本发明专利技术公开了一种与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子及其应用。与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子是通过连接肽将胶原结合结构域融合到血管内皮生长因子的氨基或羧基末端得到的重组蛋白；所述胶原结合结构域的氨基酸序列为序列表中序列２自氨基末端第１７８位－第１８４位。本发明专利技术还公开与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子的编码基因。本发明专利技术的与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子有利于解决血管内皮生长因子在体内扩散造成的低活性和高风险，为心肌损伤的修复提供了新方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子及其应用。
技术介绍
血管内皮生长因子(VEGF)是一类富含半胱氨酸的糖蛋白，包括VEGF-A、 VEGF-B、 VEGF-C、 VEGF-D和VEGF-E，它们具有特定的信号肽可以分泌到细胞外 发挥作用。其中VEGF,65的应用最为广泛，它能促进血管内皮细胞增值、分化、抑制 内皮细胞凋亡和促进血管平滑肌细胞的迁移等功能(Ferrara N， Houck K, Jakeman L， Leung DW. Molecular and biological properties of the vascular endothelial growth factor family of proteins. j5Wocr TfeK. 1992 ;13(1) : 18-32. Yancopoulos GD， Davis S， Gale NW， Rudge JS， Wiegand SJ， Holash J. Vascular-specific growth factors and blood vessel formation. vVstwre.2000:407(6801) :242-248.)。在治疗心血管疾病中，VEGF有重要的功能。在心肌 缺血疾病中，VEGF能通过促进血管形成来改进心肌功能。目前VEGF治疗途径主要包括(l)直接将VEGF蛋白注射到心肌内(Pearlman瓜 Hibberd MG， Chuang ML, Hamda K， Lopez XJ， Gladstone SR， Friedman M， Sellke FW, Simons M. Magnetic resonance mapping demonstrates benefits of VEGF-induced myocardial angiogenesis. TKat 1995; 1 (10) : 1085-1089.Harada K， Friedman M， Lopez JJ， Wang SY， Li J, Prasad PV， Pearlman瓜Edelman ER， Sellke FW， Simons M. Vascular endothelial growth factor administration in chronic myocardial ischemia.血/尸力戸'o丄1996; 270 (5 Pt 2) :H1791-1802.); (2)将VEGF的基因转入宿主心肌缺血部位(Ferrarini M， Arsic N， Recchia FA， Zentilin L， ZacchignaS, Xu X, Linke A， Giacca M， Hintze TH. Adeno-associated virus-mediated transduction of VEGF165 improves cardiac tissue viability and functional recovery after permanent coronary occlusion in conscious dogs. 6Yrc紐2006:98(7) :954-961. Vale PR， Loso油DW， Milliken CE， Maysky M， Esakof DD， Symes JF, Isner JM. Left ventricular electromechanical mapping to assess efficacy of phVEGF(165) gene transfer for therapeutic angiogenesisin chronic myocardial ischemia. CYrcWstJ'肌 2000; 102 (9) :965-974.)。但 蛋白注射后由于体液的冲刷，因子很快扩散而使得局部浓度很难达到治疗要求，如 果大量注射则会对生物体产生负作用，而基因治疗则有安全性隐患。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子及其应用。 本专利技术所提供的与胶原蛋白特异结合的血管内皮生长因子，命名为VEGF-CBD， 是通过连接肽将胶原结合结构域融合到血管内皮生长因子的氨基或羧基末端得到 的重组蛋白；所述胶原结合结构域的氨基酸序列为序列表中序列2自氨基末端第 178位-第184位。其中，VEGF-CBD具体可为如下a)或b)或c)或d)的蛋白a) 其氨基酸序列为序列表中序列2自氨基末端第1位-第184位；b) 其氨基酸序列为序列表中序列2自氨基末端第1位-第186位；c) 其氨基酸序列为序列表中序列2;d) 将a)限定的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且 能与胶原特异结合的由a)衍生的多肽。为了使本专利技术的a)的蛋白便于纯化，可在由序列表中序列2自氨基末端第 l位-第186位所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接 上如表l所示的标签。表l.标签的序列<table>table see original document page 4</column></row><table>上述c)中就提供了在b)的蛋白的羧基末端连接上Poly-His标签的蛋白。 所述c)或d)中的VEGF-CBD可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生 物表达得到。上述b)或c)中的VEGF-CBD可通过将序列表中序列1自5'末端第 1-558位所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，禾口/或进行一个或 几个碱基对的错义突变，禾IV或在其5'端和/或3'端连上表1所示的标签的编码序列得到。序列表中序列2由192个氨基酸残基组成。其中，序列表中序列2自N末端第 1-166位为VEGF的氨基酸序列；序列表中序列2自N末端第178-184位为胶原结合 结构域(CBD)的氨基酸序列；序列表中序列2自N末端第187-192位为组氨酸标 签。所述VEGF-CBD的编码基因也属于本专利技术的保护范围。其中，所述VEGF-CBD的编码基因具体可为①至⑤中任一所述的基因；① 其核苷酸序列是序列表中序列1自5'末端第卜552位；② 其核苷酸序列是序列表中序列1自5'末端第1-558位③ 其核苷酸序列是序列表中序列1;④ 在严格条件下与①限定的DNA片段杂交且编码能与胶原特异结合的血管内皮 生长因子的DNA分子；⑤ 与①的基因具有90X以上的同源性，且编码能与胶原特异结合的血管内皮生 长因子的DNA分子。所述步骤⑤中的基因，与 的基因最好有95%以上的同源性。 上述严格条件可为在O. 1XSSPE (或0. 1XSSC)， 0.1% SDS的溶液中，在65C 下杂交并洗膜。其中，序列表中序列1由579个核苷酸组成。序列表中序列1自5'末端第1-498 位为VEGF的编码序列，编码序列表中序列2自N末端第1-166位所示的多肽；序列表 中序列1自5'末端第532-552位为胶原结合结构域(CBD)的编码序列，编码序列表 中序列2自N末端第178-184位所示的多肽；序列表中序列1自5'末端第本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组蛋白，是通过连接肽将胶原结合结构域融合到血管内皮生长因子的氨基或羧基末端得到的重组蛋白；所述胶原结合结构域的氨基酸序列为序列表中序列２自氨基末端第１７８位－第１８４位。
【技术特征摘要】
1、一种重组蛋白，是通过连接肽将胶原结合结构域融合到血管内皮生长因子的氨基或羧基末端得到的重组蛋白；所述胶原结合结构域的氨基酸序列为序列表中序列2自氨基末端第178位-第184位。2、 根据权利要求l所述的重组蛋白，其特征在于所述重组蛋白为如下a)或b) 或c)或d)的蛋白a) 其氨基酸序列为序列表中序列2自氨基末端第1位-第184位；b) 其氨基酸序列为序列表中序列2自氨基末端第1位-第186位；c) 其氨基酸序列为序列表中序列2;d) 将a)限定的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且能 与胶原特异结合的由a)衍生的多肽。3、 权利要求1或2所述重组蛋白的编码基因。4、 根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于所述编码基因为如下①或② 或...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴建武，张晶，赵燕南，陈冰，
申请(专利权)人：烟台正海生物技术有限公司，中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]
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