蛋白酶活化受体-1(PAR1)的拮抗剂制造技术

本发明专利技术提供特异识别并拮抗人PAR1受体的抗体或抗原结合分子。本 发明专利技术还提供编码这些分子的多核苷酸和载体，和含有所述多核苷酸或载体 的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及蛋白酶活化受体-l(PARl)的抗体和抗原结合分子拮抗剂。
技术介绍
蛋白酶活化受体l(PARl)是属于G蛋白偶联受体(GCPR)类别的凝血 酶受体。PARI在多种组织例如内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、神 经元和Ajk小板中表达。其涉及与止血、增殖和组织损伤相关的细胞应答。 通过PAR1经凝血酶介导的对血小板聚集的刺激是血管中血块形成和伤口 愈合中重要的步骤。凝血酶以如下方式活化PARI:蛋白水解去除PARI 的细胞外N-端结构域的一部分并暴露新的PARI N-端。然后，新PARI N-端的头几个氨基酸(SFLLRN; SEQ ID NO:37)作为束缚配体(tethered ligand)起作用，所述束縳配体与受体的另一部分结合，通过结合的G-蛋白 起始信号转导。也可以通过血块形成中涉及的其他丝氨酸蛋白酶活化 PARI,对PARl-介导的信号转导活性的调节具有若干种治疗性应用。PARI 的抑制有助于治疗血栓形成和血管增生病症和抑制癌症的发展。见例如 Darmoul，等，Mol Cancer Res (2004) 2(9):514曙22和Salah， et al, Mol Cancer Res (2007) 5(3):229-40。 PARI抑制剂(包括拮抗剂抗体或抗原结合分子)可用于治疗由PARI细胞内信号转导介导的大量疾病状况。例如，PARI 抑制剂(包括拮抗剂抗体或抗原结合分子)可用于预防或抑制慢性肠道炎 性病症，包括炎性肠病(IBD)、肠易激综合征(IBS)和溃疡性结肠炎；和纤 维变性病症，包括肝纤维化和肺纤维化。见例如Vergnolle，等，J Clin Invest (2004) 114(10):1444; Yoshida， et al， Aliment Pharmacol Ther (2006) 24(Suppl 4):249; Mercer，等，Ann NY Acad Sci (2007) 1096:86-88; Sokolova and Reiser, Pharmacol Ther (2007) PMID:17532472。 PARI抑制剂(包括 拮抗剂抗体或抗原结合分子)还可用于预防或抑制缺血-再灌注损伤，包括 心肌、肾、脑和肠的缺血-再灌注损伤。参阅例如Strande，等，Basic Res. Cardiol (2007) 102(4):350-8; Sevastos，等，Blood (2007) 109(2):577-583; Junge，等，Proc Natl Acad Sci USA. (2003) 100(22): 13019-24和Tsuboi，等， Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol (2007) 292(2):G678陽83。抑制PARI 细胞内信号转导也可用于抑制细胞的单纯疱疹病毒(HSV1和HSV2)感 染。见Sutherland，等，J Thromb Haemost (2007) 5(5):1055-61。专利技术概述本专利技术一方面提供抗人蛋白酶活化受体-l(hPARl)的单克隆拮抗剂抗 体或抗原结合分子。该抗体或抗原结合分子以和第二抗体相同的结合特异 性结合人PAR1。所述第二抗体具有(i)SEQIDNO:5的重链可变区序列和 SEQ ID NO:6的轻链可变区序列，或(ii) SEQ ID NO:7的重链可变区序列 和SEQ ID NO:8的轻链可变区序列。在一些实施方案中，抗体与下述hPARl表位特异结合，所述表位包 含氨基酸序列 SFLLRNPNDKYEPFWEDEEKNESGLTE (SEQ ID NO:38)或其片段，例如至少8、 9、 10、 11、 12、 13、 14或15个连续^JL 酸的片段。在一些实施方案中，抗体不与来自其他物种的PARI (例如小 鼠PARI (mPARl))或除PARI以外的其它PAR亚型如蛋白酶活化受体 -2(PAR2)发生显著结合(即交叉反应)。一些抗体或抗原结合分子具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22或SEQID NO:23的重链互补性决定区(CDR)序列；或SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的轻链CDR序列。这些分子中的一些具有分别 为SEQ ID NO:21、 SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23的重链CDRl、 CDR2 和CDR3序列；和分别为SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26 的轻链CDR1、 CDR2和CDR3序列。一些抗体或抗原结合分子具有SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:29的重链互补性决定区(CDR)序列；或SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的轻链CDR序列。这些分子中的一些具有分别 为SEQ ID NO:27、 SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29的重链CDRl、 CDR2 和CDR3序列；和分别为SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32 的轻链CDR1、 CDR2和CDR3序列。一些抗体或抗原结合分子具有与SEQ ID NO:5至少85%、卯％、95%、 96%、 97%、 98%、 99%或100%同一性的重链可变区氨基酸序列，和与 SEQIDNO:6至少85%、卯％、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%或100% 同一性的轻链可变区^J^酸序列。而其他一些具有与SEQ ID NO:7至少 85%、卯％、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%或100%同一性的重链可变 区^J^紗列，和与SEQIDNO:8至少85%、 90%、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%或100%同一性的轻链可变区氨基酸序列。 一些分子具有SEQ ID NO: 5的重链可变区氨基^列和SEQ ID NO:6的轻链可变区^J^絲 列。其他一些具有SEQ ID NO:7的重链可变区M酸序列和SEQ ID NO:8 的轻链可变区氨基酸序列。一些抗体或抗原结合分子具有与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7至少 85%、卯％、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%或100%同一性的重链可变 区JL&酸序列。 一些抗体或抗原结合分子具有与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8至少85%、 90%、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%或100%同一性 的轻链可变区氨基酸序列。本专利技术的一些抗-hPARl抗体或抗原结合分子是小鼠抗体。其他一些 是嵌合抗体。 一些抗-hPARl分子是人源化抗体。其他一些是人抗体。还有一些其他的是单链抗体、Fab片段或具有来自人纤连蛋白III型结构域 的支架(scaffold)的单抗体(monobody)。另一方面，本专利技术提供了分离或重组的多核苷酸，其编码含有抗 -hPARl抗体或抗原结合分子的重链可变区或轻链可变区的多肽。 一些多 核苷酸编码含有人抗体可变区的多肽。该多肽可含有分别为SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】
与人ＰＡＲ１的表位特异结合的抗体或抗原结合分子，其中该表位包含氨基酸序列ＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦＷＥＤＥＥＫＮＥＳＧＬＴＥ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３８），且其中该抗体或抗原结合分子是ＰＡＲ１拮抗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2006.7.18 US 60/831,800;2007.7.17 US 11/778,9241.与人PAR1的表位特异结合的抗体或抗原结合分子，其中该表位包含氨基酸序列SFLLRNPNDKYEPFWEDEEKNESGLTE(SEQ IDNO38)，且其中该抗体或抗原结合分子是PAR1拮抗剂。2. 4又利要求1的抗体或抗原结合分子，其包含SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的重链互补性决定区(CDR)序列；或SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的轻链CDR序列。3. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其包含分别为SEQ ID NO:21、 SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23的重链CDR1、 CDR2和CDR3序列； 和分别为SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26的轻链CDRl、 CDR2和CDR3序列。4，权利要求l的抗体或抗原结合分子，其包含SEQIDNO:27、SEQID NO:28或SEQ ID NO:29的重链互补性决定区(CDR)序列；或SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:31,或SEQ ID NO:32的轻链CDR序列。5. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其包含分别为SEQ ID NO:27、 SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29的重链CDR1、 CDR2和CDR3序列； 和分别为SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32的轻链CDRl、 CDR2和CDR3序列。6. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其包含(i)与SEQ ID NO:5具 有至少85%同一性的重链可变区^酸序列和与SEQ ID NOA具有至少 85%同一性的轻链可变区氨基酸序列，或(ii)与SEQ ID NO:7具有至少 85。/。同一性的重链可变区M酸序列和与SEQ ID NO:8具有至少85%同 一性的轻链可变区JlJ^酸序列。7. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其包含(i) SEQ ID NO:5的重 链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:6的轻链可变区氨基酸序列，或(ii) SEQ ID NO:7的重链可变区^J^酸序列和SEQ ID NO:8的轻链可变区氨 基酸序列。8. 权利要求l的抗体或抗原结合分子，其为小鼠抗体。9. 权利要求l的抗体或抗原结合分子，其为单克隆抗体。10. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其为嵌合抗体。11. 权利要求10的抗体或抗原结合分子，其包含人重链恒定区和人轻 链恒定区。12. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其为人源化的抗体。13. 权利要求l的抗体或抗原结合分子，其为人抗体。14. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其为单链抗体。15. 权利要求1的抗体或抗原结合分子，其为Fab片段。16. 权利要求l的抗体或抗原结合分子，其为具有来自人纤连蛋白III 型结构域的支架的单抗体。17. 分离的或重组的多核苷酸，其编码与人PAR1的表位特异结合的 抗体或抗原结合分子，其中该表位包含氨基酸序列 SFLLRNPNDKYEPFWEDEEKNESGLTE (SEQ ID NO:38)，且其中该抗 体或抗原结合分子为PARI拮抗剂。18. 权利要求17的多核苷酸，其中该抗体或抗原结合分子是人抗体。19. 权利要求17的多核苷酸，其中该抗体或抗原结合分子包含(i)分别 为SEQ ID NO:21、 SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23的重链CDR1、 CDR2 和CDR3序歹'h和分别为SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26 的轻链CDR1 、 CDR2和CDR3序列；或(ii)分别为SEQ ID NO:27、 SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29的重链CDR1 、 CDR2和CDR3序列；和分别为 SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32的轻链CDR1、 CDR2 和CDR3序列。20. 权利要求17的多核苷酸，其中该抗体或抗原结合分子包含(i)与 SEQ ID NO:5的成熟区具有至少90%同一性的成熟重链可变区序列，和与 SEQ ID NO:6的成熟区具有至少90%同一性的成熟轻链可变区序列；或(ii) 与SEQ ID NO:7具有至少90%同一性的成熟重链可变区氨基酸序列，和 与SEQ ID NO:8具有至少卯％同一性的成熟轻链可变区#^酸序列。21. 权利要求17的多核苷酸，其中该抗体或抗原结合分子包含(i)与 SEQ ID NO:5的成熟区相同的成熟重链可变区序列，和与SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·B·科恩，M·纳索弗，
申请(专利权)人：IRM责任有限公司，
类型：发明
国别省市：VG