ＨＬＡ抗体特异性检测微颗粒及试剂盒制造技术

本实用新型专利技术“ＨＬＡ抗体特异性检测微颗粒及试剂盒”，属于抗体检测领域。本实用新型专利技术的微颗粒，其特征在于载体颗粒表面包被着来源于一个供体的Ｂ淋巴细胞上的Ｉ类或ＩＩ类ＨＬＡ抗原。可同时分别检测到Ｉ类和ＩＩ类ＨＬＡ抗体特异性，既具备天然抗原的优势，又避免了两类ＨＬＡ抗原的反应结果相互遮蔽，ＨＬＡ抗原的来源为可人工培养的Ｂ淋巴细胞。本实用新型专利技术中，将盛装各种上述微颗粒的试剂管与其他试剂管装载在一个外盒中，外盒中有一个特定的支架，用于支撑这些试剂管，试剂盒微颗粒上的ＨＬＡ类型可以包括表１所示的所有ＨＬＡ抗原，使试剂盒能够一次性全面检测到待测血请的ＨＬＡ抗体特异性。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及免疫检测试剂盒，特别是一种HLA抗体特异性检测微颗粒及试剂盒。
技术介绍
在临床医学上，一些疾病会引发肾脏病变，当病人的肾脏疾病发展到只能依靠透析来维持生命时，则称其为终末期肾病(end stage renal disease，ESRD)。对于终末期肾病病人，肾移植是一种长期有效的治疗方法。人们在进行器官移植的研究中发现，与移植有关的抗原为HLA-I类和-II类抗原，如表1所示，为目前HLA配型中需要做配型检测五个HLA基因位点的HLA抗原即HLA-A，-B，-Cw，-DR，-DQ位点的HLA抗原(R.Holdsworth，C.K.Hurley，S.G.E.Marsh，M.Lau，H.J.Noreen，J.H.Kempenich，M.Setterholm and M.Maiers，The HLAdictionary 2008a summary of HLA-A，-B，-C，-DRB1/3/4/5，and-DQB1 alleles and theirassociation with serologically defined HLA-A，-B，-C，-DR，and-DQ antigens，Tissue Antigens(73)，95-170，2009))。 表1HLA抗原表(HLA-A，-B，-Cw，-DR，-DQ位点) 由于输血和妊娠等原因，在暴露于异体HLA抗原后，病人体液免疫系统可以产生抗HLA抗体。肾移植初步成功的关键取决于受体血液中是否含有HLA抗体以及HLA抗体的特异性，即如果患者血液中没有可以识别供者HLA抗原的抗体，则更可能移植成功，因此，为了保证移植肾的存活，移植前对受体进行HLA抗体特异性检测，不仅是绝对必要的，而且有助于快速地找到适合的供体肾。准确灵敏的抗体检测分析方法能够预测并杜绝肾移植超急性排斥(hyperacute rejection)的发生，同时也可以显著地降低肾移植术后早期急性排斥(early acuterejection)的发生。 HLA抗体特异性包括针对单一HLA抗原的抗体和针对交叉反应组(cross reactive group，CREG)的抗体。Takemoto等(1994)提出交叉反应组配型的概念，即由于某些HLA抗原氨基酸分子结构相近，HLA抗原分子之间具有公共抗原决定簇，可与同一种HLA抗体发生交叉反应，这些与同一种HLA抗体发生反应的HLA抗原决定簇称为交叉反应组；目前常规检测的I类HLA抗原可归纳为9个交叉反应组，如表2所示，摘自(Glenn E.Rodey，“HLA beyondtearsintroduction to human histocompatibility”，the third and fourth chapters，2nd edition，2000)。 表2交叉反应组类型及各组所包含的抗原 目前人们普遍基于抗体抗原吸附剂测定(ELISA)或流式点阵仪(Luminex)两种检测方法来检查HLA抗体特异性。目前国外主要使用Luminex xMAP微颗粒外裹人工合成的单一HLA抗原，在流式点阵仪上检测HLA抗体的特异性。使用人工合成的单一HLA抗原具有两个缺点，第一，不同的微颗粒表面人工合成抗原浓度很难保持相同，致使反应强度无法一致；第二，人工合成抗原中氨基酸三维折叠形式的细微改变，可以影响抗体对抗原的识别，会减弱抗原抗体反应的灵敏性；只有One Lambda公司的FlowPRA Specific试剂是使用天然HLA抗原包被微颗粒并在流式细胞仪上检测二抗荧光强度，但是其包括的检测底物种类即提供HLA抗原的细胞目录数目太少，难以一次性完成HLA抗体特异性检测，使用者欠灵活性。 专利技术申请“HLA抗体特异性检测方法及细胞盘与试剂盒”的说明书中公开了一种采用人淋巴细胞上的天然HLA抗原制备而成的细胞盘来检测HLA抗体特异性的方法，其特点是专利技术人通过调整细胞盘上HLA抗原频率，使细胞盘也能够检测出具有高PRA值的血清标本的HLA抗体特异性，最大限度地克服了抗原重叠现象对HLA检测的限制，集合了天然抗原的优势和流式细胞仪的高灵敏检测特性。由于细胞盘使用人的淋巴细胞进行抗体检测，交叉配型也同样使用人的淋巴细胞进行移植前的最后检测，二者的检测结果的可比性远高于其它抗体检测结果与交叉配型结果的可比性，因而经过细胞盘试剂盒检测、验证的抗体特异性结果可以直接用于虚拟交叉配型，达到准确地指导临床工作的目的。然而，细胞盘试剂盒同时也具有其在制作和使用上的局限性。由于T淋巴细胞上携带I类HLA抗原，B淋巴细胞上既带有I类也带有II类HLA抗原，当仅采用T细胞作为抗原供体时，细胞盘试剂盒只能检测I类抗体，且T细胞只能来自供体的外周血，而不适宜进行人工培养，当制作细胞盘用完一批外周血后，需要由志愿者再次捐献，因而限制这种方法的推广应用；当仅采用B淋巴细胞作为抗原供体时，I类HLA抗原与II类HLA抗原会相互遮蔽反应结果，使人们无法轻易判断阳性结果是在哪一类HLA抗原上发生的；同时采用T淋巴细胞和B淋巴细胞作为抗原供体时，当待测血清中无I类HLA抗体时或者I类HLA抗体水平很低时能够检测出II类HLA抗体特异性，但是仍然无法避免特殊情况下I类HLA抗体对II类HLA抗体的遮蔽作用，同时也会被T淋巴细胞的来源有限而限制这类检测方法的推广应用。另外，做成的细胞盘不易运输和保存，使用起来欠灵活。再有，有些病人的血清中可能含有抗自身非HLA抗原的抗体，这些抗自身非HLA抗原的抗体与正常人淋巴细胞膜上的非HLA抗原蛋白结合后，会干扰或者减弱细胞盘检测的灵敏性和特异性 PRA，指群体反应性抗体，即待测血清与随机供体群中每个供体的HLA抗原进行抗原抗体反应，呈阳性反应的供体数量与该随机供体群内个体总数的比例。
技术实现思路
针对上述抗体检测领域存在的问题，本技术提供HLA抗体特异性检测微颗粒及试剂盒，能够圆满地完成绝大部分临床病人标本的HLA抗体特异性检测工作，使用起来方便、灵活，易于运输，能够同时分别检测出I类和II类HLA抗体特异性，且供体细胞来源为人工培养的B细胞株，适于推广使用。 HLA抗体特异性检测微颗粒，其特征在于载体颗粒表面包被着来源于一个供体的B淋巴细胞上的I类或II类HLA抗原。 HLA抗体特异性检测微颗粒试剂盒，包括外盒、放置于盒内的支架和多个微颗粒管，所述支架上设置有试剂容器槽，所述微颗粒管放置在试剂容器槽中，其特征在于所述微颗粒管中盛有上述微颗粒，不同微颗粒管中的微颗粒上的HLA抗原不同。 所述试剂盒内的微颗粒上的HLA抗原为HLA-A，HLA-B，HLA-Cw，HLA-DR，HLA-DQ位点下的HLA抗原。 所述微颗粒管为96个，呈阵列式分布。 所述96个微颗粒管为96孔PCR板。 所述试剂容器槽上还放置有盛装荧光标记二抗的标记物管。 所述试剂容器槽上放置有盛装阳性对照血清的阳性对照管和盛装阴性对照血清的阴性对照管，所述阳性对照血清的PRA为100％，阴性对照血清的PRA为0％。 本技术一种HLA抗体特异性检测微颗粒，是在载体颗粒上包被了天然HLA抗原，同一个微颗粒上只有来自源于一份本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＨＬＡ抗体特异性检测微颗粒，其特征在于：载体颗粒表面包被着来源于一个供体的Ｂ淋巴细胞上的Ⅰ类或Ⅱ类ＨＬＡ抗原。

【技术特征摘要】
1.HLA抗体特异性检测微颗粒，其特征在于载体颗粒表面包被着来源于一个供体的B淋巴细胞上的I类或II类HLA抗原。2.HLA抗体特异性检测微颗粒试剂盒，包括外盒、放置于盒内的支架和多个微颗粒管，所述支架上设置有试剂容器槽，所述微颗粒管放置在试剂容器槽中，其特征在于所述微颗粒管中盛有权利要求1所述的HLA抗体特异性检测微颗粒，不同微颗粒管中的微颗粒上的HLA抗原不同。3.根据权利要求2所述的HLA抗体特异性检测微颗粒试剂盒，其特征在于所述试剂盒内的微颗粒上的HLA抗原为HLA-A，HLA-B，HLA-Cw，HLA-DR，HLA-DQ位点下的HLA抗原。...

【专利技术属性】
技术研发人员：才新，焦守恕，
申请(专利权)人：同昕生物技术北京有限公司，
类型：实用新型
国别省市：11[中国|北京]