识别新的膜蛋白多肽的单克隆抗体制造技术

编码具有前Ｂ细胞生长支持能力的新的膜蛋白多肽的基因和由１８０个氨基酸残基组成的具有前Ｂ细胞生长支持能力的新的膜蛋白多肽。通过用含该基因的载体转化宿主细胞制备转化子并培养该转化子生产该新的膜蛋白多肽的方法、及识别该新的膜蛋白多肽的单克隆抗体。上述基因编码具有前Ｂ细胞生长支持能力的膜蛋白。均一和纯化的新的膜蛋白多肽可大量生产，而且识别该多肽的单克隆抗体也能生产，因此使风湿性关节炎的鉴定及其临床诊断试剂的制备成为可能。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种基因及由该基因编码的新的膜蛋白，更详细地是有关编码新的具有前B细胞生长支持能力的膜蛋白多肽的基因、含有该基因的载体及由该载体转化的转化子以及利用该基因制造新的膜蛋白多肽的方法。本专利技术还涉及识别具有前B细胞生长支持能力的新的膜蛋白多肽的单克隆抗体。本专利技术的基因可编码增强慢性风湿性关节炎(RA)患者的滑膜细胞表面的前B细胞生长支持能力的新的膜蛋白。将本专利技术的基因插入适当的载体，通过转化常用的宿主细胞，可以大量制造具有前B细胞生长支持能力的均一的新的膜蛋白多肽。因此利用本专利技术可以鉴别慢性风湿性关节炎，还可以制备用于临床诊断的试剂。慢性风湿性关节炎病人的滑膜或滑膜液中的炎症细胞来自于末梢血液，对于这些细胞向滑膜的迁移还没有完全阐明，但认为它与给予细胞的化学信号和细胞膜上的蛋白(粘附分子)之间的复杂相互作用有关。关于膜蛋白在关节炎中的作用已经进行了各种研究。例如，已知在慢性风湿性关节炎病人(RA)的滑膜血管和滑膜内层上表达一细胞间的粘附分子-1(在下文称之为LCAM-1)，此粘附分子是T细胞表面分子LFA-1的配体并与血管壁中细胞的粘附和迁移有关。〔Hale et al.；Arthritis Rheum.,32:22(1989),and Haynes et al.,Springer Sewn.Immunopathol.,11:163(1989)〕。同样地有人提出在慢性风湿性关节炎(RA)和变形性关节炎的类成纤维滑液细胞和滑膜上表达有血管细胞粘附分子-1(在下文称为VCAM-1)，此粘附分子是T淋巴细胞(尤其是记忆细胞)和单核细胞上表达的integrin VLA-4的配体，〔Morales-Ducret et al.,J.Immunol.,149:1424(1992)〕，并且进一步在滑膜的内皮小静脉上表达有一被称为VAP-1的膜蛋白，该蛋白可能做为白细胞的专一性识别结构。〔Salmi et al.；Science,257,1407(1992)〕。本专利技术者为调查骨髓微环境在引起B细胞机能异常的疾病中的作用，进行了广泛的研究，发现与正常人相比，来自于慢性风湿性关节炎(RA)和多发性骨髓瘤病人(MM)的骨髓基质细胞的前B细胞生长支持能力得以提高，并且前B细胞和基质细胞的直接接触对这种支持能力起一本质的作用。本专利技术者已建立了含有通过将病人的基质细胞，胞系来促进前B细胞生长的因子的基质细胞系(KASV5-5,MMSV3-3)，并发现这些基质细胞系的前B细胞生长支持活性可能是与不同于已知的干细胞因子(SCF),1CAM,CD44,VCAM-1,LFA-1α,LFA-1B,NCAM和ELAM-1的其它未知粘附分子有关。〔J.Immunol.,149:4088(1992)〕。而且，有人提出来自慢性风湿性关节炎(RA)病人的滑液细胞建立的滑液细胞系Syn SV6-14，与来自慢性风湿性关节炎病人骨髓的基质细胞系RASV5-5，具有相似的前B细胞生长支持能力，本专利技术者已获得了与这些细胞系反应，但与来自人骨髓的不具有前B细胞生长支持能力的基质细胞系NFSV1-1不反应的新型单克隆抗体，并同时成功地克隆了编码抗原膜蛋白(BST-1)的基因。(Japanese Patent Application NO.5-141178/1993)。本专利技术者在制备各种可识别在慢性风湿性关节炎(RA)患者的滑膜细胞中表达的而在正常细胞中未表达的膜蛋白的单克隆抗体的过程中，得到了可识别具有与Syn SV6-14反应，不与正常骨髓间质细胞株NFS V1-1反应的性质的、与上述的Bst-1不同的膜蛋白的新的鼠单克隆抗体RS38。然后，使用该RS38抗体筛选由慢性风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞株制备的cDNA文库，成功地分离得到编码和所述RS38反应的新的膜蛋白的克隆，从而完成了本专利技术。即，本专利技术的目的是提供具有前B细胞生长支持能力的新型膜蛋白多肽、编码该多肽的基因、含有该基因的载体、由该载体转化的转化子及通过利用该基因产生新的膜蛋白的方法。进一步，本专利技术的目的之一是提供识别具有前B细胞生长支持能力的新的膜蛋白的单克隆抗体。为实现上述目的，本专利技术包括下面(1)-(7)。(1)含有序列表的No.1序列所示的氨基酸序列或部分氨基酸序列的在风湿性关节炎病人的滑膜上表达的新的膜蛋白多肽。(2)编码含序列表的No.1序列所示的氨基酸序列或部分氨基酸序列多肽的DNA。(3)上面(2)中记载的DNA，特征为含有同序列表的No.2序列显示的碱基序列或来自所述碱基序列杂交的碱基序列，所述碱基序列至少有一取代的，移去或部分添加的氨基酸。(4)含上面(2)或(3)中记载的DNA的重组载体。(5)原核或真核宿主细胞，特征为由上述(4)中记载的重组载体转化得到。(6)产生含序列表的No.1序列显示的氨基酸序列或部分氨基酸序列多肽的方法，特征是培养上述(5)记载的宿主细胞。(7)识别含序列表的No.1序列显示的氨基酸序列或部分氨基酸序列多肽的单克隆抗体。下面将详细描述本专利技术。本专利技术的单克隆抗体基本上接下面方法制备。将来自风湿性关节炎(RA)病人且具有前B细胞生长支持能力的滑液细胞作抗原，按照普通免疫方法免疫，根据普通的细胞融合方法细胞融合被免疫的细胞并按照常规克隆方法克隆融合细胞来制备本专利技术的抗体。更加明确地，作为产生本专利技术单克隆抗体的优选方法可由如下方法加以说明，该方法包括利用来自风湿性关节炎病人(RA)滑膜并已建立培养细胞的细胞系Syn SV6-14作为上面提及的抗原，融合由该抗原免疲的哺乳动物的浆细胞(免疫细胞)和哺乳动物如鼠的骨髓瘤细胞，克隆获得的融合细胞(杂交瘤细胞)，从中选择产生识别Syn SV6-14的本专利技术的抗体，培养细胞以回收目的抗体。在产生上述单克隆抗体的方法中，作为抗原免疫的哺乳动物并没有特别地限制；优选同进行细胞融合时使用的骨髓瘤细胞相容的动物，一般使用小鼠，大鼠和仓鼠。按照一般方法进行免疫，例如，将得自上述慢性风湿性关节炎病人滑膜的细胞系Syn SV6-14的培养细胞注射引入到哺乳动物的腹膜腔。更加明确地，优选以PBS或生理盐水将其稀释或悬浮至一合适的量，并每隔4-21天分几次将其注射到动物体内，如果必需的话可以和普通的佐剂一起注射。并且在上述注射中可以使用常规载体(Schlepper)。作为免疫细胞优选使用上述细胞系最终注射后获得的脾细胞。当哺乳动物的骨髓瘤细胞作为另一亲本细胞和上述免疫细胞融合时，优选地使用已知的各种细胞系包括P3(p3x63Ag8.653)I J.Immunol.,123:1548(1978)〕,P3-U1 Icurrent Topics in Micro-biology and Immunolosy,81:1-7(1978)〕,NS-1〔Eur..J.Immunol.,6:511-519(1976)〕,Mpc-11〔cell,8:405-415(1976)〕,SP2/0〔Natune,276:269-270(1978)〕,FO〔J.Immunol.Meth.,35:1-21(1980)〕,S194〔J.Exp.Med.,148:313-323(1978)〕和R210〔Nature,277:131-133本文档来自技高网...

【技术保护点】
单克隆抗体，可识别具有序列表的序列号Ｎｏ．１中所示的氨基酸序列或其中的一部分的多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：平野俊夫，改正恒康，
申请(专利权)人：平野俊夫，
类型：发明
国别省市：JP[日本]