抵抗胞内劳森菌的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及非活性的含有碳水化合物的组合物的用途，该碳水化合物在活的胞内劳森菌细胞中也能找到，与这些细胞的外细胞膜相连，该组合物用于制造抵抗胞内劳森菌感染的疫苗，该疫苗是适于全身给药的形式。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抵抗胞内劳森菌的疫苗本专利技术涉及用于抵抗胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis)感染的疫苗，在这 个意义上，疫苗是至少提供胞内劳森菌感染的负面影响降低的组合物，如组织损伤和/或 临床病征(如，下降的体重增加，腹泻等)的负面影响。许多动物(特别是猪)的增生性肠炎呈现出不成熟隐窝上皮细胞粘膜增生的临床 病征和病理症状，特别是在末端回肠中。可以受到影响的小肠的其他部位包括空肠、盲肠和 结肠。断奶幼畜和仔猪主要受到体重快速减轻和脱水的典型临床表现的影响。猪的自然临 床疾病在全世界范围内发生。该疾病始终与胞内曲状细菌(目前已知为胞内劳森菌)的存 在相关。通常，对抗胞内劳森菌的口服接种疫苗已经显示出是一种在经济上有效的措施， 以控制回肠炎和更好地开发猪的遗传生长潜能(Porcine Proliferative Enteropathy Technical manual 3. 0 (猪增生性肠炎技术手册3. 0)，2006年7月；获自Boehringer Ingelheim)。此外，口服而非非肠道的疫苗接种将降低血液携带感染(如通过多次使用的 针的PRRS)的传播以及注射部位反应的减少和保留在畜体内的针。与单独的疫苗接种相 比，这将减少动物和人的应激、时间、劳动成本和精力(McOrist :"Ileitis-0ne Pathogen, Several Diseases，，，IPVS Ileitis Symposium in Hamburg, 2004 年 6 月 28 日)。通常了解减毒活疫苗方法的优势是免疫的功效通常是相对良好的，因为宿主的免 疫系统以更“自然”的方式暴露于生物体的所有抗原物质。特别地，对于胞内细菌剂，如胞 内劳森菌，由于基于完全的和合适的T细胞的免疫应答，认为活的减毒疫苗方法给接种疫 苗的动物给予了最好利用的保护。这与用于胞内细菌的亚基或杀灭疫苗类型相关的不定的 差的免疫性相反。这对于专性胞内细菌(如，胞内劳森菌或衣原体(Chlamydia))也特别如 此，这些胞内细菌在粘膜内引起致病的感染。研究表明目标胞内细菌完整的活减毒形式最 好递送至靶粘膜，它们需要作为完整的活细菌形式，以在靶粘膜中产生完全保护性的免疫 应答，而且与使用部分细菌成分相比，它们在免疫上也是较好的。一般的理解是需要口服给予对抗胞内劳森菌的疫苗(参见上文中提到的 Technical Manual 3.0)。这是基于如下的事实身体抵抗回肠炎的基础是小肠中的局部 免疫力，这是细胞介导的免疫力和通过抗体(尤其是IgA)的局部防御的结果。根据目前 的知识，血清抗体(IgG)不能给予任何保护，只是因为它们没有到达肠腔。已经在研究中 证明了口服疫苗接种产生细胞介导的免疫力，以及在肠道中局部产生IgA(Murtaugh，见 Agrar-und Veter inar -Akademie, Nutztierpraxis Aktuel 1, Ausgabe 9, Juni 2004 ；禾口 Hyland 等，见 Veterinary Immunology and Immunopathology 102 (2004) 329-338)。相反， 肌内给药没有产生保护。此外，紧次于对抗胞内细菌的成功疫苗必须诱导细胞介导的免疫 力以及局部抗体的产生的一般了解，本领域技术人员知道实际上仅有非常低百分比的口服 摄入的抗原被肠上皮细胞吸收，并且胞内劳森菌掺入细胞中是通过细菌启动的活性过程。 因此，灭活的疫苗将给肠提供具有不充足的免疫原性抗原(Haesebrouck等，见Veterinary Microbiology 100 (2004) 255-268)。这是为什么认为只有减毒的活疫苗在肠细胞中诱导足 够的细胞介导的保护(参见上文中提到的Technical Manual 3.0)。目前，市场上只有一种抵抗胞内劳森菌的疫苗，由Boehringer Ingelheim销售的viz. Enter i SO1 Ileitis。 这种疫苗是真正的用于口服给药的活疫苗。本专利技术的目的是提供抵抗胞内劳森菌感染的可替换疫苗。为此，专利技术了使用非活 性的含有碳水化合物的组合物，这些碳水化合物在活的胞内劳森菌细胞中也能找到，与这 些细胞的外细胞膜相连，将组合物用于制造抵抗胞内劳森菌感染的疫苗，该疫苗是适于全 身给药的形式。令人惊讶地，与长久以来对怎样对抗胞内劳森菌的一般了解相反，发现使用 含有碳水化合物的非活性组合物，例如，从胞内劳森菌的外细胞膜提取的，作为疫苗中的抗 原，可以诱导对抗胞内劳森菌的保护，当将抗原全身给药时，即，以到达身体循环系统的方 式(包括心血管和淋巴系统)，这种保护与使用活疫苗Enteri so 1 ileitis(根据相应 的说明书来给药)提供的保护相当或甚至有提高，因此影响作为整体的身体，而不是特定 部位，如胃肠道。例如，可以通过将抗原给予肌肉组织中(肌内)、真皮中(皮内)、皮肤下 (皮下)、粘膜下(膜下)、静脉中(静脉内)等来进行全身给药。除了可获得的非常好的保 护以外，本专利技术非活性疫苗的重要优点在于当与活疫苗比较时固有的安全性。通常，可以通过使用本领域已知的方法将含有碳水化合物的组合物用于制造疫 苗，这些方法基本上包括将含有抗原性碳水化合物的组合物(或从其衍生的组合物，如原 始组合物或提取物的稀释物或浓缩物，一种或多种纯化成分等)与药物学上可接受的载体 混合，所述载体例如为液体载体，如(任选缓冲的)水，或固体载体，如通常用于获得冷冻干 燥疫苗的那些。因此，可以在工业环境中进行制造，也可以就地(即，在兽医处、农场等)将 抗原与其他疫苗混合，例如，在实际给药于动物之前(立即)混合。在疫苗中，抗原应当以 免疫有效量存在，即，能够刺激目标动物的免疫系统足以至少降低用野生型生物体的接种 后激发的负效应的含量。任选地，可以加入其他物质，如佐剂、稳定剂、粘度调节剂或其他成 分，这取决于预期的用途或所需的疫苗特性。对于全身性疫苗接种，许多形式是合适的，特 别是液体制剂(含有溶解的、乳化的或悬浮的抗原)，以及固体制剂，如植入物或介质形式， 如用于抗原悬浮于液体中的固体载体。全身性疫苗接种，特别是非肠道疫苗接种(即，不通 过消化道)，和用于全身性疫苗接种的合适疫苗(物理)形式已经知道有200多年了。注意到已经报道了胞内劳森菌细菌的亚基作为疫苗中的抗原，用于保护以对抗这 种细菌。然而，这些主要是重组蛋白，并且迄今为止没有一个证明了能够提供良好的保护。 也提出了将杀灭的细菌(其固有地含有也能在活的胞内劳森菌细胞中找到的与外细胞膜 相连的碳水化合物)作为对抗胞内劳森菌的疫苗中的抗原，但实际上尚未测试和报道基于 杀灭的全细胞的疫苗能提供良好的保护。除此之外，由于通常的理解是对全身性给药抗原 来局部(即，在肠中)对抗胞内劳森菌不存在合理的期望，因此没有结合这些杀灭的细菌来 使用全身性给药。在这点上，注意到W097/20050 (Daratech PTY Ltd)提及了使用杀灭的胞内劳森菌 细菌来使猪免疫。然而，没有提及全身性给药。基于目前的支持，只在口服给药时，疫苗接 种才是有效的，通常理解口服途径是为Daratech申请中所述的实验选择的给药途径。本文档来自技高网...

【技术保护点】
非活性的含有碳水化合物的组合物的用途，该碳水化合物在活的胞内劳森菌细胞中也能找到，与这些细胞的外细胞膜相连，该组合物用于制造抵抗胞内劳森菌感染的疫苗，该疫苗是适于全身给药的形式。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AAC雅各布斯，P维尔梅吉，RPAM塞吉尔斯，CC施里尔，
申请(专利权)人：英特威国际有限公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]