本发明专利技术提供在计算机上和在体外设计和选择具有高亲和力和特异性的针对人抗原的抗体的方法。在一些具体实施方案中，提供设计和选择具有高亲和力和特异性的针对血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的人源化或完全人抗体的方法。在本发明专利技术的另一个方面，提供针对ＶＥＧＦ的单克隆抗体。具体而言，提供人源化或人抗－ＶＥＧＦ单克隆抗体，其具有以高亲和力结合人ＶＥＧＦ，体外抑制ＶＥＧＦ－诱导的内皮细胞的增殖和体内抑制ＶＥＧＦ－诱导的血管发生的能力。可以将这些抗体及其衍生物用在广泛应用中，诸如诊断、预防和治疗疾病诸如癌症、ＡＭＤ、糖尿病性视网膜病和其他来自病理性血管发生的疾病。
【技术实现步骤摘要】
针对血管内皮生长因子的人源化抗体本申请是国际申请号为"PCT/US2004/039501"，国际申请日为2004年 11月22日，中国申请号为"200480040951.6"，进入中国国家阶段日期为 2006年7月25日"，专利技术名称为"针对血管内皮生长因子的人源化抗体" 的分案申请。 对相关申请的交叉引用本申请是提交于2003年5月20日，题为"Generation and Selection of Protein Library in Silico"的美国申请号10/443,134的部分继续申请，所述美 国申请号10/443,134是提交于2002年5月20日的，题为"Structure-Based Selection And Affinity Maturation of Antibody Library"美国申请号 10/153,159的部分继续申请，也是提交于2002年5月20日的题为 "Generation Affinity Maturation of Antibody Library in Silico"的申i青号 10/153,176的部分继续申请，上述两者是在2002年4月17日提交的题为 "Structure-based construction of human antibody library"的美国专禾U申请系 列号10/125,687的部分继续申请，所述美国专利申请系列号10/125,687要 求在2001年4月17日提交的题为"Structure-based construction of human antibody library"的美国临时申请序列号60/284,407的利益。将这些申请并 入本文作为参考。
技术介绍
本专利技术提供针对人抗原的抗体和产生针对这些靶点的高亲和力抗体 的方法。更具体地，本专利技术提供针对血管内皮生长因子(VEGF)的人源化或 人抗体和产生这样的抗-VEGF的抗体的方法。此外，本专利技术提供使用这些 抗体及其衍生物来体外抑制血管发生的组合物，试剂盒和方法，所述组合 物，试剂盒和方法用于诊断或治疗与异常血管发生相关的疾病诸如癌症、 类风湿性关节炎、与局部缺血-再灌注相关的脑水肿和损伤、皮质局部缺血、 卵巢增生和血管过多、子宫内膜异位、牛皮癣、糖尿病性视网膜病 (retinopaphy)，和其它的眼科血管源性疾病。血管发生涉及许多生理和病理过程。血管发生由多个步骤组成，其最 终导致内皮细胞的增生和分化，并且形成管和腔(血管发生)。促进血管发生的因子包括VEGF、 aFGF、 bFGF、 TGF-a、 TGF-卩、HGF、 TNF-a、血 管生成素、IL-8等，而抑制血管发生的因子包括血小板反应蛋白(Good等.W加/. ^c^/. 5W. t/SA 87 :6624-6628 (19%))，促乳素的N末端片段 (Clapp等.五wfocn'"o/ogv， 133: 1292-1299(1993))，纤维蛋白溶酶原的三环 5结构域(Cao等.，J. Biol. Chem., 271: 29461-29467(1996),制管张素 (O'Reilly等.CW/, 79: 315-328 (1994))和内皮抑制素(O'Reilly等.Ce//, 88'. 277-285 (1996))。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是与其在血管内皮细胞上的受体特异 性作用从而促进它们的血管发生的生长因子。已知血管发生在从在先存在 的血管和/或循环内皮干细胞中发展新的脉管系统中具有重要作用 (Asahara等.，Science, 275 (5302): 964-967， 1997; Springer等.，Mol. Cell, 2(5): 549-558， 1998; Folkman和Shing, J. Biol. Chem.， 267:10931- 10934， 1992)。血管发生还在许多生理过程中具有重要作用，所述生理过程诸如胚 胎发生、伤口愈合和月经。更重要的是，血管发生还涉及病理状态，所述 病理状态诸如肿瘤形成、转移、糖尿病性视网膜病等。已知实体肿瘤的生 长需要肿瘤血管形成从而供应氧和养分并且肿瘤细胞的转移通过来自肿 瘤血管化的血管而发生。认为VEGF是在肿瘤的这种血管化中的关键生血 管因子。因此，预期肿瘤的生长和转移可以通过某些物质中和VEGF的血 管化活性而得到抑制。最近的研究(Burrows和Thorpe, Pharmacol. Ther.， 64:155-174, 1994; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 8996-卯00， 1994)已经使用 了这样策略来靶向实体肿瘤的脉管系统。耙向肿瘤的血管，而不是肿瘤细 胞本身，具有一些优势，因为其不大可能导致抗性肿瘤细胞的发展，并且 被靶向的细胞易于到达。而且，血管的破坏导致抗肿瘤效果的扩大，因为 许多肿瘤细胞依赖于单一的血管来供应它们的氧和养分。在几乎一半的糖尿病患者中，糖尿病性视网膜病的发生是由糖尿病的 其中一个并发症引起的。认为在糖尿病性视网膜病中的微细管的形成是由 氧缺乏促进的。这些微细管将迟早破裂出血从而形成瘢疤组织，导致视网 膜脱离。年龄相关的斑(macular)退化是另一种眼病，其已经被证实涉及视 网膜的病理性血管化。因此，预期血管化的抑制可以预防视网膜病的发展。 基于使用猴的实验，Miller等报道VEGF与增生性(vegetative)视网膜病的发展紧密相关(Miller等.Am. J. Pathol. 145,574-584(1994))。为此，考虑将 中和VEGF的血管化活性的物质用于预防或治疗糖尿病性视网膜病和 AMD (Lopez等.Invest.Ophtalmo. Vis. Sci. 37: 855-868 (1996))。VEGF作为病理状态中的血管发生的主要刺激物的认识已经导致阻断 VEGF活性的各种尝试。己经提议将抑制性抗-VEGF受体抗体，可溶性受 体构建体，反义策略，针对VEGF的RNA适体和低分子量的VEGF受体 酪氨酸激酶(RTK)抑制剂用在VEGF信号传导的干扰中(Siemdster等.， Cancer Metastasis Rev" 17(2): 241-248., 1998)。事实上，已经显示针对VEGF 的单克隆抗体在小鼠中抑制人肿瘤异种移植物生长和腹水形成(Kim等.， Growth Factors 7:53(1992); Nature 362:841-844(1993) ; Asano等., Hybridoma， 17:185-90， (1998); Mesiano等.，Am. J. Pathol" 153(4): 1249-1256， (1998); Luo等.,Cancer Res.; 58(12): 2594-2600, (1998) ; Cancer Res" 58 (12): 2652-2660, (1998); Borgstrom等.Cancer Res. 56: 4032-4039(1996) ;Borgstrom等.，Prostate, 35(1) : 1-10, (1998))。而且，己经将使用抗 -生血本文档来自技高网...
【技术保护点】
特异性结合人ＶＥＧＦ的单克隆抗体的轻链可变结构域，其包含ＣＤＲ１区，ＣＤＲ２区和ＣＤＲ３区，其中所述ＣＤＲ１区为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２所示的氨基酸序列，所述ＣＤＲ２区为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０１所示的氨基酸序列，和所述ＣＤＲ３区 为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２２所示氨基酸序列。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：钟苹羽，罗培志，凯文C王，马克赫斯荷，李艳，
申请(专利权)人：埃博马可西斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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