一种被应用在医学中，含有多核苷酸的ＨＣＶ疫苗，该多核苷酸编码ＨＣＶ蛋白∶核心、ＮＳ３、ＮＳ４Ｂ和ＮＳ５Ｂ的多肽序列。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗和预防丙型肝炎病毒(HCV)感染及相关症状和疾病的方法和组合物。具体而言，本专利技术涉及包含编码HCV蛋白的多核苷酸序列的DNA疫苗，以及治疗HCV感染个体的方法，包括施用本专利技术的疫苗。最近，HCV被认为是输血后和群体获得性非甲非乙型肝炎的主要病原体。大约有1亿7千万人被慢性感染上HCV，患病率为1-10％。据估计，卫生保健费用在1.8％患病率的美国约为20亿美圆。40-60％肝病是由于HCV，在英国，有30％的移植是因为HCV感染。尽管HCV在初期为亚临床感染，仍有超过90％的患者发展成慢性病。该疾病过程典型地从慢性活动性肝炎(70％)、纤维变性、肝硬化(40％)发展成肝细胞癌(60％)。从感染到肝硬化的中值时间为20年，到肝细胞癌的中值时间也为20年(Lauer G.and Walker B.2001，Hepatits Cvirus Infection.N Engl J.Med 345，41，Cohen J.2001，The Scientificchallenge of Hepatitis C.Science 285(5424)26)。HCV疗法非常需要改进。目前尚无可利用的小分子复制抑制剂。病毒唑和聚乙二醇化干扰素的现有金标准提供了治疗HCV感染的主要依据。但现有方案实现持续应答的能力仍然不是最佳(一般为50％应答率持续达6个月，但对基因型1b而言的应答率则较低(27％))。该治疗也伴有不良副作用，导致了高失败率，尤其是在最初6个月的治疗后。一些研究结果表明个别HCV蛋白在正常小鼠体内具有免疫原性，包括下述的DNA免疫接种。一些用于预防或治疗的HCV疫苗尚处于临床实验阶段。目前最前沿的研究是Chiron and Innogenetics利用E1或E2包膜蛋白进行的2期临床试验。Transvax的表位疫苗也处于2期临床试验阶段。一些疫苗利用包括DNA在内的多种送递系统，以及来源自核心和非结构抗原的序列，尚处于临床前研发阶段。HCV是属于黄病毒家族的正链RNA病毒，其基因组长度为9.4kb，具有一个可读框。HCV基因组被作为单个多蛋白翻译，并随后被宿主和病毒蛋白酶加工，生成结构蛋白(核心，包膜E1和E2，和p7)和具有多种酶活性的6种非结构蛋白。1b基因型的一个实例，即HCV J4L6分离物的基因组被编号为AF054247(Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.and Bukh，J.″Transcripts of a chimeric cDNA clone of hepatitis C virus genotype 1bare infectious in vivo″(丙型肝炎病毒基因型1b的嵌合cDNA克隆转录物在体内具有传染性).Virology 244(1)，161-172(1998))，如附图说明图1所示。该包膜蛋白负责识别、结合目标细胞，并使病毒进入目标细胞。病毒复制涉及的主要非结构蛋白包括NS2(依赖于Zn的金属蛋白酶)、NS3(丝氨酸蛋白酶/解旋酶)、NS4A(蛋白酶辅因子)、NS5A和NS5B(RNA聚合酶)(Bartenschlager B and Lohmann V.2000.Replication ofhepatitis C virus.J.Gen Virol 81，1631)。HCV多蛋白的结构可被表示如下(数字表示各蛋白中第一个氨基酸的位置；J4L6分离物的全部多蛋白有3010个氨基酸长) 该病毒具有高突变率，且根据保守和非保守区的核苷酸序列，有至少6种主要基因型已被确定。但仍然存在其它异质性，诸如分离自个体患者的HCV往往以多个紧密相关基因组或准种的混合物形式存在。HCV基因组显示出高度的遗传变异，已被划分为6个主要的基因型(1a、1b、2、3、4、5和6)。基因型1a、1b、2和3主要流行于欧洲、北美和南美、亚洲、中国、日本和澳大利亚。基因型4和5主要流行于非洲，基因型6则主要出现在东南亚。因此，HCV感染的疗法非常需要改进，同时也需要提供在治疗诸多HCV基因型的能力方面具有多样性的疗法。在本专利技术的第一个方面中，提供了在治疗多种基因型方面具有多样性的新型疫苗配方。已有文献描述过含有编码一个或多个HCV蛋白的多核苷酸的HCV疫苗。Brinster等人描述了含有编码NS3的质粒DNA或SemlikiForest Virus载体的疫苗(2002，Journal of General Virology，83，369-381)。WO 99/51781公开了编码NS5B的多核苷酸疫苗。WO 97/47358描述了编码HCV E1、E1+E2融合蛋白、NS5A和NS5B蛋白的密码子优化基因及包含这些基因的疫苗。WO 01/04149公开了来源于核心、NS3、NS4或NS5A，并编码HCV表位嵌合体的多肽或多核苷酸。WO01/30812描述了可应用在疫苗中，并含有NS3、NS4、NS5A和NS5B的融合蛋白，以及编码这些融合蛋白的DNA；或者说该融合蛋白含有核心蛋白的片段。WO 03/031588则描述了一种适合被用作疫苗的腺病毒载体，该载体编码HCV蛋白NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B。WO 96/37606描述了含有特定多肽的疫苗，该多肽包括“未加工的”核心蛋白和非结构蛋白。本专利技术涉及提供一种编码HCV蛋白核心、NS3、NS4B和NS5B的多核苷酸疫苗。本专利技术的多核苷酸疫苗不编码NS4A HCV蛋白和/或NS5A蛋白。本专利技术的多核苷酸疫苗优选地编码核心、NS3、NS4B和NS5B HCV蛋白，而不编码其它HCV蛋白。本专利技术也提供了编码这些抗原的多核苷酸疫苗在医学和在制备用于治疗或预防HCV感染的药物中的用途。本专利技术疫苗所用的多核苷酸序列优选DNA序列。编码上述HCV蛋白的多核苷酸可能存在多种组合或构型。例如，这些蛋白质可能以单个蛋白或融合蛋白的形式被表达。可能在DNA或蛋白质水平上的融合体实例可以是由含有或编码NS4B和NS5B的氨基酸序列的单个多肽或多核苷酸所构成的双融合体(NS4B-NS5B)、含有或编码NS3-NS4B-NS5B的氨基酸序列的三融合体，或本专利技术全部四种抗原的融合(核心-NS3-NS4B-NS5B)。本专利技术的优选融合体是编码NS4B与NS5B的双融合体(NS4B-NS5B或NS5B-NS4B)的多核苷酸；和编码核心与NS3的双融合体(NS3-核心或核心-NS3)的多核苷酸。优选的三融合体是编码NS3-NS4B-NS5B的氨基酸序列的多核苷酸。本专利技术编码单个抗原或融合蛋白的多核苷酸可存在于单个或多个表达载体中。编码各抗原的多核苷酸优选地存在于相同的表达载体或质粒中。在本说明书中，编码HCV蛋白的多核苷酸可存在于单个表达盒或一系列表达盒中的多个表达盒中。为优化其它HCV蛋白的表达，编码HCV核心蛋白的多核苷酸优选地出现在位于另一特定表达盒下游的表达盒中，该特定表达盒含有编码至少一种或其它HCV蛋白的多核苷酸。HCV核心蛋白优选地出现在位于另一特定表达盒下游的表达盒中，该特定表达盒含有编码NS5B的多核苷酸。由本专利技术的寡核苷酸疫苗编码的多肽本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：S·布雷特，P·A·汉布林，L·奥吉尔维，
申请(专利权)人：葛兰索集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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