一种组胺H1受体拮抗剂的筛选方法技术

本发明专利技术通过采用无标记细胞靶点药理学技术监测组胺作用于A-431细胞或A-549细胞后引起的DMR响应信号，再次以组胺作用于A-431细胞或A-549细胞后引起的DMR响应信号呈剂量依赖性脱敏，证明A-431细胞或A-549细胞上高表达H1受体，且受体激动后引起的DMR响应信号可成功被监测。以特异性组胺H1受体拮抗剂预处理A-431细胞或A-549细胞不引起DMR响应信号，但再次加入组胺后组胺的DMR响应信号被剂量依赖性地拮抗。由此成功建立组胺H1受体拮抗剂筛选方法：首先监测待筛选化合物预处理A-431细胞或A-549细胞所引起的DMR响应信号，如果待筛选化合物不引起DMR响应信号，而再次加入组胺后组胺的DMR响应信号被拮抗，根据响应信号被拮抗程度判断化合物对H1受体的拮抗活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物筛选研究领域，具体涉及一种组胺H1受体拮抗剂的筛选方法。
技术介绍
组胺通常以非活化状态存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞中，当受到创伤和抗原抗体反应等外界刺激后，以活化的形式释放出细胞外，参与炎症反应[1]。组胺通过与组胺受体结合而发挥其生理作用。人体内的组胺受体可以分为4型：H1、H2、H3和H4受体。这4种类型组胺受体均是G蛋白偶联受体(G-protein-coupledreceptors,GPCRs)，通过G蛋白转导细胞外信号至细胞内第二信号系统[1,2]。组胺介导的变应性炎症效应主要是结合H1受体，引起皮肤黏膜充血、水肿和瘙痒等，剂量较大的情况下，引起平滑肌收缩、全身毛细血管扩张和通透性增加，表现为哮喘、过敏性休克、心动过速、皮肤潮红和鼻充血等[3]。H1受体拮抗剂通过竞争性地与H1受体结合而阻断组胺与H1受体结合，从而抑制组胺发挥生物学效应[4]。这是药物发挥抗变态反应作用的主要机制。临床上使用的组胺H1受体拮抗剂为抗过敏和止痒的重要药物，但普遍存在中枢抑制、抗胆碱、心脏毒性、体重增加等副作用[5]。因此，有必要建立一种组胺H1受体拮抗剂的高通量筛选方法，从而迅速有效的为组胺H1受体拮抗剂的新药研发提供先导化合物。无标记细胞靶点药理学技术具有高灵敏度、无标记和无伤害等特点，其原理是通过共振波导光栅(resonantwaveguidegrating,RWG)生物传感器将药物作用于膜受体后引发细胞内动态的物质重置(dynamicmassredistribution,DMR)信号转变成光的波长位移信号[6-7]。现已广泛应用于受体生物学的研究[8-9]和药物的发现[10-11]。鉴于此，本专利技术基于无标记细胞靶点药理学技术，建立了组胺H1受体拮抗剂筛选的新方法，高通量快速筛选组胺H1受体拮抗剂。参考文献：MacGlashanDJr.Histamine:Amediatorofinflammation.JAllergyClinImmunol,2003,112(4Suppl):S53-9.HillSJ,GanellinCR,TimmermanH,etal.InternationalUnionofPharmacology.XIII.Classificationofhistaminereceptors.PharmacolRev,1997,49(3):253-78.SimonsFE.AdvancesinH1-antihistamines.NEnglJMed,2004,351(21):2203-17.SimonsFE,SimonsKJ.ThepharmacologyanduseofH1-receptor-antagonistdrugs.NEnglJMed,1994,330(23):1663-70.SimonsFE,SimonsKJ.HistamineandH1-antihistamines:celebratingacenturyofprogress.JAllergyClinImmunol.2011,128(6):1139-50.FangY,FerrieAM,FontaineNH,etal.Resonantwaveguidegratingbiosensorforlivingcellsensing.BiophysJ,2006,91(5):1925-40.KenakinTP.Cellularassaysasportalstoseven-transmembranereceptor-baseddrugdiscovery.NatRevDrugDiscov,2009,8(8):617-26.SunH,WeiY,DengH,etal.Label-freecellphenotypicprofilingdecodesthecompositionandsignalingofanendogenousATP-sensitivepotassiumchannel.SciRep,2014,12(4):4934.DengH,HuH,FangY.MultipletyrosinemetabolitesareGPR35agonists.SciRep,2012,2:373.FangY.Label-freecell-basedassayswithopticalbiosensorsindrugdiscovery.AssayDrugDevTechnol,2006,4(5):583-95.FangY.GuestEditor'sIntroduction:Label-freeopticalbiosensorstocellbiologyanddrugdiscovery.JReceptSignalTransductRes,2009,29(3-4):127.
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于无标记细胞靶点药理学技术，建立组胺H1受体拮抗剂筛选的新方法，高通量快速筛选组胺H1受体拮抗剂。所采用的技术方案为：本专利技术涉及一种组胺H1受体拮抗剂的筛选方法，本专利技术通过采用无标记细胞靶点药理学技术监测组胺作用于A-431细胞或A-549细胞后引起的DMR响应信号，再次以组胺作用于A-431细胞或A-549细胞后引起的DMR响应信号呈剂量依赖性脱敏，证明A-431细胞或A-549细胞上高表达H1受体，且受体激动后引起的DMR响应信号可成功被监测。以特异性组胺H1受体拮抗剂预处理A-431细胞或A-549细胞不引起DMR响应信号，但再次加入组胺后组胺的DMR响应信号被剂量依赖性地拮抗。由此成功建立组胺H1受体拮抗剂筛选方法：首先监测待筛选化合物预处理A-431细胞或A-549细胞所引起的DMR响应信号，如果待筛选化合物不引起DMR响应信号，而再次加入组胺后组胺的DMR响应信号被拮抗，根据响应信号被拮抗程度判断化合物对H1受体的拮抗活性。本专利技术通过监测H受体激动剂组胺作用于A-431细胞或A-549细胞后引起的DMR响应信号，发现组胺在A-431细胞或A-549细胞上能够引起DMR响应信号，且呈剂量依赖性；以不同浓度的组胺预处理A-431细胞或A-549细胞后，再次加入固定浓度的组胺，监测所引起的DMR响应信号，发现预处理时组胺的浓度越高第二步加入组胺所引起的DMR响应信号被脱敏越明显，呈剂量依赖性。阿司咪唑、氯雷他定为特异性组胺H1受体拮抗剂，以不同浓度的阿司咪唑或氯雷他定预处理A-431细胞或A-549细胞后，再次加入固定浓度的组胺，监测所引起的DMR响应信号，发现阿司咪唑和氯雷他定分别剂量依赖性地拮抗组胺所引起的DMR响应信号。组胺H1受体在A-431细胞和A-549细胞中表达，因此上述结果提示，采用无标记细胞靶点药理学技术可以成功监测A-431细胞或A-549细胞上H1受体被组胺激动所引起的DMR响应信号及组胺受体激动剂或拮抗剂预处理后引起组胺脱敏或拮抗的DMR响应信号。由此成功建立组胺H1受体拮抗剂筛选方法：首先监测待筛选化合物预处理A-431细胞或A-549细胞后所引起的DMR响应信号，如果待筛选化合物不引起DMR响应信号，则继续加入组胺，监测组胺所引起的DMR响应信号是否被拮抗，判断化合物对组胺H1受体的拮抗活性。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组胺H1受体拮抗剂的筛选方法，其特征在于：所述组胺H1受体拮抗剂的筛选方法采用无标记细胞靶点药理学技术高通量筛选组胺H1受体拮抗剂；首先监测待筛选化合物预处理的人表皮癌细胞(A‑431细胞)或人非小细胞肺癌细胞(A‑549细胞)后所引起的DMR响应信号，如果待筛选化合物不引起DMR响应信号，则继续加入组胺，监测组胺所引起的DMR响应信号是否被拮抗，判断所述待筛选化合物对组胺H1受体的拮抗活性。

【技术特征摘要】
1.一种组胺H1受体拮抗剂的筛选方法，其特征在于：所述组胺H1受体拮抗剂的筛选方法采用无标记细胞靶点药理学技术高通量筛选组胺H1受体拮抗剂；首先监测待筛选化合物预处理的人表皮癌细胞(A-431细胞)或人非小细胞肺癌细胞(A-549细胞)后所引起的DMR响应信号，如果待筛选化合物不引起DMR响应信号，则继续加入组胺，监测组胺所引起的DMR响应信号是否被拮抗，判断所述待筛选化合物对组胺H1受体的拮抗活性。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述组胺H1受体拮抗剂筛选方法包括如下步骤，A.细胞培养：A-431细胞用含有10％的胎牛血清、100U/ml氨苄青霉素、100μg/ml硫酸链霉素的DMEM培养基，在37℃、5％CO2的培养箱中培养；A-549细胞用含有10％的胎牛血清、100U/ml氨苄青霉素、100μg/ml硫酸链霉素的F12K培养基，在37℃、5％CO2的培养箱中培养；B.收获步骤A所培养的A-431细胞或A-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，史丽颖，张秀莉，侯滔，王纪霞，何牮，魏来，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21