检测探针、通用寡核苷酸芯片及核酸检测方法及其用途技术

本发明专利技术是有关于一种检测探针、通用寡核苷酸芯片及核酸检测方法及其用途。通过设计线性检测探针对Ｐ１和Ｐ２实现对核酸样本上待测碱基或突变位点的高通量检测。将检测探针与核酸样本退火杂交，之后将其均分成四个反应体系，在每个体系中分别加入Ａ，Ｔ，Ｇ，Ｃ，在ＤＮＡ聚合酶和连接酶的作用下，将相应的检测探针对Ｐ１和Ｐ２连接成为一条探针，将此探针进行纯化和扩增后，与通用寡核苷酸微阵列上的对应区域进行杂交，最后对杂交结果进行检测和分析，确定核酸样本上待测位点碱基类型或突变位点基因型。本发明专利技术可应用于对目标核酸序列进行重测序分析、对已知核酸序列中的突变位点，插入／缺失位点进行检测分析及病原微生物的分型检测领域，具有低成本、高特异性、高灵敏度的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测探针、通用寡核苷酸芯片及核酸检测方法，特别是 涉及一种用于核酸检测及序列分析的核酸检测方法及其所使用的检测探 针、通用寡核苷酸芯片。
技术介绍
基因突变是指基因组DNA分子在结构功能上发生碱基对组成或排列顺 序的改变，主要包括碱基的替换和小片段的缺失或插入，它是导致基因型疾 病的重要原因之一。而多态性是指在进化过程中已经在人群中积累起来的 DNA序列变化。基因突变及多态性分析在生物医学研究中，尤其是在基因型 疾病诊断及病理研究中有着非常重要的作用。随着人类基因组整体测序计 划的发展，探索基因突变及多态性的任务变得十分迫切。测定基因突变的方法很多，最经典的基因突变检测技术是核酸分子杂 交.传统的核酸分子杂交方法有膜上印迹杂交(如Southern印迹、Northern 印迹)和细胞原位杂交等.由于核酸分子杂交的高度特异性及检测的高度灵 敏性，它的应用对分子生物学的迅猛发展起着重要的推动作用.但由于传统 的核酸分子杂交方法整个过程繁杂，操作步骤多，特别是探针往往用放射性 物质标记，容易对人体造成伤害。因此，迫切需要新的、快速、安全的检测 分析技术.自19 8 5年P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测探针，其特征在于其主要由针对各个待测位点的检测探针对（Ｐ１，Ｐ２）组成，且所述探针对（Ｐ１，Ｐ２）分别含有一条与待测碱基位点两侧的序列互补的序列（Ｈ１，Ｈ２），并各含有一条相关的通用寡核苷酸序列（Ｈ３，Ｈ４），且在该探针对（Ｐ１，Ｐ２）上至少还含有某个特定的Ｔａｇ序列，所述的检测探针对（Ｐ１，Ｐ２）通过下述方法连接成为一条探针：将检测探针对与待测核酸样本退火杂交，通过所述与待测碱基位点两侧的序列互补的序列（Ｈ１，Ｈ２）与待测碱基位点两侧的序列互补，在探针对（Ｐ１，Ｐ２）间形成与待测碱基位点处的碱基相对应的缺口，将退火后的反应体系均分成Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ四个反应体系，在Ａ体系中加入ｄＡＴＰ，...

【技术特征摘要】
1、一种检测探针，其特征在于其主要由针对各个待测位点的检测探针对(P1，P2)组成，且所述探针对(P1，P2)分别含有一条与待测碱基位点两侧的序列互补的序列(H1，H2)，并各含有一条相关的通用寡核苷酸序列(H3，H4)，且在该探针对(P1，P2)上至少还含有某个特定的Tag序列，所述的检测探针对(P1，P2)通过下述方法连接成为一条探针将检测探针对与待测核酸样本退火杂交，通过所述与待测碱基位点两侧的序列互补的序列(H1，H2)与待测碱基位点两侧的序列互补，在探针对(P1，P2)间形成与待测碱基位点处的碱基相对应的缺口，将退火后的反应体系均分成A、T、G、C四个反应体系，在A体系中加入dATP，在T体系中加入dTTP，在G体系中加入dGTP，在C体系中加入dCTP，与待测碱基位点处的碱基互补的碱基在DNA聚合酶和连接酶的作用下就会填充上述缺口，将检测探针对连接成为一条探针。2、 根据权利要求1述的检测探针，其特征在于其中所述的检测探针还 包括另一条探针(P2，)，且该探针含有与待测碱基位点一侧的序列互补的 序列(H1或H2)， 一条相关的通用寡核苷S吏序列(H3或H4)，某个特定的 Tag序列及与待测样本插入型位点的插入序列互补的序列(H5 )。3、 根据权利要求1或2所述的检测探针，其特征在于在其中所述的检 测探针对中探针的不发生连接反应的一端至少还含有生物素标记分子，且 该生物素标记分子与探针的核苷酸序列之间还包含有 一段连接臂。4、 根据权利要求3所述的检测探针，其特征在于其中所述的连接臂为 碳连接臂，或非碳类型的连接臂。5、 根据权利要求4所述的检测探针，其特征在于其中所述的非碳类型 的连接臂为聚乙二醇、polyA、 polyT。6、 根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的检测探针，其特征在于其应用于对目标核酸序列进行重测序分析、对已知核酸序列中的突变位 点和插入/缺失位点进行检测分析及病原微生物的分型检测领域。7、 一种通用寡核苷酸芯片，其特征在于其包含分成A， T， G, C四个 相同的区域，每个区域对应的各个位点上分别点制与对应的检测探针上的 T a g序列相同的寡核苷酸序列。8、 根据权利要求7所述的通用寡核苷酸芯片，其特征在于其应用于对 目标核酸序列进行重测序分析、对已知核酸序列中的突变位点和插入/缺失 位点进行检测分析及病原微生物的分型检测领域。9、 一种核S臾;险测方法，其特征在于其包括以下步骤 ①待测核酸样本的制备；② 检测探针的制备，所述探针主要是由针对各个待测位点的检测探针对(Pl， P2)组成，且所述探针对(Pl， P2)分别含有与待测碱基位点两 侧的序列互补的序列(H1， H2),并各含有一条相关的通用寡核苦酸序列(H3， H4 ),且在该探针对上至少还含有某个特定的Tag序列；③ 将各探针对与核酸样本退火杂交，在各探针对间形成与待测碱基位 点处的;咸基相对应的缺口 ；④ 将退火后的反应体系均分成A、 T、 G、 C四个反应体系，在A体系 中加入dATP，在T体系中加入dTTP，在G体系中加入dGTP，在C体系中加 入dCTP，在DM聚合酶和连接酶的作用下，与待测碱基位点处的碱基互补 的碱基就会填充上述缺口 ，将各检测探针对连接成为一条探针； ...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐一通，陈超，崔亚丽，朱娟莉，余龙林，高怡文，李铮，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]