本发明专利技术涉及对铁调素具有特异性的抗原结合蛋白，及其在治疗和诊断铁调素相关疾病中的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及识别人铁调素(hepcidin)的成熟形式的抗体或片段，及其用于治疗 和诊断与铁调素相关的疾病。
技术介绍
铁是几乎每个有机体的生长和成活都需要的基本元素。因此，铁代谢的紊乱涉及 许多重要的哺乳动物的疾病，包括但不限于缺铁性贫血、含铁血黄素沉着症或铁过载疾 病血色沉着症(PIETRANGELO, Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol, 282, G403-14， 2002 ；ANDREWS, AnnuRev Genomics Hum Genet，1，75-98，2000 ；PHILPOTT, H印atology，35， 993-1001,2002 ；ANDERSON & POWELL, Int J Hematol，76，203-7，2002 ；BEUTLER 等人，Drug Metab Dispos，29，495-9，2001)。缺铁症是世界上最普遍的营养紊乱。多达40-50亿人(S卩，世界总人口的 65-80%)可能缺铁，且20亿人(超过世界总人口的30%，大多数儿童和育龄妇女)贫血， 主要由缺铁症引起。缺铁症比任何其他情况影响着更多的人，构成流行病比例的公共卫生 状况。哺乳动物中，首先在饮食铁的十二指肠吸收水平调节铁平衡。吸收后，铁离子装 载入循环中的apo-转铁蛋白中病转运到组织，包括红血球前体细胞，在那里由转铁蛋白受 体介导的细胞内吞作用接受。网状内皮的巨噬细胞在铁从衰老红血球的血色素的降解循 环中起着重要的作用，而肝细胞在铁蛋白聚合体中包含有机体的大部分铁储存。存在提高 缺铁个体的铁吸收的反馈机制，而用铁过载减少人体中的铁吸收。然而，在遗传性血色沉 着症(HH)中，这种调节机制似乎被削弱；尽管铁过载，从饮食中吸收增加的铁量并导致过 量的铁累积在内脏器官中，引起器官机能障碍并损坏。对于肠通过何种分子机制应答体内 铁需求的变化了解甚少。本文中，铁调素，一种最近确定的哺乳动物的肽(KRAUSE等人， FEBSLett，480，147-50，2000 ;PARK 等人，J Biol Chem，276，7806-10，2001)，显示是调节铁 体内平衡的关键信号成分(NICOLAS 等人.，Proc Natl Acad SciUSA，99，4596-601，2002)。铁调素通过结合到细胞的铁输出器一膜铁转运蛋白(ferroportin)并使其内在 化和降解来调节铁体内平衡(NEMETH等人.，Science，306，2090-3，2004)。膜铁转运蛋白 降解的结果是铁保存在细胞中并因此减少循环铁。通过这种机制，铁调素减少铁从铁输出 组织流入血浆并因此减少饮食铁吸收，减少循环的铁从巨噬细胞中的释放，减少贮存的铁 从肝细胞中的释放，以及减少铁通过胎盘的传输。铁调素是一种小的富含半胱氨酸的肽，主要在肝脏中生成。这种分子调节铁在肠 中的吸收并抑制铁从巨噬细胞中释放。铁调素最初作为一种25个氨基酸(aa)的肽从人 血浆和尿中分离，所述肽显示抗微生物活性(KRAUSE等人，FEBS Lett, 480,147-50, 2000 ； PARK等人，J Biol Chem，276，7806-10，2001)。在小鼠中编码83个aa的前体并在大鼠和 人中编码84个aa的前体，包括推测的24个aa的信号肽的铁调素cDNA随后被确定为寻找 由铁调节的肝脏-特异基因(PIGEON等人，J Biol Chem，276，7811-9，2001)。人铁调素以384个氨基酸的前肽原表达，所述前肽原的氨基末端处理成约10kDa、60个氨基酸残基前体 (铁调素原)，其再进一步处理成约3kDa、25个氨基酸的成熟肽(铁调素-25)。除25-氨基 酸形式之外，N端截断的20-和22-氨基酸形式也在尿中检测出(PARK等人，J BiolChem, 276，7806-10, 2001)。然而，这些N-截断的变体似乎没有铁调节功能(RIVERA等人，Blood， 106，2196-9，2005 ；NEMETH 等人，Blood，107，328-33，2006)。因此，一般认为，铁调素-25 是 主要负责铁调素的低铁血(hypoferremic)效果的生物活性物质形式。铁调素是铁体内平衡的主要调整者。铁调素不足在大多数铁过载紊乱中起了主 要作用，另外，铁调素过量与几种形式的贫血有关。例如，Nicolas G.等人(2002)显示铁 调素的超量表达导致转基因小鼠的严重贫血(NICOLAS等人，Proc Natl Acad Sci USA, 99，4596-601，2002)。最近的研究报道了铁调素是炎症贫血的关键调节者(NEMETH等人， Blood，101，2461-3，2003)。而且，不同的疾病报道了异常高浓度的铁调素，例如与肾病相 关的贫血(T0M0SUGI等人，Blood，108，1381-7，2006)、与严重败血症相关的贫血(KEMNA等 人，Blood，106，3268-70，2005)、与 Crohn，s 疾病相关的贫血(SEMRIN 等人，Inflamm Bowel Dis, 12,1101-6,2006)和与肝腺瘤相关的铁难治性贫血(WEINSTEIN等人，Blood，100， 3776-81,2002)。由于铁体内平衡紊乱涉及调素，考虑到这些紊乱的诊断和监控，对其在血浆或尿 中的检测和量化建议了各种试验。然而，有效的抗铁调素抗体的缺乏已经妨碍了免疫化学试剂的发展。已经描述 了使用多克隆抗铁调素兔子抗体的免疫化学试验，但是它仅允许在尿中量化铁调素，而不 是在血浆中(NEMETH等人，Blood，101，2461-3，2003)。也已经描述了用以对抗铁调素原 的 aa 28-47 (EG(I)-IfepN 和 EG(2)-H印N)和 aa 70-84 (EG(1)-HepC)的兔子抗血清(PCT appIicationffO 2004/058044 ； (KULAKSIZ 等人，Gut，53，735-43，2004)。这些抗血清在人血 清中检测铁调素原；然而，它们都没有识别生物活性的铁调素-25。迄今，没有描述能在血清中识别铁调素-25的抗体，仅描述了基于质谱分析的检 测铁调素-25 的可行试验(T0M0SUGI 等人，Blood，108，1381-7，2006) (MURPHY 等人，Blood， 110，1048-54，2007)。而且，作为铁调素拮抗剂的抗体，即能抑制铁调素结合到膜铁转运蛋白以及随后 的膜铁转运蛋白内在化和降解将有利于治疗源自铁调素过量的病症。因此，识别铁调素-25并允许其在血清中测定，以及能抑制铁调素结合至膜铁转 运蛋白的抗体显得非常需要。
技术实现思路
本专利技术成功获得这样一个抗体。这种单克隆抗体，下文称为“AN-LP1”，由依照布达佩斯条约的条款于2007年8 月 14 日在 CNCM(Collection Nationale de Cultures deMicroorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux,75724 ParisCedex 15, France)保藏的、本文档来自技高网...
【技术保护点】
抗原结合蛋白，其特征在于，其能够结合人铁调素－２５，其至少包含由杂交瘤细胞ＣＮＣＭＩ－３７９４生成的抗体ＡＮ－ＬＰ１的重链的ＶＨ－ＣＤＲ３和轻链的ＶＬ－ＣＤＲ３。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2007-10-2 07291196.9抗原结合蛋白，其特征在于，其能够结合人铁调素 25，其至少包含由杂交瘤细胞CNCM I 3794生成的抗体AN LP1的重链的VH CDR3和轻链的VL CDR3。2.如权利要求1的抗原结合蛋白，其特征在于，其还包含抗体AN-LPl的重链的 VH-CDRl 和轻链的 VL-CDRl。3.如权利要求1或2的抗原结合蛋白，其特征在于，其还包含抗体AN-LPl的重链的 VH-CDR2 和轻链的 VL-CDR2。4.如权利要求1至3任一的抗原结合蛋白，其特征在于，其选自a)由杂交瘤细胞CNCM1-3794产生的单克隆抗体AN-LPl ；b)抗体AN-LPl的抗原结合片段；c)由AN-LPl获得的嵌合或人化抗体；d)上述c)抗体的抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：索菲沃隆特，于格加斯康，若西弗罗热，
申请(专利权)人：国家健康与医学研究院，国家科研中心，
类型：发明
国别省市：FR
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