本发明专利技术涉及一种在有Ｍ类免疫球蛋白存在的情况下，用于测定体液中Ｇ类免疫球蛋白的抗原特异性抗体的方法，该方法通过与至少两种不同的受体Ｒ↓［１］和Ｒ↓［２］以及可以选择地与其它受体一起温孵，Ｒ↓［２］的基本组成为呈单体形式的结合配偶体，本发明专利技术还涉及一种用于测定Ｇ类免疫球蛋白的抗原特异性抗体的试剂以及呈单体形式的结合配偶体用于测定Ｇ类免疫球蛋白的抗原－特异性抗体的用途。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于测定体液中G类免疫球蛋白的抗原-特异性抗体的方法，该方法通过与至少两种不同的受体R1和R2一起温孵所述的样品(其中的两种受体都能特异性地结合到抗体上，R1被结合或者可以被结合到固相上，而R2携带一个标记)，从液相中分离出固体以及测量所述的标记(其中由待测定的抗体特异性识别的呈单体形式的结合配偶体和标记的缀合物被用作R2)来实现。具体地说，本专利技术涉及一种在有IgM类免疫球蛋白存在下，特异性地检测IgG类免疫球蛋白的方法。为了对外源物质的引入产生响应，哺乳动物生物体的免疫系统产生了亦被称为免疫球蛋白的抗体。它们防御亦被称作抗原的外源物质。可以把免疫球蛋白划分为五个不同的种类。人们在M，G，A，E和D类的免疫球蛋白之间进行划分。这五类免疫球蛋白的每一种都在重链的组成上有所不同，被称作μ、γ、α、ε和δ链。每一类免疫球蛋白在生物体中都具有不同的功能。随着与抗原的第一次接触、即所谓的第一次免疫接种，出现了M类免疫球蛋白。但是，随着感染的进行，这些免疫球蛋白的浓度迅速降低。G类免疫球蛋白在第一次免疫接种之后首先缓慢地形成，并且当用同一抗原进行第二次感染时大量地出现。A类免疫球蛋白是在生物体的粘膜表面上发现的，并且它决定着该处的防御过程。E类免疫球蛋白主要导致过敏反应。D类免疫球蛋白的确切功能迄今仍是未知的。在血液中，各个种类的免疫球蛋白存在的浓度差别非常大。因此，G类免疫球蛋白(IgG)是正常人血清中的主要种类，其份额约为75％，这对应于8至18mg/ml的血清含量。第二种最频繁出现的免疫球蛋白为IgA，它的平均血清浓度为0.9至4.5mg/ml。M类免疫球蛋白存在的浓度为0.6至2.8mg/ml，D类免疫球蛋白存在的浓度为0.003至0.4mg/ml。IgE抗体的比例是最低的，它在血清中仅以0.02至0.05μg/ml的浓度存在。为了有区别地诊断许多的疾病，重要的是检测对具体的抗原具有特异性的一类或几类非常具体的免疫球蛋白的抗体。仅仅可以通过种类-特异性抗体测试或者通过排除某些种类的免疫球蛋白的存在(例如，检测IgG和IgA抗体、而不检测IgM抗体)来保证对病毒、细菌和寄生虫感染的令人满意的诊断。这对于区分新近的或者急性的感染和更早些时候已经发生的感染以及对于临床监测感染的过程来说是特别重要的。抗体的种类-特异性检测对HIV、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、弓形体病病毒、风疹病毒和衣原体的感染来说尤其重要。对于测定保护抗体的滴度以及检查免疫接种的成功来说，特异于具体抗原的抗体的种类-特异性检测也是必需的。因此从诊断的观点来看，在尤其检测感染的非急性期的抗体(比如IgG和IgA抗体)方面有很大的兴趣。在现有技术中，已经描述了多种用于检测对抗原具有特异性的具体种类的抗体的方法。因此，通过把特异性抗体结合到用特异性的抗原包被的固相上，频繁地检测具体种类的抗原-特异性抗体。通过把特异性地针对某类人Ig的抗体结合到待检测的Ig分子上，检测特异于抗原的、目前被结合到固相上的免疫球蛋白(Ig)。给针对人Ig的抗体提供一个标记，借此进行检测。但是，这样的一种测试方法仅在下列情况下是可能的，即如果在与针对人Ig的种类-特异性标记的抗体反应之前，通过洗涤除去所有的非特异性非结合的Ig。因此，作为通常需要的、用于自动系统的一步测试方法是不可能的。根据在美国专利4,292,403中所述的方法，通过把种类-特异性抗体固定化在结合待测定的样品抗体的固相上、随后加入特异性抗原并把已结合的抗原结合到进一步进行了标记的对所述抗原具有特异性的抗体上，检测具体种类的免疫球蛋白的抗原-特异性抗体。但是，该方法的缺点为待测定种类的所有抗体都必须结合到固定化的种类-特异性抗体上。而样品抗体并不是对抗原特异性地结合着。这就可能减小了测试的灵敏度，因为对抗原-特异性抗体而言可能不存在足够的游离的结合位点。在这种测试方法中，几个洗涤步骤也是必需的。这种方法不能实现一步测试方法。由所谓的桥测验Brückentest提供了以一步测试进行抗体检测的一种可能性。在EP-A-0 280 211中描述了桥测验的概念。在该方法中，把能够特异性地结合到待测定的抗体上的第一受体(比如抗原)结合到固相上。待测定的抗体结合到固相-结合的抗原上。此外，在测试混合物中存在另一种提供了标记的特异性抗原。通过标记来检测抗体。在这种测试中，检测了所有的抗原-特异性抗体、而不仅仅是具体种类的抗体。在EP-A-0 307 149和美国专利5,254,458中，公开了以桥测验原理为基础的用于检测特异地针对抗原的抗体的方法。在这一情况下，使用从抗原的某个表位得到的、经重组生成的肽来结合待检测的抗体。把肽固定化到固相上。样品抗体结合到肽上。把进一步进行了标记的肽结合到样品抗体上以进行检测。为了增加试验的特异性，在不同的生物体中表达重组肽。另外在这种方法中，所有种类的抗体都结合到肽上。例如，这就不可能在IgG和IgM抗体之间加以区别。EP-A-0 386 713描述了一种使用两种固体载体检测抗HIV的抗体的方法，其中把不同的HIV抗原固定化到两种固体载体上，使它们各自与样品的等分试样和标记的HIV抗原接触，其中通过在至少一次试验中的阳性反应来检测抗体的存在。公开了作为HIV抗原的经重组生产的多肽。在EP-A-0 627 625中公开了一种以Western印迹为基础的方法，其中通过重组蛋白或合成肽也可以检测HIV抗体。但是，这两种方法都不能实现抗原-特异性抗体的种类-特异性检测。先有的方法不能使某类免疫球蛋白的抗原-特异性抗体以一步法进行检测。从现有技术的状态已知的、以桥测验概念为基础的(其中使用了标记的抗原和能够结合到固相上的抗原)检测的免疫学方法的确能够进行一步试验。但是迄今为止，利用这一简单的原理，仅仅已经可能共同检测出IgG和IgM类的抗体。因此，所述的目的为提供一种用于检测针对特异性抗原的非急性感染的抗体的改进方法、即具体地讲为IgG类。与此同时，该方法应当保证特异性相同的IgM抗体不被检测到。为了在自动系统中有利地使用，该方法应当优选地由一步试验的原理组成。这一目的是通过根据本专利技术用于测定G类免疫球蛋白的抗原-特异性抗体的方法来实现的，该方法通过与至少两种不同的受体R1和R2一起温孵所述的样品(其中的两种受体都能特异性地结合到抗体上，R1被结合或者可以结合到固相上，而R2携带一个标记)来实现，其特征在于由待测定的抗体特异性识别的呈单体形式的结合配偶体和标记组成的缀合物被用作R2。本专利技术的方法可以进行样品中G类免疫球蛋白的抗原-特异性抗体的测定，其中存在着抗原-特异性相同的IgM类抗体。存在于样品中的与待检测的IgG抗体具有同样特异性的IgA，IgD和IgE抗体以低于IgG抗体浓度很多的浓度存在。具体说来，IgD和IgE类以低于IgG浓度几个数量级的浓度存在，从而在该检测方法中它们的反应性没有或者几乎不改变测量的结果。IgA抗体以对应于总IgG含量的大约10％的浓度存在。因而在该方法中，推测还将测量到IgA抗体。由于所述方法的主要目的为检测非急性感染的抗体，因此同为非急性感染的两种抗体、即IgG和IgA抗体的共同的检测就并不重要了。由于IgG抗体是非急性感染本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于测定Ｇ类免疫球蛋白的抗原－特异性抗体的方法，该方法通过与至少两种不同的受体Ｒ↓［１］和Ｒ↓［２］一起温孵所述的样品，其中的两种受体都能特异性地结合到所述抗体上，Ｒ↓［１］被结合到固相上或者可以被结合到固相上、而Ｒ↓［２］携带一个标记，其特征在于，使用由待测定的所述抗体特异性识别的呈单体形式的结合配偶体和标记的组成的缀合物作为Ｒ↓［２］。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：E法茨，U施米特，
申请(专利权)人：罗赫诊断器材股份有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]
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