脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用，分别提供了针对脑膜炎球菌A、C、Y和W135群多糖特异性的小鼠单克隆抗体，通过免疫小鼠和制备杂交瘤细胞获得。本发明专利技术提供的各型流脑多糖特异的单克隆抗体与其它型荚膜多糖无明显交叉反应，用于检测A、C、Y和W135群脑膜炎球菌具有高特异性、高敏感性的优点，可以准确检测样品中各型脑膜炎球菌或荚膜多糖的含量，在临床检测和疫苗生产过程中有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及杂交瘤细胞系及其产生的单克隆抗体与应用，特别是设及针对脑膜炎 双球菌A、C、化35、Y血清型的四种英膜多糖的单克隆抗体和分泌该抗体的杂交瘤细胞系W 及含有该抗体的试剂盒的应用。
技术介绍
流行性脑脊髓膜炎（流脑）已发现100余年，至今仍在不少国家流行，也是 我国冬、春季比较常见的急性呼吸道传染病。该病是由脑膜炎奈瑟氏菌（Neisseria meningitides)引起的脑膜炎。据统计，每年的2~4月，"流脑"的发病率占全年的60% 左右。病人主要是15岁W下的少年儿童，特别是6个月至2岁的婴幼儿容易感染。其特点 是起病急、病情重、变化多、传播快、流行广、来势凶猛、病死率高、危害性大，所W必须切实 做好预防工作。 脑膜炎双球菌属奈瑟氏菌属，革兰氏染色阴性，肾形，多成对排列，或四个相联。根 据本菌的夹膜多糖抗原的不同，通过血凝试验将本菌分为A、B、C、D、X(1916)、Y(1889)、Z、 ￥135(319)、2犯（1892)、山1、1(和113个血清群。^4、8、(：群为多见。脑膜炎双球菌细菌 素（meningocin)又可将A群分为4型，C群分为6型；B群分为11型，其中B群2型致病力 最强。根据其脂多糖（CP巧将脑膜双球菌分为8个LPS免疫型，与致病关系尚不清楚。 近20年来欧美一些国家的流行菌群已由A群转变为B群和C群；我国的流行菌群 主要是A群，B群仅占少数。但带菌者WB、C群为主，今后是否会成为主要流行菌群，有待 于密切观察。 脑膜炎双球菌是不断变迁的，在脑膜炎球菌的13个血清群中，A群B群C群Y群 和化35群引起的病例可达95%，无论是成人或儿童，对化35群流脑普遍易感。四价多糖疫 苗针对的是包括奈瑟脑膜炎球菌A、C、化35、Y的4个血清群，具有保护率高（85% -95% )、 反应率低（无全身反应和发热反应）及免疫有效期长（约2~3年）的=大优点。 目前在国内外尚未见到快速有效特异检测脑膜炎球菌英膜多糖的化ISA试剂盒 的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供脑膜炎球菌A、C、Y、化35群英膜多糖（血清型）的单克隆抗 体、产生该抗体的杂交瘤细胞系W及单克隆抗体的应用。[000引本专利技术提供一种单克隆抗体，分别W4种脑膜炎球菌英膜多糖为免疫原，免疫动 物制备获得； 其中，4种脑膜炎球菌英膜多糖的血清型分别为A、C、Y和W135 ;所述单克隆抗体 特异性地识别A、C、Y和化35脑膜炎球菌病原体。 所述载体蛋白为白喉毒素CRM197蛋白或破伤风类毒素TT蛋白。 本专利技术制备单克隆抗体过程中，免疫使用的动物为小鼠。 本专利技术提供了 8种单克隆抗体，分别是脑膜炎球菌A、C、Y、化35群多糖的单克隆 抗体。 具体地说是分别W脑膜炎球菌结合疫苗中的A、C、Y、化35英膜多糖为免疫原免疫 小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌A、C、Y或化35群脑膜炎 球菌多糖的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到8种单克隆抗体。 本专利技术提供的单克隆抗体能特异识别脑膜炎球菌A血清型多糖的单克隆抗体为 Clone6B7和Clone6B12;特异识别脑膜炎球菌C血清型多糖的单克隆抗体为Clone2H4和 Clone5B3;特异识别脑膜炎球菌化35血清型多糖单克隆抗体为CloneSFl和Clone4服；特 异识别脑膜炎球菌Y血清型多糖的单克隆抗体为Clone7C6和Clone3A2; 所述单克隆抗体Clone6B7的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo. 1和2所示； 所述单克隆抗体Clone6B12的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo. 3和4所示； 所述单克隆抗体Clone2H4的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo. 5和6所示； 所述单克隆抗体Clone5B3的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.7和8所示； 所述单克隆抗体CloneSFl的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.9和10所示； 所述单克隆抗体Clone4服的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.11 和 12 所示； 所述单克隆抗体Clone7C6的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo. 13和14所示； 所述单克隆抗体Clone3A2的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.15 和 16 所示。 本专利技术提供了能稳定分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞。本专利技术针对每种血清型各自获得的单克隆抗体具有良好的特异性，实验表明，每 种血清型的单克隆抗体与其它3种血清型的脑膜炎球菌英膜多糖抗原没有显著的交叉反 应，间接化ISA表明该些抗体具有较高的效价，因此可用于A、C、Y、化35群脑膜炎球菌英膜 多糖的检测。可W采用双抗夹屯、法，分别利用两个单克隆抗体对各型英膜多糖进行检测。 本专利技术提供了上述8种单克隆抗体中任一种单克隆抗体在制备脑膜炎球菌检测 试剂盒中的应用。 本专利技术提供了上述8种单克隆抗体中任一种单克隆抗体在制备脑膜炎球菌英膜 多糖A、C、Y或化35抗体检测试剂盒中的应用。 含有上述任一种或多种单克隆抗体的药物属于本专利技术的保护范围。[002引本专利技术提供了上述8种单克隆抗体任一种或多种单克隆抗体在制备脑膜炎球菌 预防性药物中的应用。 本专利技术提供了含有上述任一种或多种单克隆抗体的检测试剂盒。 本专利技术提供一种用于脑膜炎英膜多糖检测的试剂盒。 本专利技术提供的检测试剂盒，其为化ISA检测试剂盒，其w特异性地识别脑膜炎球 菌A血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，W酶标记的异性地识别脑膜炎球菌A血清 型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone6B7或Clone6B12。 本专利技术提供的检测试剂盒，其为化ISA检测试剂盒，其W特异性地识别脑膜炎球 菌C血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，W酶标记的异性地识别脑膜炎球菌C血清 型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone2H4和Clone5B3。 本专利技术提供的检测试剂盒，其为化ISA检测试剂盒，其W特异性地识别脑膜炎 球菌化35血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，W酶标记的异性地识别脑膜炎球 菌化35血清型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为CloneSFl和 Clone4 服。 本专利技术提供的检测试剂盒，其为化ISA检测试剂盒，其W特异性地识别脑膜炎球 菌Y血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，W酶标记的异性地识别脑膜炎球菌Y血清 型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone7C6和Clone3A2。 本专利技术提供了上述单克隆抗体在制备检测4种脑膜炎球菌英膜多糖试剂盒中的 应用，所述4种脑膜炎球菌英膜多糖的血清型分别为A、C、Y和化35。 本专利技术提供的各型英膜多糖特异的单克隆抗体分别与其它ACYW135群脑膜炎球 菌型英膜多糖无明显交叉反应，用于检测A、C、Y、化35群脑膜炎球菌英膜多糖具有高特异 性、高敏感性的优点，可W准确检测样品中各型多糖组分的水平，广泛应用于临床检测和疫 苗厂家生产疫苗过程中的质检。【附图说明】 图1是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体，其特征在于，分别以4种脑膜炎球菌荚膜多糖为免疫原，免疫动物制备获得；其中，4种脑膜炎球菌荚膜多糖的血清型分别为A、C、Y和W135；所述单克隆抗体分别特异性地识别A、C、Y或W135脑膜炎球菌病原体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙乐，李茂华，王慕旸，张翠娟，张小刚，陈兴，张萍萍，
申请(专利权)人：北京天成新脉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11