抗天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-8的抗体,其制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及抗天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶－８（ｃａｓｐａｓｅ－８）中特异性区域的抗体及其应用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
,其制备方法及应用的制作方法
本专利技术涉及抗天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶(caspase-8)中特异性区域的抗体及其应用。
技术介绍
肿瘤坏死因子(TNF-α)和淋巴毒素(TNF-β)是多功能促炎细胞因子，它们主要由单核白细胞形成，对细胞有多种作用(Wallach，D.(1986)，Interferon 7(IonGresser编辑)，83-122页，Academic Press，London；Beutler和Cerami(1987))。TNF-α和TNF-β通过结合特异性细胞表面受体来启动其作用。其中一些作用可能对生物体有利它们可能会破坏例如肿瘤细胞或感染了病毒的细胞，并增强粒细胞的抗菌活性。通过这种方式，TNF对于保护生物体抵御肿瘤和感染性因子以及从损伤中恢复有贡献。因此，TNF可用作抗肿瘤剂，其中它结合肿瘤细胞表面上的受体，从而启动了导致肿瘤细胞死亡的行为。TNF还可用作抗感染剂。然而，TNF-α有有害的作用。有证据显示，过度产生TNF-α会在几种疾病中起主要致病作用。例如，已经知道，TNF-α主要作用于脉管结构，这是脓毒休克症状的主要病因(Tracey等，1986)。在一些疾病中，TNF可能会通过抑制脂肪细胞的活性和引起缺乏食欲而导致体重过度减轻(恶病质)，因此，TNF-α称为恶病质素。另外，它还被描述成是风湿性疾病中组织损伤的一种介导剂(Beultler和Cerami，1987)，以及移植物抗宿主反应中所见破坏的主要介导剂(Grau GE等人，1989)。此外，已知TNF参与发炎过程和其它许多疾病。两种不同的独立表达的受体p55(CD120a)和p75(CD120b)TNF受体与TNF-α和TNF-β特异性结合，它们启动和/或介导了TNF的上述生物学效应。这两种受体在结构上有不相似的胞内结构域，这暗示它们的信号传导方式不同(参见Hohmann等，1989；Engelmann等，1990；Brockhaus等，1990；Loestscher等，1990；Schall等，1990；Nophar等，1990；Smith等，1990)。然而，例如涉及CD120a和CD120b胞内信号传导的各种蛋白和可能存在的其它因子的细胞机制尚未得到阐明。该胞内信号的传导通常在配体(即TNF-α或β)结合受体后发生，正是该胞内信号的传导致使级联反应开始并最终导致所见的细胞对TNF的反应。关于上述TNF的杀细胞作用，就目前研究的大多数细胞而言，该作用主要由CD120a引发。抗CD120a胞外结构域(配体结合域)的抗体本身能引发杀细胞效应(见EP 412486)，该效应与受体交联抗体的效率相关，认为这是胞内信号传导过程产生的第一步。而且，诱变研究(Brakebusch等，1992；Tartaglia等，1993)已经表明，CD120a的生物功能取决于其胞内结构域的完整性，因而提出导致TNF杀细胞效应的胞内信号传导启动的发生是CD120a的两个或多个胞内结构域缔合的结果。而且，TNF(α和β)形成均三聚体，因此，已提出通过CD120a靠其结合和交联受体分子即引起受体聚集的能力来诱导胞内信号传导(Engelmann H等，1990)。TNF/NGF受体超家族的另一个成员是FAS/APO1受体(CD95)。CD95以凋亡方式介导细胞死亡(Itoh等，1991)，并且好象是自身反应T细胞的阴性选择物，即在T细胞成熟期间，CD95介导了识别自身抗原的T细胞的凋亡性死亡。还发现，CD95基因(lpr)中的突变在小鼠引起了与人自身免疫疾病全身性红斑狼疮(SLE)相似的淋巴细胞增生疾病(Watanable-Fukunaga等，1992)。CD95的配体是其它细胞中杀伤T细胞(或细胞毒性T淋巴细胞-CTL)中携带的细胞表面相关分子，因此，当该CTL接触携带CD95的细胞时，它们能诱导携带CD95的细胞编程性细胞死亡。另外，已经制得对CD95有特异性的单克隆抗体，该单克隆抗体能诱导携带CD95的细胞，包括被编码人CD95的cDNA转化的小鼠细胞凋亡性细胞死亡(Itoh等，1991)。Wallach等(1999)对TNF受体与包括不同受体的Fas信号传导机制、它们的调节及下游已鉴定的信号传导分子作了详细综述。已经发现，某些恶性细胞和HIV感染的细胞在其表面携带了CD95，因此可利用抗CD95的抗体或CD95配体来引发这细胞中的CD95介导的胞毒作用，从而提供一种抵抗这些恶性细胞或HIV感染的细胞的方法(见Itoh等，1991)。因此，寻求其它方法来增强CD95胞毒活性可能也会有治疗潜力。提供一种调节对TNF(α或β)和CD95配体的细胞反应的方法是人们长期以来的需求。例如，在上述病理场合下，当TNF或CD95配体过度表达时，就需要抑制TNF或CD95配体诱导的杀细胞效应，而在其它场合，例如伤口愈合的应用中，则希望增强TNF的效应，或在CD95的情况下，在肿瘤细胞或HIV感染的细胞中，希望增强CD95介导的效应。申请人已经用了很多方法(例如参见欧洲专利申请No.EP 186833，EP 308378，EP 398327和EP 412486)来调节TNF的有害作用，方法是用抗TNF抗体或可溶性TNF受体(基本上是此受体的可溶性胞外结构域)抑制TNF与其受体结合，以和TNF与细胞表面结合的TNF受体(TNF-Rs)结合竞争。另外，由于TNF与其受体的结合是TNF诱导细胞效应所需的，因此申请人已经设法通过调节TNF-Rs的活性来调节TNF的作用(例如参见EP 568925)。EP 568925涉及一种调节信号转导和/或TNF-Rs中断裂的方法，从而肽或其它分子可与受体本身或与该受体相互作用的效应蛋白相互作用，从而调节了TNF-Rs的正常功能。EP 568925描述了在CD120a的胞外、跨膜和胞内结构域中有突变的各种CD120a突变体的构建和性质分析。这样，CD120a的上述结构域内的区域被确定为受体发挥功能，即与配体(TNF)结合以及随后的信号转导和胞内信号传导，最终导致所见的TNF对细胞的效应所必需的。而且，该文还描述了许多分离和鉴定蛋白、肽或其它因子的方法，这些蛋白、肽或其它因子能结合CD120a上述结构域内的不同区域，可能参与了TNF-Rs活性的调节或调控。在EPO 368925中还描述了分离和克隆编码这些蛋白和肽的DNA序列的方法；构建表达载体来产生这些蛋白和肽的方法；以及与CD120a或与结合CD120a不同区域的上述蛋白和肽相互作用的抗体或其片段的制备方法。然而，EP 568925没有指明结合TNF-Rs胞内结构域的实际蛋白和肽。同样，EP 568925也没有公开能结合CD95胞内结构域的蛋白或多肽。因此，当希望抑制TNF或CD95配体的作用时，需要减少细胞表面的TNF-Rs或CD95的数量或活性，而当需要增强TNF或CD95配体的作用时，希望增加TNF-Rs或CD95的数量或活性。出于这一目的，已经对CD120a和CD120b的启动子进行了测序和分析，并且已经发现了许多对不同转录调节因子有特异性的一些关键序列基序，因此可以在其启动子水平上来控制这些TNF-Rs的表达，即通过抑制启动子的转录来减少受体数量，增强启动子转录本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过用天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶－８（ｃａｓｐａｓｅ－８）Ｓｕｂ－１亚基Ｃ末端的肽及其片段免疫动物而得到的抗体，其特征在于：所述抗体能够共免疫沉淀所述的ｃａｓｐａｓｅ（活性ｃａｓｐａｓｅ－８和ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ－８）与ｃａｓｐａｓｅ结合蛋白，而且能够在洗脱后自免疫复合物中有效地释放出ｃａｓｐａｓｅ和ｃａｓｐａｓｅ结合蛋白。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：D沃勒克，T冈察洛夫，G克鲁马姆，
申请(专利权)人：耶达研究发展有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]