高表达量的溶血素基因及其分泌表达载体和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高表达量的溶血素基因及其分泌表达载体和应用，属于遗传工程领域。本发明专利技术是以来自Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＮＺ１３１菌株ｓｌｏ基因序列为模板（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＮＺ１３１，ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｇｅｎｏｍｅ：ＮＣＢＩ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＮＣ＿０１１３７５．１），利用大肠杆菌优化密码子替换其５６个大肠杆菌稀有密码子，设计并合成了编码化脓链球菌溶血素的新基因ｎｓｌｏ，构建了含该ｎｓｌｏ基因的分泌型表达载体和含该分泌型表达质粒的工程菌。表达结果表明，蛋白表达产量可以达到３ｍｇ／ｍＬ以上，酶活可达到２．４×１０６ＨＵ／ｍＬ。本发明专利技术实现了ｎｓｌｏ的高效表达，可广泛引用于与医学研究和疾病诊断，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种人工改造合成的高表达量的化脓链球菌溶血素基因nslo，属于医学微生物基因工程领域。本专利技术还涉及一种依上述基因构建的分泌型表达载体及其应用，属于基因工程领域。 技术背景溶血素主要来自链球菌、金黄色葡萄球菌和芽孢杆菌等。来自化脓链球菌(Streptococcuspyogenes)的溶血素(Streptolysin O，SLO)是胆固醇依赖性的，能够与人及其它动物的细胞膜上的胆固醇相结合，结合到细胞膜上的SLO蛋白分子会形成环状寡聚体，形成大的孔道，导致细胞膜溶解，而且介导一些大分子(如NADase)通过细胞膜，所以SLO是链球菌感染宿主过程中的重要毒素蛋白。 SLO在医学研究和应用中具有广泛的应用价值，首先在医学与生物学研究中，SLO作为成孔蛋白，被用作打孔工具；其次，在诊断医学中，作为检测试剂，用来检测被Streptococcuspyogenes感染的患者体内的抗SLO的抗体(anti-SLO)；再其次，可以用做细胞自杀基因和自杀蛋白，研究其在控制肿瘤细胞繁殖中的应用。 从天然链球菌中获得SLO的工艺成本高，得率低，具有不安全性。自1984年以来，前人一直研本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人工改造合成的化脓链球菌溶血素基因ｎｓｌｏ，具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种人工改造合成的化脓链球菌溶血素基因nslo，具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的溶血素基因nslo，其特征在于所述核苷酸序列使用大肠杆菌的偏爱性密码子。3.含有权利要求1所述溶血素基因nslo的表达载体。4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于所述表达载体为分泌型载体。5.根据权利要求4所述的表达载...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵庆新，王欢莉，康贻军，
申请(专利权)人：盐城师范学院，
类型：发明
国别省市：32