＶＧＧＶＹＬＬＰＲＲＧＰＲＬＧＶＲＡＴＲＫ，ＧＹＫＶＬＶＬＮＰＳＶＡＡＴ，ＡＹＡＡＱＧＹＫＶＬＶＬＮＰＳＶＡＡＴ，ＤＬＭＧＹＩＰ（Ａ／Ｌ）ＶＧＡＰＬ，ＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＣＩＮＧＶＣＷＴＶ，ＨＭＷＮＦＩＳＧＩＱＹＬＡＧＬＳＴＬＰＧＮＰＡ，ＶＤＹＰＹＲＬＷＨＹＰＣＴ（Ｖ／Ｉ）Ｎ（Ｆ／Ｙ）ＴＩＦＫ（Ｖ／Ｉ）ＲＭＹＶＧＧＶＥＨＲＬ，ＡＡＷＹＥＬＴＰＡＥＴＴＶＲＬＲ，ＧＱＧＷＲＬＬＡＰＩＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧＣＩＶ，ＩＧＬＧＫＶＬＶＤＩＬＡＧＹＧＡＧＶＡＧＡＬＶＡＦＫ，ＦＴＤＮＳＳＰＰＡＶＰＱＴＦＱＶ，ＬＥＤＲＤＲＳＥＬＳＰＬＬＬＳＴＴＥＷ，ＹＬＶＡＹＱＡＴＶＣＡＲＡＱＡＰＰＰＳＷＤ，ＭＳＴＮＰＫＰＱＲＫＴＫＲＮＴＮＲ，ＬＩＮＴＮＧＳＷＨＩＮＲＴＡＬＮＣＮＤＳＬ，ＴＴＩＬＧＩＧＴＶＬＤＱＡＥＴ，ＦＤＳ（Ｓ／Ｖ）ＶＬＣＥＣＹＤＡＧ（Ａ／Ｃ）ＡＷＹＥ，ＡＲＬＩＶＦＰＤＬＧＶＲＶＣＥＫＭＡＬＹ，ＡＦＣＳＡＭＹＶＧＤＬＣＧＳＶ，ＧＶＬＦＧＬＡＹＦＳＭＶＧＮＷ，ＶＶＣＣＳＭＳＹＴＷＴＧＡＬＩＴＰＣ，ＴＲＶＰＹＦＶＲＡＱＧＬＩＲＡ和ＴＴＬＬＦＮＩＬＧＧＷＶＡＡＱ。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M布什勒，J弗里施，C克拉德，K林瑙，W曹纳，G策特尔迈瑟尔，
申请(专利权)人：英特塞尔股份公司，
类型：发明
国别省市：AT[奥地利]