本发明专利技术在一个实施方案中，提供了多进化枝ＨＩＶ质粒ＤＮＡ或病毒载体疫苗，包含来自Ｅｎｖ的不同进化枝（可选Ｅｎｖ嵌合体）和来自单个进化枝的Ｇａｇ－Ｐｏｌ－（可选）Ｎｅｆ的成分。本发明专利技术的所述的疫苗还包括Ｖ１，Ｖ２，Ｖ３或Ｖ４缺失或上述的组合。在另一实施方案中，本发明专利技术提供多进化枝ＨＩＶ包膜免疫原。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求2003年9月15日提交的美国临时专利申请第60/503,509号的利益，在此将其全文引用作为参考。
技术介绍
专利
本专利技术涉及针对HIV的疫苗领域。相关技术的描述对抗不断突变的人类免疫缺陷病毒(HIV)的安全和有效的疫苗是非常需要的。高效AIDS疫苗的要求之一是需要诱导世界范围内流行的HIV-1多种株系的中和抗体和细胞免疫。专利技术概述在一个实施方案中，本专利技术提供了多进化枝HIV质粒DNA或病毒载体疫苗，该疫苗包含来自Env不同进化枝(可选Env嵌合体)和来自单个进化枝的Gag-Pol-(可选)Nef的成分。本专利技术的疫苗还包括V1，V2，V3或V4缺失或其组合。在另一实施方案中，本专利技术提供了多进化枝HIV包膜免疫原。附图的简要描述附图说明图1所示为具有V3区域替换部分的HIV Env载体的结构图。图A所示为按照之前的描述(Chakrabarti，B.K等人，2002 J Virol 765357-5368)制备的CXCR4-定向HIV HXB2，进化枝B gp140ΔCFI。包括来自HIVHXB2的V3区域的大多数分支区域都被HIV BaL的类似区域替换，从而制备成R5定向进化枝B HIV HXB/BaL。同样也如材料与方法(参见部分I)中的描述制备了进化枝A gp140ΔCFI和进化枝Cgp140ΔCFI。图B所示为通过在293细胞中的转染和Western杂交分析确认的所指定的载体的表达。以1∶3000的稀释度，使用针对gp160的多克隆抗体(Intracel，Rockville，马里兰州)，通过Western杂交对Env进行了测定。图2所示为通过具有V3区域替换的嵌合Env对中和抗体的诱导。图2A所示为用HIV HXB2/BaL gp140ΔCFI免疫的豚鼠中的中和抗体活性。检测了免疫血清对于抑制HIV IIIB(空心柱)和HIV MN(实心柱)的能力。所述中和抗体滴度定义为在MT2分析杀死中产生50％病毒中和的血清稀释度(Montefiori，D.C.等人，1988 J Clin Microbiol 26231-5)。图2B为对图2A中所述的相同血清进行了抗HIV BaL的测定。所得数据代表了这些血清在1∶4稀释时对HIV BaL的中和百分数(％)。图3所示为使用gp145/140ΔCFI Env免疫豚鼠之后产生的中和抗体的滴度和特异性。图A所示为使用血清样本在外周血单核细胞(PBMC)中测定的HIV BaL的V3-特异性中和，如前所述(Bures，R.等人，2000 AIDSRes Hum Retroviruses 162019-35)，在有无不同V3多肽的条件下对所述血清样本进行了预孵育。图B所示为与未进行处理的对照相比，在存在HIV IIIB或HIV BAL V3多肽的情况下，通过HIV MN-特异性中和抗体的滴度降低对由HIV BaL的gp145/140ΔCFI诱导的V3多肽特异性中和活性进行的测定。根据部分I中材料与方法部分的描述，在MT2细胞中进行了分析(Montefiori，D.C.等人，1988 J Clin Microbiol 26231-5)。所述虚线对应于认为是中和阳性的50％分界点。图4所示为在HIV HXB/BaLΔCFI Env中不同2F5/V3突变体的示意图和表达。图A所示为具有在V3中表达的2F5表位的衍生自进化枝BHIV HXB/BaL的gp145ΔCFI的示意图。如前所述，指定了功能型结构域和主要的结构基序(Chakrabarti，B.K.等人，2002 J Virol 765357-5368)。V1，V2，V3和V4是指各自的可变区域，也给出了所述相关的V3环的序列。在R5/进化枝B包膜中跨膜结构域上游的七重复(HR-2)和卷曲的卷曲多肽序列，被来自进化枝C Env中的类似区域所取代。对应于V3末端的氨基酸(GPGRA，SEQ ID NO12)的核苷酸序列，或者被含有最小2F5表位多肽对应的核苷酸序列所取代，或者被含有延伸的2F5表位多肽对应的核苷酸序列所取代。CTRPNNNTRKSIHIGPGRAFYTTGEIIGDIRQAHC(SEQ ID NO1)；CTRPNNNTRKAIHIFYTTGEIIGDIRQAHC(SEQ ID NO2)；LELDKWAS(SEQ ID NO3)；KNEQELLELDKWAS(SEQ ID NO4)；KNEKDLLALDSWRN(SEQ ID NO5)。图B为2F5突变gp140ΔCFI包膜的表达。所示为指定的gp140ΔCFI B(C-HR2)或-2F5，gp140ΔCFIΔGPGRA B(C-HR2)或-末端-2F5，gp140ΔCFI B(C-HR2)延伸2F5，V3延伸2F5和进化枝B gp140ΔCFI的表达。所指定的蛋白是通过部分I的材料与方法部分所述的免疫印记进行测定的。将不含有插入的载体进行转染产生的无细胞上清液用作对照。图C所示为2F5修饰的Env与单克隆抗体2F5和HIV-1 IgG的反应活性的分析。gp140ΔCFI指定的突变体或用载体单独转染的对照的结合是使用单克隆抗体2F5(左边)和HIV-1IgG(右边)通过ELISA进行分析的。所述值代表了每一点的平均值和标准差(误差棒)。图5所示为在免疫的豚鼠中对2F5多肽的抗体应答。所示为用指定表达载体免疫的豚鼠中通过ELISA对抗体应答进行的比较。使用DNA(图A)和ADV加强(图B)两周后收集的血清来测定所述抗体可与2F5多肽结合。使用对照载体单独免疫的动物的血清作为阴性对照。图C所示为在1∶5抗体滴度时，在HIV HXB/BaL ΔCFI Env中2F5/V3突变体对于一组HIV-1 B进化枝株系的中和百分数(％)。使用了四种来自2F5/V3突变体免疫的豚鼠的个体血清对HIV BaL，HIV IIIB和HIV SF162病毒进行了筛选。给出了中和百分数(与对应的免疫前血清相比较)。图6所示为gp140ΔCFI与不同的单克隆抗体的相互作用或与来自不同进化枝的gp140ΔCFI的CD4相互作用。图A所示为可溶性gp140ΔCFI的抗原结构与单克隆抗体的分析。用单克隆抗体(5μg)2F5，2G12，F105和IgG1b12或5μg HIV-1 IgG对用指定的表达gp140ΔCFI的载体转染的293细胞的上清液中的Evn糖蛋白进行免疫沉淀。通过SDS-PAGE对所述蛋白进行分析，并使用来自患者混合血清中的IgG(HIV-1 IgG)通过Western印记对所述蛋白进行测定。存在有与所述抗体交叉反应的条带。图B所示为可溶性gp140ΔCFI蛋白与CD4的相互作用。在ELISA分析中，与用载体单独转染的对照与CD4结合的比较，显示了gp140ΔCFI和gp160与CD4的结合。所述值代表了每一点的平均值和标准差(误差棒)。图7所示为由进化枝B(HXB/BaL)或者进化枝A、进化枝B和进化枝C的组合中的ΔCFI胞膜诱导的中和抗体应答的广度和效力的比较。图A和图B所示为四种个体豚鼠血清在1∶5稀释度条件下对指定病毒的中和分析。通过直接比较免疫血清和对应动物的免疫前血清计算中和百分数。之前对单轮细胞内p24-抗原流式细胞术HIV-1中和分本文档来自技高网...
【技术保护点】
多进化枝ＨＩＶ质粒ＤＮＡ或病毒载体疫苗，包含来自Ｅｎｖ的不同进化枝（可选Ｅｎｖ嵌合体）和来自单个进化枝的Ｇａｇ－Ｐｏｌ－（可选）Ｎｅｆ的成分。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：加里J纳贝尔，比马尔查克拉巴蒂，江永培，黄越，杨志勇，
申请(专利权)人：美国政府健康及人类服务部，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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