乳腺癌细胞C35基因siRNA表达载体的构建以及抗肿瘤治疗应用制造技术

技术编号:3765008 阅读:268 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术属基因工程技术领域,具体地说是乳腺癌细胞C35基因siRNA序列的设计,表达载体的构建及其在抗肿瘤治疗中的应用。本发明专利技术根据siRNA的设计原则,分别选择C35蛋白编码区259nt-278nt,编码区282nt-300nt的核苷酸序列,设计相应的siRNA,用BLAST软件进行同源分析证实为C35高度保守序列后,化学合成单链寡核苷酸,体外经退火形成双链DNA,与真核表达载体pTZU6+1连接,酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了两种靶向C35基因序列的siRNA表达载体。上述表达载体通过阳离子脂质体介导转染乳腺癌细胞T47D后,采用RT-PCR和Western?Blot实验以及MTT、TUNEL利Annexin?V/PI流式细胞分析法实验均证实C35siRNA具有较强抑制乳腺癌细胞生长的作用,可以在制备抗肿瘤的药物中应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种构建两种靶向C35基因序列的siRNA表达载体,其特征在于:在构建针对C35基因的siRNA表达载体时,根据siRNA的设计原则,分别选择C35蛋白编码区259nt-278nt,编码区282nt-300nt的核苷酸序列,设计相应的siRNA;用BLAST软件进行同源分析证实为C35高度保守序列后,化学合成单链寡核苷酸;体外经退火形成双链DNA,与真核表达载体pTZU6+1连接,酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了两种靶向C35基因序列的siRNA表达载体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:闫歌尹昆刘俏俏朱嵩谭效忠赵桂华
申请(专利权)人:山东省寄生虫病防治研究院
类型:发明
国别省市:37

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