胱冬酶-8结合蛋白及其制备和使用制造技术

本发明专利技术涉及一种胱冬酶－８相互作用多肽（Ｃａｒｉ）的制备和使用方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种胱冬酶-8相互作用多肽(Cari)，其制备方法和使用。
技术介绍
肿瘤坏死因子(TNF-α)和淋巴毒素(TNF-β)是主要由单核白细胞形成的多功能促炎细胞因子，对于细胞有许多功能(Wall，D.(1986)，《干扰素7》(Interferon 7)(Ion Gresser编)，83-122页，Academic Press，London；Beutler和Cerami(1987)。TNF-α和TNF-β都通过结合特异细胞表面受体来开始作用。一些效果似乎对生物体有利它们可破坏例如肿瘤细胞或病毒感染的细胞且增强粒细胞的抗菌活性。这样，TNF有助于生物体抗肿瘤和感染剂的防御且有助于从损伤中恢复。因此，TNF可用作抗肿瘤剂，在此应用中TNF结合其肿瘤细胞表面受体并从而起始导致肿瘤细胞死亡的事件。TNF也可用作抗感染剂。然而，TNF-α具有害作用。证据表明TNF-α的过度生成在一些疾病中可能起主要的致病作用。例如，主要在脉管系统的TNF-α作用已知是引起感染性休克症状的主要原因(Tracey等，1994)。在一些疾病中，TNF可通过抑制脂肪细胞活性和导致厌食来引起重量过多减少(恶病质)，因此TNF-α被称为恶液质素。它也被描述为风湿性疾病中组织损坏的调节物(Beutler和Cerami，1987)和移植物抗宿主中所观察损伤的主要调节物(Grau GE等，1989)。此外，已知TNF参与炎性疾病和许多疾病过程。两种不同、单独表达的受体p55(CD120a)和p75(CD120b)TNF受体都特异结合TNF-α和TNF-β，起始和/或调节上述TNF的生物作用。这两种受体具有结构不同的胞内结构域，表明它们信号不同(参见Hohmann等，1989；Engelmann等，1990；Brockhaus等，1990；Loetscher等，1990；Schall等，1990；Nophar等，1990；Smith等，1990)。然而，细胞机制例如参与CD120a和CD120b胞内信号产生的多种蛋白质和可能的其它因子还有待阐明。胞内信号通常在配体结合受体后发生，配体即TNF(α或β)，受体使级联反应开始，最终产生所观察到的细胞对TNF的反应。关于上述TNF在迄今所研究大部分细胞中的细胞坏死作用，此作用主要由CD120a引起。抗CD120a胞外结构域(配体结合结构域)的抗体本身可引发细胞坏死作用(参见EP 412486)，与被抗体交联受体的效果相关，这被认为是产生胞内信号过程中的第一个步骤。此外，突变研究(Brakebusch等，1992；Tartaglia等，1993)显示CD120a的生物功能取决于胞内结构域的完整性，因此表明起始导致TNF细胞坏死作用的胞内信号是作为两个或更多CD120a胞内结构域相联的结果。而且，TNF(α或β)作为同源三聚体产生，显示经CD120a诱导胞内信号，这是通过它与受体分子结合和交联的能力，即引起受体聚合(Engelmann H.等，1990)。TNF/NGF受体超家族的另一个成员是FAS/AP01受体(CD95)。CD95调节细胞调亡形式的细胞死亡(Itoh等，1991)，似乎作为自身反应T细胞的负选择子，即在T细胞成熟中，CD95调节识别自身抗原的T细胞的细胞调亡死亡。同样发现CD95基因(lpr)突变导致小鼠中的淋巴增生疾病，类似人自身免疫性疾病系统性红斑性狼疮(SLE)(Watanabe-Fukunaga等，1992)。CD95的配体是杀伤T细胞(或细胞毒性T淋巴细胞-CTLs)携带的细胞表面相关分子，因此当这些CTLs接触携带CD95的细胞时，它们能诱导携带CD95细胞的细胞调亡死亡，包括转化编码人CD95 cDNA的小鼠细胞(如Itoh等，1991)。TNF受体和包括不同受体的Fas信号机制，它们的调节和鉴定的下游信号分子由Wallach等，(1999)详细综述。发现一些恶性细胞和HIV感染细胞在它们的表面携带CD95，抗CD95抗体或CD95配体可用于在这些细胞中引起CD95调节的细胞毒性作用，从而提供抗这些恶性细胞和HIV感染细胞的方法(参见Itoh等，1991)。因此发现另外提高CD95细胞毒性活性的方法也具有治疗潜力。一直需要一种调节细胞对TNF(α或β)和CD95配体反应的方法。例如，在上述病理情况下，当TNF或CD95配体过量表达时需要抑制TNF或CD95配体诱导的细胞毒性作用，而在其它情况下，如伤口愈合应用需要增强TNF作用，或在CD95的情况下，肿瘤细胞或HIV感染细胞中需要增强CD95调节作用。专利申请人采用了一些方法(参见例如欧洲专利说明书号EP186,833、EP 308,378、EP 398,327和EP 412,486)以调节TNF的有害效果，这是通过用抗TNF抗体抑制TNF结合其受体或使用可溶性TNF受体(本质上是受体可溶性胞外结构域)竞争TNF与细胞表面结合TNF受体(TNF-Rs)的结合。此外，在TNF诱导的细胞效果需要TNF结合其受体的基础上，专利申请人采用方法(参见例如EP 568,925)通过调节TNF-Rs活性来调节TNF作用。EP 568,925涉及调节信号转导和/或TNF-Rs中裂解的方法，其中肽或其它分子可与受体本身或效应蛋白相互作用，效应蛋白与受体相互作用，从而调节TNF-Rs的正常功能。在EP 568,925中描述了多种CD120a突变形式的构建物和特征，在其胞外、跨膜和胞内结构域中有突变。这样，鉴定上面CD120a结构域中的区域对于受体功能是必需的，即结合配体(TNF)和随后的信号转导和最终对细胞产生所观察TNF作用的胞内信号。此外，也描述了一些分离和鉴定能结合上面CD120a结构域中多个区域的蛋白质、肽或其它因子的方法，蛋白质、肽或其它因子可参与控制或调节TNF-Rs活性。同样在EP0 368,925中列出了一些方法，用于分离和克隆编码这种蛋白质和肽的DNA序列；用于构建生成这些蛋白质和肽的表达载体；用于制备抗体或其与CD120a或上面蛋白质和肽相互作用的片段，蛋白质和肽结合CD120a的多个区域。然而，EP 568,925没有详细说明结合TNF-Rs胞内结构域的确切蛋白质和肽。类似的，在EP 568,925中没有揭示能结合CD95胞内结构域的具体蛋白质和肽。因此，当需要抑制TNF或CD95配体的作用时需减少细胞表面TNF-Rs或CD95的量或活性，而当追求增强TNF或CD95配体的作用时需增加TNF-Rs或CD95的量或活性。为了此目的，CD120a和CD120b的启动子都被测序、分析且发现一些对不同转录调节因子特异的关键序列基序，这些TNF-Rs的表达可在它们的启动子水平控制，即抑制启动子转录以减少受体数量和增加启动子转录以增加受体数量(EP606，869和WO 9531206)。已知肿瘤坏死因子(TNF)受体和结构相关受体CD95通过白细胞-生成配体的刺激在细胞中引起导致自身死亡的破坏作用，对此触发机制仍理解很少。突变研究表明在CD95和CD120a中，细胞毒性信号包括它们胞内结构域中的不同区域(Brakebusch等，1992；Tartaglia等，1993；Itoh和Nagata，1993)。这本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能与胱冬酶原或突变蛋白或其片段相互作用的胞内多肽（Ｃａｒｉ），其特征在于，所述多肽包括ＳＥＱＩＤＮＯ：３、或同工型、ＤＦ５１８２＿３以外的突变蛋白、等位基因变体、片段、融合蛋白或其衍生物的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：D沃勒克，T冈察洛夫，G克鲁马姆，A拉杰普特，
申请(专利权)人：耶达研究发展有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]