一种重组肿瘤疫苗及其生产方法技术

本申请涉及用于预防和治疗肿瘤以及癌症的肿瘤疫苗。肿瘤疫苗可以含有编码用于预防和治疗肿瘤以及癌症的抗原提呈肽、细胞因子和其它因子的核酸，或含有此类核酸的表达载体或病毒，或含有此类核酸或表达载体的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
抗原提呈是适应性免疫应答中的一个过程，期间抗原提呈细胞捕获抗原并将抗原提呈至其表面以供T细胞识别。抗原和主要组织相容性复合物(MHC)分子位于抗原提呈细胞表面，其能够被T细胞受体识别和结合，藉此促进抗原提呈。一旦T细胞识别了细胞表面的抗原，其活化并产生针对抗原的免疫应答。通过抗原提呈，T细胞能够产生针对外源性抗原和内源性抗原的免疫应答。细胞因子在免疫应答调控中发挥着重要作用。细胞因子是由免疫系统中的细胞分泌的低分子量蛋白，其具有发送调节免疫系统信号的功能。不同细胞因子能够传送不同信号。例如，某些细胞因子能够刺激免疫细胞的增殖或成熟；某些细胞因子能够引导免疫细胞的迁移；以及某些细胞因子能够增强基于细胞的免疫应答。 据信，癌症或肿瘤至少部分地与人体内对癌变的免疫应答减弱或缺乏相关。多种疗法已被用于治疗癌症，包括基因疗法。用于癌症治疗的基因疗法可以涉及到输送能够杀伤或抑制癌细胞的基因、能够增强针对癌细胞免疫应答的基因、能够修复或代替基因突变或改变的基因、或能够使癌细胞对化疗或放疗更为敏感的基因。专利技术概述本专利技术涉及用于预防或治疗肿瘤和癌症的重组肿瘤疫苗。该肿瘤疫苗可以包含编码用于预防和治疗肿瘤以及癌症的抗原提呈肽、细胞因子和其它因子的核酸，和/或含有此类核酸的表达载体，和/或含有此类核酸和/或表达载体的宿主细胞。本专利技术还涉及包含肿瘤疫苗的药物组合物以及使用肿瘤疫苗预防和治疗肿瘤和癌症的方法。一方面，本专利技术提供了一种重组肿瘤疫苗，其包含编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸、编码细胞因子的第二多核苷酸、和至少一个启动子的组合物，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一个。另一方面，本专利技术提供了一种重组肿瘤疫苗，其包含具有编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、编码细胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一个启动子的表达载体，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一个。另一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，包含药学上可接受的载体以及含有编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸、编码细胞因子的第二多核苷酸、和至少一个启动子的肿瘤疫苗，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一个。另一方面，本专利技术提供了一种治疗肿瘤的方法，包括向对象给予药物组合物，其包含药学上可接受的载体以及含有编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸、编码细胞因子的第二多核苷酸、和至少一个启动子的肿瘤疫苗，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一个。另一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，包含药学上可接受的载体以及含有编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、编码细胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一个启动子的肿瘤疫苗，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一个。另一方面，本专利技术提供了一种治疗肿瘤的方法，包括向对象给予药物组合物，其包含药学上可接受的载体以及含有编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、编码细胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一个启动子的肿瘤疫苗，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一个。前述专利技术概述仅仅是示例性的，而非旨在以任何方式进行限定。另外除上文所述示例性的方面、实施方式和特征外，更多方面、实施方式和特征将通过引用附图和下文的详细说明给出。附图的简要说明图I为表达载体pAd-HSP-hGM-CSF的示意图。图2为腺病毒基因组Ad-HSP-hGM-CSF的示意图。图3为腺病毒基因组Ad-HSP-mGM-CSF的示意图。图4显示了在B16细胞(a)、Ifep3B细胞(b)、和Hela细胞(C)中通过ELISA测定的mGM-CSF的表达水平，其分别在10、100和1000的感染复数(MOI)下被Ad-HSP-mGM-CSF感染。图5显示了在B16细胞(a)、Ifep3B细胞(b)、和Hela细胞(C)中通过ELISA测定的hHSP70的表达水平，其分别在10、100和1000的MOI下被Ad-HSP-mGM-CSF感染。图6显示了在感染复数为300时Ad-HSP-hGM-CSF对不同肿瘤细胞的细胞毒性作用。图7显示了在感染复数为100时Ad-HSP-hGM-CSF对不同肿瘤细胞的细胞毒性作用。图8显示了在感染复数为30时Ad-HSP-hGM-CSF对不同肿瘤细胞的细胞毒性作用。图9显示了 Ad-HSP-mGM-CSF对7种不同类型细胞的细胞毒性作用。附图说明图10显示了给予小鼠Ad-HSP-mGM-CSF后肿瘤尺寸的改变。专利技术详述在以下详细说明中，引用附图作为参考，这些附图也为本专利技术的其中一部分。附图中，除非上下文另有说明，否则类似符号一般表示类似的组分。在详细说明、附图和权利要求中描述的示例性实施方式不具有限定作用。在不脱离本专利技术主旨和范围的前提下，可以利用其它实施方式并可以进行其它改变。核酸组合物本专利技术涉及一种重组肿瘤疫苗，其具有含编码抗原提呈多肽的第一多核苷酸、编码细胞因子的第二多核苷酸、和至少一个启动子的组合物，其中至少一个启动子操作性地连接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一个。本文使用的术语“重组”指使用一种或多种分子生物学技术对一种或多种生物分子如多核苷酸或多肽分子进行人工处理，以使得此类生物分子处于不同于其自然状态。本文使用的术语“多核苷酸”或“核酸”指核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、或核糖核酸_脱氧核糖核酸的混合物如DNA-RNA杂交物。多核苷酸或核酸可以是单链或双链DNA或RNA或DNA-RNA杂交物。多核苷酸或核酸可以是线性的或环状的。本文使用的术语“编码”或“为……编码”指能够转录为mRNA和/或翻译为肽或蛋白。“编码序列”或“基因”指编码mRNA、肽或蛋白的多核苷酸序列。在本专利技术中这两个术语可以互换使用。本文使用的术语“mRNA”指与模版DNA序列互补并且能够作为蛋白合成模版的RNA分子。本文使用的术语“抗原提呈多肽”指能够结合抗原、提呈抗原至抗原提呈细胞并且促进抗原提呈细胞识别抗原的多肽或蛋白。本文使用的术语“抗原提呈细胞”指能够在其表面呈现抗原和其主要组织相容性复合物(MHC)的细胞，这样T细胞能够识别所呈现的抗原。呈现的抗原能够被免疫细胞如T细胞识别，藉此产生针对抗原的免疫应答。在某些实施方式中，抗原提呈细胞是树突状细胞、巨噬细胞、B-细胞或上皮细胞。在某些示例性实施方式中，抗原提呈细胞是树突状细胞。 本文使用的术语“操作性地连接”指所述编码序列以允许其表达的方式直接或间接地连接或关联至一个或多个调控序列本文使用的术语“表达”指编码序列转录为mRNA和/或编码序列翻译为肽或蛋白。本文使用的术语“转录”指RNA的合成过程，通过RNA聚合酶读取DNA序列以生成与DNA序列互补的RNA链。本文使用的术语“翻译”指肽或蛋白的合成过程，通过核糖体读取mRNA序列以根据mRNA序列中含有的氨基酸密码子产生氨基酸链。本文使用的术语“调控序列”指对编码序列表达所必须的或有益的任意核苷酸序列。调控序列可以包括，但不限于，一个或多个启动子、增强子、转录终止子、多聚腺苷酸化序列和内在核糖体插入位点。本文使用的术语“启动子”指能够控制编码序列转录的多核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁旻，
申请(专利权)人：东源生物医药科技上海有限公司，
类型：
国别省市：