一种用于固定核酸探针的点样液及其配制方法和核酸探针固定方法技术

本发明专利技术公开了一种用于固定核酸探针的点样液及其配制方法和核酸探针固定方法，该点样液含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC）和日落黄色素。使用本发明专利技术的点样液无需提前用盐酸、EDC处理尼龙膜，而是将该点样液与核酸探针溶液混合直接点到未经处理的尼龙膜上即完成核酸探针的固定。因此，使用本发明专利技术的点样液使得核酸探针的固定省时、低成本、易操作、可满足规模化生产要求。

【技术实现步骤摘要】
一种用于固定核酸探针的点样液及其配制方法和核酸探针固定方法
本专利技术涉及核酸芯片
，尤其涉及一种用于固定核酸探针的点样液及其配制方法和核酸探针固定方法。
技术介绍
制作基于尼龙膜固相载体的核酸芯片过程中，一个关键工序即是将核酸探针固定到尼龙膜上。目前采用的传统工艺方法是先使用盐酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)活化尼龙膜(ZhangYong，CoyneMazieY，WillStephenG，etal(1991)，Single-basemutationalanalysisofcancerandgeneticdiseasesusingmembraneboundmodifiedoligonucleotides[J].NuclAcidsRes，19(14):3929-3933.；ChehabFFandWallJ(1992)，Detectionofmultiplecysticfibrosismutationsbyreversedotblothybridization:atechnologyforcarrierscreening[J].HumanGenetics，89(2):163-168)，之后再将氨基标记的核酸探针通过点样设备点到活化过的尼龙膜上进行化学固定反应。该工艺方法缺点有：步骤繁琐、耗费时间长、材料成本高、操作不方便，难以满足大规模生产要求等。
技术实现思路
本专利技术提供一种用于固定核酸探针的点样液，使用该点样液无需提前用盐酸、EDC处理尼龙膜，而是将该点样液与核酸探针溶液混合直接点到未经处理的尼龙膜上即完成核酸探针的固定。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供一种用于固定核酸探针的点样液，该点样液含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素。作为本专利技术的优选方案，上述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是4～20％(质量/体积)和0.1～1％(质量/体积)。作为本专利技术的进一步优选方案，上述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是6～16％(质量/体积)和0.2～0.8％(质量/体积)。作为本专利技术的更进一步优选方案，上述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是8～12％(质量/体积)和0.4～0.6％(质量/体积)。作为本专利技术的优选方案，上述点样液以磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供一种如第一方面的点样液的配制方法，包括：将配方量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶于日落黄色素溶液中，形成上述点样液。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供一种使用如第一方面的点样液固定核酸探针的方法，包括：将上述点样液与核酸探针工作液混合，然后将混合液点到未经处理的尼龙膜上。作为本专利技术的优选方案，上述混合液中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的浓度为2～10％(质量/体积)。作为本专利技术的优选方案，上述点样液与核酸探针工作液按等体积混合。本专利技术的有益效果是：使用本专利技术的点样液无需提前用盐酸、EDC处理尼龙膜，而是将该点样液与核酸探针溶液混合直接点到未经处理的尼龙膜上即完成核酸探针的固定。因此，使用本专利技术的点样液使得核酸探针的固定省时、低成本、易操作、可满足规模化生产要求。更重要的是，使用本专利技术的点样液完全能够取得与现有提前用盐酸、EDC处理尼龙膜再进行点样相同的效果。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。本专利技术的用于固定核酸探针的点样液，含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和日落黄色素。需要说明的是，目前还没有将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素混合形成点样液，一步法实现核酸探针的点样和固定的方法。而本专利技术的点样液能够实现这样的目的，取得省时、低成本、易操作、可满足规模化生产要求的效果。由于本专利技术的点样液需要与核酸探针工作液混合后再进行点样，而点样液与核酸探针工作液的混合比例允许在较宽的范围内变化，例如按照体积比1:10～10:1的范围。因此，点样液中EDC和日落黄色素的含量可以不做具体限定，根据具体情况，在点样液中EDC和日落黄色素的含量较高的情况下，可以相应地与较大体积比的核酸探针工作液混合；在点样液中EDC和日落黄色素的含量较低的情况下，可以相应地与较小体积比的核酸探针工作液混合。虽然，点样液中EDC和日落黄色素的含量可以不做具体限定，但是从实现更好的固定效果的角度考虑，优选地，点样液中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是4～20％(质量/体积)和0.1～1％(质量/体积)；更优选地，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是4～20％(质量/体积)和0.1～1％(质量/体积)；进一步更优选地，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是6～16％(质量/体积)和0.2～0.8％(质量/体积)；最优选地，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是8～12％(质量/体积)和0.4～0.6％(质量/体积)。需要说明的是，EDC和日落黄色素在点样液中的含量按照质量/体积计，其中质量/体积的单位按照本领域通常的理解，比如克/毫升(g/mL)，例如4～20％(质量/体积)可以表示在100mL点样液中含有4～20gEDC；类似地，0.1～1％(质量/体积)可以表示在100mL点样液中含有0.1～1g日落黄色素。当然，上述对单位的说明仅是示例性的，并不排除采用其它单位的表示方式。作为本专利技术的优选方案，上述点样液以酸盐缓冲液(PBS)为溶剂。本专利技术还提供了上述点样液的配制方法，包括：将配方量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶于日落黄色素溶液中，形成上述点样液。上述“配方量”是指，配制以后点样液中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的终浓度含量。例如，点样液中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是4～20％(质量/体积)和0.1～1％(质量/体积)；更优选地，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是4～20％(质量/体积)和0.1～1％(质量/体积)；进一步更优选地，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是6～16％(质量/体积)和0.2～0.8％(质量/体积)；最优选地，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是8～12％(质量/体积)和0.4～0.6％(质量/体积)。本专利技术还提供了使用上述点样液固定核酸探针的方法，包括：将上述点样液与核酸探针工作液混合，然后将混合液点到未经处理的尼龙膜上。本专利技术的点样液以及其使用方法的优势正体现在，其不需要提前用盐酸、EDC处理尼龙膜，而是将该点样液与核酸探针溶液混合直接点到未经处理的尼龙膜上即完成核酸探针的固定。如上所述，由于本专利技术的点样液需要与核酸探针工作液混合后再进行点样，而点样液与核酸探针工作液的混合比例允许在较宽的范围内变化，例如按照体积比1:10～10:1的范围，优选1:5～5:1的范围，更优选1:2～2:1的范围。因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于固定核酸探针的点样液，其特征在于，所述点样液含有1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和日落黄色素。

【技术特征摘要】
1.一种用于固定核酸探针的点样液，其特征在于，所述点样液含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素。2.根据权利要求1所述的点样液，其特征在于，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是4~20%（质量/体积）和0.1~1%（质量/体积）。3.根据权利要求2所述的点样液，其特征在于，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是6~16%（质量/体积）和0.2~0.8%（质量/体积）。4.根据权利要求2所述的点样液，其特征在于，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和日落黄色素的含量分别是8~12%（质量/体积）和0.4~0.6%（质...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵雷，李勐，黄明辉，
申请(专利权)人：港龙生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44