肠球菌抗原制造技术

本发明专利技术公开了来自粪肠球菌的编码超免疫血清反应性抗原或其片段的分离的核酸分子以及超免疫血清反应性抗原或其片段、分离这样的抗原的方法及其特定用途。

【技术实现步骤摘要】
肠球菌抗原本申请是申请日为2004年5月沈日、申请号为200480015159. 5、专利技术名称为“肠球菌抗原”的专利技术专利申请的分案申请。本专利技术涉及编码肠球菌，例如粪肠球菌(Enterococci faecalis)抗原的分离的核酸分子，所述分子适合用于预防和治疗肠球菌引起的细菌感染的药物药剂的制备。肠球菌是革兰氏阳性细菌，其为人和动物消化道中正常的聚居者。一个世纪以来其业已被认为是传染性心内膜炎的原因{MUrray，B.，1990}，且由于作为医源性感染以及手术部位感染的最常见病原体在过去二十年来受到高度重视{Richards，M.等人，2000}。肠球菌作为医源性病原体的日益重要部分归因于其固有的和获得性的抗生素抗性{Murray， B. , 1990} ； {Rice，L.，2001}。多药抗性肠球菌的治疗对临床医生提出了有力地挑战。 {Cetinkaya, Y.等人，2000} ； {Gold, H.，2001}，且这类生物作为抗生素抗性基因的潜在储藏库尤其令人关注{French，G.，1998} ； {Noble, W.等人，1992} ； {Poyart, C.等人，1997}。肠球菌作为D组链球菌的分类追述到1930年代早期。1984年，在数项研究证实与链球菌的远缘关系后被给出了正式的种属名称分类。肠球菌通常被认为是多种生物(包括人)胃肠道中的共生体。尽管有多于14种的不同肠球菌，粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(E. faecium)是人类中最常见的种类。肠球菌数种固有特征使得所述种属的成员存活更长的时间，造成其存留和医源性传播。肠球菌在去污剂存在下的适应和存留的能力允许其在不充分的清洁方案中存活，造成其在医院的存留。肠球菌固有的粗放性也赋予其对包括氨基糖苷类、β -内酰胺类和喹诺酮类的数种抗生素的不同寻常的耐受水平。例如，肠球菌对氨基糖苷类的耐受源自肠球菌对药物在细胞壁处摄入的阻断。尽管高水平抗性的机制被确定为双功能酶的结果，{Ferretti，J.等人，1986}，肠球菌对低水平氨基糖苷类的内在抗性机制仍待确定。在肠球菌中，屎肠球菌是独特的，因为其通常用于制备发酵食品，且用作益生菌。 近年来，屎肠球菌作为食品发酵微生物不甚被接受，因为担心该细菌可作为向参与人类感染的细菌传递抗生素抗性的中间体宿主。尽管存在上述担心，屎肠球菌仍是乳酸菌发酵的食品中最常见的细菌。已证实许多屎肠球菌的分离物产生杀细菌素(抗微生物肽)，其能够杀死或抑制病原体(如李斯特菌属，梭菌属，杆菌属和葡萄球菌)的生长。这类杀菌素有助于食品发酵的保藏作用，且是所述菌株作为发酵食品生产的出发培养物的一个原因。近来， 肠球菌已被成功地用于牛乳腺炎的治疗。除了食品生产、作为益生菌以及在动物疾病治疗中的应用，最重要的，肠球菌是新出现的人条件病原体。这是由于其固有的病原性潜能，甚至是因为其快速获得抗生素抗性基因的能力。屎肠球菌和粪肠球菌是高百分比的医院获得性感染(包括超级感染)的原因。肠球菌通常聚集在人类胃肠道中。在人类粪便中较丰富。在肠球菌及其宿主中很可能存在密切相关，否则由于正常的肠道运动所述微生物将消失。许多感染来源的肠球菌分离株为克隆性的，显示医源性传播。此外，许多研究表明在住院后出现患者群居，显示多种抗性菌株的群居是继发感染的易感因子。医源性肠球菌感染的不易解释之谜之一是在相同种属成员业已占据的生态环境中的容易群居。如前述，缺乏实质上抗肠球菌活性的抗生素(即，对土著肠球菌不具有毒害作用的抗生素)是感染的重要易感因子。所述感染常常由多种抗性肠球菌分离株引起，所述分离株已被外源性获得，且在没有定向选择的情况下显示优于土著肠球菌。外源性、多重抗性、医源性传播的肠球菌有效群居在胃肠道的事实提示其可能不是直接竞争土著菌株的同一小生态环境。由肠球菌属引起的感染包括a)菌血症，b)尿道感染，C)眼内炎，d)心内膜炎，以及创伤和腹内感染。大约3/4的感染由粪肠球菌引起，其余由屎肠球菌引起。a)菌血症1986年10月-1997年4月间医院监护数据将肠球菌列为第三位最常见的医源性菌血症的病因，占所有分离株的12. 8%。肠球菌跨越肠上皮细胞屏障的转位被认为导致了许多无可鉴别来源的菌血症。与肠球菌菌血症的死亡率相关的风险因子包括疾病的严重程度，患者年龄以及广谱抗生素的使用，如第三代头孢类抗生素或甲硝唑。这些研究表明，高水平氨基糖苷类抗性不影响临床结果，但是，粪肠球菌溶细胞素(溶血素)的存在可增强感染的严重程度。b)尿道感染据估计肠球菌每年在美国造成110，000例尿道感染(UTI)。一些研究业已致力于了解肠球菌与尿路上皮组织的相互作用。已证实质粒编码的聚集性物质在肠球菌与肾上皮细胞吸附中的潜在作用。携带外激素应答性质粒PADl或其同源基因衍生物的粪肠球菌比不含质粒的细胞能够更好的结合于培养的猪肾小管细胞系LLC-PK。他们的研究结果显示含有纤连蛋白基序Arg-Gly-Asp-Ser的合成肽能够抑制结合。所述结构性基序介导纤连蛋白与整合素家族真核表面受体的相互作用。C)眼内炎宿主组织的聚居在眼内炎的发病中起重要作用。肠球菌作为最具有破坏性因子之一引起白内障手术的手术后并发症。设计用于确定是否靶定粪肠球菌的物质改变眼内解剖结构的实验表明，肠球菌附着于玻璃体的膜结构，但是所述吸附不依赖于聚集物质是否存在。d)心内膜炎在肠球菌引起的多种感染中，传染性心内膜炎(IE)是最具有治疗挑战性的之一。 肠球菌是传染性心内膜炎的第三位致病因素，占天然瓣膜IE病例中的5-20%，人工瓣膜心内膜炎的6-7%。外激素应答性质粒pADl的存在增强了肠球菌性心内膜炎的“植被类型”(vegetationformation)。来自带有粪肠球菌的心内膜炎患者的血清用于鉴别在血清中选择性表达而不在培养基中表达的抗原{LoWe，A.等人，1995}。所述蛋白质抗原称为EfaA， 具有与数种肠球菌粘附相似的广泛序列，且可能作为重要的心内膜炎吸附素。氨苄青霉素是肠球菌感染的治疗选择。对于严重肠球菌感染，特别是心内膜炎，氨基糖苷类作为与青霉素或氨苄青霉素组合治疗的一部分非常重要。尽管肠球菌固有的耐受低水平的氨基糖苷类抗生素，针对氨基糖苷类的细胞壁抑制剂的添加导致通过两种抗生素协同作用增加的杀伤。随着对氨基糖苷类和青霉素类高水平抗性的增加，万古霉素成为可用于肠球菌感染的唯一选择。随后，1988年在肠球菌临床分离株中报道了万古霉素抗性，随后是由万古霉素抗性肠球菌(VRE)引起的爆发。在美国医院中，医源性肠球菌对万古霉素抗性的百分比从1989年的0. 3%增加到1993年的7. 9%。在重症监护室中患有医源性感染的患者中，增加更为明显从1989年的0. 4%至1993年的13. 6%，在四年期间增加了 34倍。除了较高的死亡率之外，万古霉素抗性肠球菌感染造成平均约$25，000的额外治疗费用，同时延长了一倍的患者住院时间。尤其是在粪肠球菌分离株中万古霉素抗性的急剧增加，表明感染在未来提出越来越多的挑战。一直显见的治疗替代方案是接种疫苗，旨在诱导防止或减轻感染的保护性免疫反应。由于缺乏关于针对肠球菌感染的保护性免疫元件的足够知识，疫苗的开发受到阻碍。有报道称中性粒细胞介导本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种编码超免疫血清反应性抗原或其片段的分离的核酸分子，其包含选自如下的核酸序列：ａ）与选自Ｓｅｑ　ＩＤ　Ｎｏ　１－２，４－８，１０，１２－１８，２０－２３，２５－２６，２９－４３，４５－６２，６４－７４，７６－７７，７９－８３，８５－８９，９１－９２，９４－１１４，１１７－１２６，１２８－１４６，１４８－１７０，３７３，３７５，３７９－３８１，３８７，３９２，３９４，３９７－３９９，４０７－４０８，４１０－４１１和４１５－４２４的核酸分子具有至少７０％序列相同性的核酸分子，ｂ）互补于ａ）的核酸分子的核酸分子，ｃ）包含ａ）或ｂ）的核酸分子至少１５个连续碱基的核酸分子，ｄ）在严格杂交条件下退火于ａ）、ｂ）或ｃ）的核酸分子的核酸分子，ｅ）杂交于ａ）、ｂ）、ｃ）或ｄ）中定义的核酸分子之核酸分子的简并性序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：A·迈因克，E·纳吉，M·汉纳，D·格尔贝曼，
申请(专利权)人：英特塞尔股份公司，
类型：发明
国别省市：AT