【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品
技术介绍
猪伪狂犬病是威胁养猪业的两大传染病之一，我国主要通过预防接种伪狂犬活疫 苗来控制该病。目前国内各兽用生物制品企业生产猪伪狂犬病活疫苗均采用鸡胚成纤维原 代细胞。而鸡胚成纤维原代细胞往往采用水解乳蛋白培养基培养，水解乳蛋白中含有很多 未知的动物蛋白成分，在临床应用中有很多过敏反应发生。另外，鸡胚成纤维细胞繁殖的伪 狂犬病毒含量多在106_°TCID5(i/0. lml左右。国外已采用猪睾丸(ST)传代细胞生产猪伪狂 犬病活疫苗，国内还没有生物制品企业采用传代细胞生产猪伪狂犬病活疫苗。ST细胞对培 养基和牛血清要求比较严格，所以培养比较困难。很多科研机构都在筛选适应于病毒株的 细胞株，以用于科研或生产。
技术实现思路
将ST细胞进行多次克隆，最后筛选了 STC细胞克隆株。该细胞株易于培养，且对 猪伪狂犬病毒(Batha K/61gI_株)高度敏感，用于生产高效猪伪狂犬病活疫苗。附图说明图1 ST (A)、STC (B)培养24小时细胞形态图2 PRV接种ST (A)和STC (B)细胞后24小时细胞病变图3 ST细胞生长曲线图4 PRV在克隆STC细胞的生长曲线图5 STC细胞外源病毒检测结果M :标准分子且 2000bp DNA Ladder ;Lane 2\4\6\8 :STC 克隆细胞；Lanel :DNA 病毒PCV1 PCR产物，分子量大小413bp ；Lane3 RNA病毒BVDV RT-PCR产物，分子量大小 290bp ；Lane5 :RNA 病毒 EMCV RT-PCR 产物，分子量大小 186b...
【技术保护点】
STC细胞的特点及用途ST细胞为猪睾丸细胞，体外培养呈贴壁生长、并可进行连续传代培养。ST细胞培养比较困难，对营养要求较高。克隆的STC细胞株易于培养。PRV可在STC细胞上繁殖，产生CPE，因此可用于生产猪伪狂犬病活疫苗。
【技术特征摘要】
1.STC细胞的特点及用途 ST细胞为猪睾丸细胞，体外培养呈贴壁生长、并可进行连续传代培养。ST细胞培养比较困难，对营养要求较高。克隆的STC细胞株易于培养。PRV可在STC细胞上繁殖，产生CPE,因此可用于生产猪伪狂犬病活疫苗。2.根据I所述的STC细胞克隆株，是通过以下方法获得的 DST母细胞的连续有限稀释将保存的ST母细胞株稀释成单个细胞铺于96孔细胞板，10天左右观察孔内细胞克隆数，将单个克隆继续稀释成单个细胞，即亚克隆，经三次亚克隆后，挑单克隆株进行扩大培养，并接毒、观察细胞病变，检测其对PRV Batha K/61gl_株的易感性如何，将筛选得到的PRV Batha K/61 gl_株易感的ST...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹秀凤，陈念劬，徐凯，
申请(专利权)人：南京天邦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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