用于转移活性剂的非聚合造血细胞凝块制造技术

本发明专利技术包括转移物质的方法和装置。物质的转移包括向受试体服用有物质结合在其中的非聚合造血细胞凝块。该非聚合造血细胞凝块起到物质的转移载体的作用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术的领域本专利技术涉及活性剂转移，更具体地涉及在非聚合造血细胞凝块帮助下的活性剂的转移。本专利技术的背景用生物学因子和细胞来治疗软骨、骨组织、脊椎盘、以及软组织的损伤对于增强缺损的修复来说是一种新兴的方法。重组蛋白和蛋白生长因子的给药促进了组织的生长，导致了如治疗浓度的维持要求非常高的负荷剂量或者重复给药等令人失望的结果，由此在增加了成本、复杂性，以及由于非目标器官的暴露而产生的不必要的副作用的风险的同时，降低了修复的功效。一种打算用于促进重组蛋白应用于组织修复的方法，已经打算将它们结合到不会引起排斥反应的基质或者是缓慢释放的装置中，用于植入到组织缺损，由此使该蛋白质局部化于损害部位并且可能提供用于迁移细胞生殖的三维空间结构。已经被评定用于修补肌肉与骨骼组织的基质包括多种合成的或天然的聚合物。这些方法也有局限性，那就是在数量上载入到基质中的蛋白质的生产可能格外的昂贵，很少有延长和均衡的释放，而且新成形的修复组织可以受到外来的植入材料不利地影响。基因转移提供了一种方法，可能克服蛋白质输送到被损害的组织的许多局限性。(BONADIO et al.，1999；Evans和Robbins，1995；Evans et al.，1995；Kang et al.，1997；Smith et al.，2000)本专利技术的概要本专利技术提供了一种新颖的用活性物质，如，基因转移载体，细胞和可溶性蛋白质，治疗受损害组织的方法。已经发现的非聚合造血细胞凝块的用途可以用于将物质输送到受试体。非聚合造血细胞凝块行使作为转移载体的职责，用于转移物质到受试体。首先，本专利技术提供的是一种用于转移物质到受试体的方法。该方法包括向受试体服用包括物质的非聚合造血细胞凝块，以转移该物质到受试体。其次，本专利技术提供的是一种制备非聚合造血细胞凝块物质转移系统的方法。该方法包括向非聚合造血细胞的样品添加物质，并且包括物质的造血细胞形成非聚合造血细胞凝块。再次，本专利技术提供一种物质转移系统，包括有物质结合在其中的非聚合造血细胞凝块。该非聚合造血细胞凝块可包括骨髓细胞，血细胞或将会形成凝块的任何一种其它细胞。该物质可包括基因转移载体；其他细胞，如基因工程细胞或原初细胞；蛋白质，如重组或可溶性蛋白；生物活性分子或能够影响受试体的任何其他类型的物质。非聚合造血细胞凝块可能被输送到任何形式的组织中。例如，在某些具体实施方案中，该组织是骨，软组织，软骨，韧带，腱，半月板，以及无脊椎动物盘或身体的任何其它部位。在某些实施方案中，非聚合造血细胞凝块的形状和大小可以由容器来决定。非聚合造血细胞凝块可均匀分布着物质。在其他具体实施方案中，非聚合造血细胞凝块可以是遗传上修饰过的，以表达至少一个生长因子和其他促进组织修复的基因产品。在其他具体实施方案中，非聚合造血细胞凝块的量可以由将被修复的组织所的大小所决定。在还有一些其他的具体实施方案中，非聚合造血细胞凝块可以从受试体上采集得到。在另一个具体实施方案中，骨质细胞可以从髂骨嵴获得，从暴露在骨髓之下骨软骨的缺损获得，或者是从受试体的任何其他可以获得骨髓细胞的区域获得。物质可以任意地以溶液的形式存在。包含物质非聚合造血细胞凝块可以用滴定方法测定。该滴定可以使用吸液管完成。在一些具体实施方案中，该非聚合造血细胞凝块与至少是一种原初细胞和基因修饰过的细胞的悬浊液混合，形成细胞悬浊液。细胞悬浊液可包括另外的基因载体或无其他基因载体。在其他的具体实施方案中，该转移过程可以缓慢的，局部化的从非聚合造血细胞凝块中释放出该物质。该非聚合造血细胞凝块可以以允许有效地转移该物质的方式成型。物质转移系统可以导致在物质释放的区域的组织的再生。在一些具体实施方案中，非聚合造血细胞凝块通过在室温下或在被置于容器中的时候的凝结15-30分钟的造血细胞的样品中制备。非聚合造血细胞凝块这时可从该容器中获得。非聚合造血细胞凝块也可以通过在磷酸盐缓冲盐水中清洗过的造血细胞的样品中制备。任何没有结合的物质都可以该非聚合造血细胞凝块上除去。依照其他具体实施方案，非聚合造血细胞凝块可以植入到受试体中。物质可以被转移到该受试体。转移过程可以是缓慢的从非聚合造血细胞凝块局部释放物质。非聚合造血细胞凝块转移系统也可以随意地用于再生组织。造血细胞的样品可以从受试体上采集，或者从造血细胞的另外的来源获得。该受试体可以是相同的或不同的随后会被植入凝块的受试体。图形的详细描述本专利技术的不同的具体实施方案将在下面通过实例和参考附随的图形而被描述，其中如附图说明图1所示是已经用于基因治疗的基因的范例表；如图2所示是人类的血凝块和胶原质粘多糖基质负荷能力的曲线图；如图3所示是含预先感染的兔子骨髓细胞的人血凝块和在凝结24小时以后的图片；如图4所示是2毫米厚度，30毫米直径的人类的血凝块(在组织培养皿中形成的)；如图5所示是GFP阳性细胞在第1天(图5a)和第21天(图5b)的凝结状况如图6所示是包括有被Ad TGF-β感染的兔骨髓细胞的兔血凝块的TGF-β产量的曲线图；如图7所示是TGF-β相对于周围媒介的表达的曲线图，其中“BL”代表血“BM”，骨髓；如图8所示是TGF-β在分解兔骨髓和血凝块中的表达的示图；如图9所示是腺病毒在凝块中稳定性的示图；如图10所示是在第三天的活的兔子的有机体内的基因表达示图；如图11所示是使用Gomori三色试剂盒着色的兔骨髓凝块在生物体外6周后的图片；如图12所示是使用Gomori三色试剂盒着色的含Ad TGF-β的兔骨髓凝块在生物体外6周后的图片。本专利技术的详细描述本专利技术在此公开，物质可以通过向受试体服用包括有该物质的非聚合造血细胞凝块而被转移到受试体。在现有技术中用于转移物质到受试体的技术方法，有许多局限性。例如其中一些是昂贵的，复杂的，并且极少能够有所需要的持续和均衡的释放。在此所使用的“造血细胞凝块”是包括可以在不同的条件下形成凝块的任何类型的造血细胞的凝块。实例包括血凝块和骨髓凝块。骨髓或血的抽吸物可以通过最低限度的侵入手术轻易地从受试体获得。与之相比较，制造人造基质更加的耗时，昂贵，并且劳动强度大。为了形成血凝块，由缺损的大小确定的一定量的血细胞，可以通过抽血从受试体采集得到。同样，为了形成骨髓细胞凝块，适当数量的骨髓抽吸物可以从富含骨髓的来源获得，例如从骼骨嵴，从暴露在骨髓之下骨软骨的缺损获得，或者是从其他适当的位置。骨髓抽吸物和血液通常都有相同的密度并且有相似的凝结特性。骨髓或血凝块在组织修复中的使用提供了有利的条件，血凝块的形成和骨髓细胞的转移都是在骨软骨缺损，骨，腱，半月板，或者椎间盘的缺损产生之后的自愈反应的一部分。另外，骨髓凝块富含干细胞，而干细胞保留了形成身体的不同组织的能力；由此，凝块扮演着用于修复反应的天生的小环境。如果与适当的生物剂结合，该造血凝块有促进个别组织类型修复的潜能。造血细胞可以从凝块将被递送的相同的受试体，从另外一个物质将不会被递送的受试体，从一个生长在生物体外的实验室样品，或从其他任何造血细胞的来源分离出来。很明显，不同的情形和物质将会促成造血细胞凝块的不同的来源。例如，如果该造血细胞凝块是从物质将被转移进去的相同的受试体获得，那么凝块完全是天生的并且对受试体来说是自体的。因此，造血细胞较小可能干涉物质的转移，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于转移物质到受试体的方法，该方法包括：给受试体服用包含物质的非聚合造血细胞凝块以转移所述物质到该受试体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2002-6-6 60/386,8701.一种用于转移物质到受试体的方法，该方法包括给受试体服用包含物质的非聚合造血细胞凝块以转移所述物质到该受试体。2.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块包括骨髓细胞。3.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块包括血细胞。4.依照权利要求1的方法，其中，物质包括基因转移载体。5.依照权利要求1的方法，其中，物质包括其他细胞。6.依照权利要求5的方法，其中，其他细胞包括基因工程细胞。7.依照权利要求5的方法，其中，其他细胞包括原初细胞。8.依照权利要求1的方法，其中，物质包括蛋白质。9.依照权利要求1的方法，其中，物质包括重组蛋白。10.依照权利要求1的方法，其中，物质包括可溶性蛋白。11.依照权利要求1的方法，其中，物质包括生物活性分子。12.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块被转移进入骨中。13.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块被转移到软组织中。14.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块被转移到至少是软骨、韧带、腱、半月板和无脊椎动物盘之一中。15.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块的形状和尺寸通过模子来确定。16.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块上均匀分布着物质。17.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是基因修饰的以表达至少一种生长因子以及其它促进组织修复的基因产物。18.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块的体积由将被修复的组织的大小确定。19.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是从受试体采集的。20.依照权利要求2的方法，其中，骨髓细胞是从髂骨嵴获得的。21.依照权利要求2的方法，其中，骨髓细胞是从暴露在骨髓下层的骨软骨缺陷处获得。22.依照权利要求1的方法，其中，物质以溶液的形式存在。23.依照权利要求1的方法，其中，包含物质的非聚合造血细胞凝块是通过滴定法测定的。24.依照权利要求23的方法，其中，滴定是使用吸液管来完成的。25.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块与至少是原初细胞和基因修饰细胞之一的悬浮液混合后，形成细胞悬浮液。26.依照权利要求25的方法，其中，细胞悬浮液包含至少一种基因载体。27.依照权利要求25的方法，其中，细胞悬浮液中不包含其他的基因载体。28.依照权利要求1的方法，其中，转移过程是缓慢，局部的从非聚合造血细胞凝块释放物质。29.依照权利要求1的方法，其中，该非聚合造血细胞凝块以一种允许有效地转移物质的方式成形。30.依照权利要求1的方法，进一步包括在物质转移区域的再生组织。31.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块由凝结15-30分钟的造血细胞样品产生的。32.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是由可以在室温下凝结的造血细胞样品产生的。33.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是由放置在容器中凝结的造血细胞样品产生的。34.依照权利要求33的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是从该容器中获得的。35.依照权利要求1的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是由在磷酸盐缓冲液中清洗过的造血细胞样品产生的。36.依照权利要求1的方法，其中，将任何没有结合的物质从非聚合造血细胞凝块除去。37.一种制备非聚合造血细胞凝块物质转移系统的方法，该方法包括向造血细胞样品中添加物质，以及使造包含物质的血细胞样品形成非聚合造血细胞凝块。38.依照权利要求37的方法，其中，非聚合造血细胞凝块被植入受试体中。39.依照权利要求37的方法，其中，物质被转移到该受试体。40.依照权利要求39的方法，其中，该转移过程是缓慢，局部的从非聚合造血细胞凝块释放该物质。41.依照权利要求37的方法，其中，非聚合造血细胞凝块以一种允许有效地转移该物质的方式成形。42.依照权利要求37的方法，其中，非聚合造血细胞凝块转移系统被用于使组织再生。43.依照权利要求37的方法，其中，该造血细胞样品是从受试体上采集的。44.依照权利要求37的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是在容器中形成的。45.依照权利要求44的方法，进一步包括从容器中获取非聚合造血细胞凝块。46.依照权利要求37的方法，进一步包括冲洗该非聚合造血细胞凝块。47.依照权利要求46的方法，其中，任何没有结合的物质通过清洗而除去。48.依照权利要求46的方法，其中，非聚合造血细胞凝块是在磷酸盐缓冲液中被冲洗的。49.依照权利要求37的方法，其中，非聚合造血细胞凝块凝结15-30分钟。50.依照权利要求37的方法，其中，非聚合造血细胞凝块在室温下凝结。51.依照权利要求37的方法，其中，造血细胞包括骨髓细胞。52.依照权利要求37的方法，其中，造血细胞包括血细胞。53.依照权利要求37的方法，其中，物质包括基因转移载体。54.依照权利要求37的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿南弗帕施尔，格林帕尔默，史蒂文格希维兹安，克里斯托弗埃文斯，
申请(专利权)人：布赖汉姆妇女医院，
类型：发明
国别省市：US[美国]