抗TIM-3抗体制造技术

本发明专利技术提供了针对与表达人TIM-3的细胞相关的疾病的抗人TIM-3抗体，所述抗体与TIM-3的胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合并表现出较高的效应子活性例如抗体依赖性细胞性细胞毒性（ADCC活性）。本发明专利技术提供了与TIM-3的胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合并表现出ADCC活性的单克隆抗体或其抗体片段；生产所述抗体的杂交瘤；编码所述抗体的DNA；包含所述DNA的载体；可通过导入所述载体而获得的转化体；用于生产所述抗体或其抗体片段的方法，其包括使用所述杂交瘤或转化体；包含所述抗体或其抗体片段作为活性成分的治疗剂和诊断剂。另外，本发明专利技术通过筛选与所述单克隆抗体或其抗体片段竞争的抗人TIM-3抗体而提供了具有高ADCC活性的抗人TIM-3抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗TIM-3抗体
本专利技术涉及单克隆抗体或其抗体片段，所述单克隆抗体或其抗体片段与含有T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域的分子-3（在后文中称为“TIM-3”）的胞外区结合，并表现出抗体依赖性细胞性细胞毒性（在后文中称为“ADCC”）；生产所述抗体的杂交瘤；编码所述抗体的DNA；包含所述DNA的载体；通过转化所述载体而获得的转化体；使用所述杂交瘤或转化体生产抗体或其抗体片段的方法；以及使用所述抗体或其抗体片段的诊断剂或治疗剂。
技术介绍
TIM-3基因家族由小鼠中的8个基因和人类中的3个基因组成，并且每个这些基因分别位于11号染色体和染色体5q33处（非专利文献1）。已知这些基因区域与自体免疫性疾病和过敏性疾病相关。TIM蛋白是具有结构保守的免疫球蛋白可变（IgV）结构域和粘蛋白结构域的I型跨膜蛋白。TIM蛋白被认为特异性表达在T细胞上并直接调控T细胞活性，但是最近有关于TIM-3蛋白在抗原呈递细胞中的表达及其功能的报道（非专利文献2）。根据晶体结构分析，TIM蛋白具有保守的蛋白结构，并在IgV结构域中具有配体结合位点。TIM-3被鉴定为特异性表达在小鼠Th1细胞上但不表达在Th2细胞上的分子（非专利文献3）。可以在公共数据库例如GenBank登记号NM_032782和NM-134250中获得TIM-3的DNA序列、氨基酸序列和三维结构。TIM-3也被称为HAVCR2。在人类中，与小鼠类似，TIM-3被表达在T细胞以及吞噬细胞例如巨噬细胞和树突状细胞上。TIM-3与蛋白配体（例如半乳糖凝集素9）的结合能够通过诱导凋亡的机制来抑制Th1应答，从而导致例如诱导了外周耐受。用siRNA降低人TIM-3的表达或通过阻断性抗体抑制人TIM-3，增加了γ干扰素（IFN-γ）从CD4阳性T细胞的分泌，这支持了TIM-3在人T细胞中的抑制作用。在吞噬细胞中，TIM-3还作为用于识别凋亡细胞的受体而起作用。来自于自体免疫性疾病患者的临床样品的分析显示，在CD4阳性细胞中没有TIM-3的表达。具体来说，在源自于患有多发性硬化症的患者的脑脊液的T细胞克隆中，与源自于正常健康人的克隆相比，TIM-3的表达水平更低并且IFN-γ的分泌水平更高（非专利文献4）。关于TIM-3与过敏性疾病或哮喘的关联性，已有报道（专利文献1和2）。根据来自于急性髓性白血病（在后文中称为“AML”）患者的造血干细胞和正常造血干细胞的微阵列分析，TIM-3被表达在AML干细胞上，因此，所述分析表明TIM-3参与恶性血液病（非专利文献5和专利文献3）。到目前为止，建立的抗TIM-3单克隆抗体的实例包括抗人TIM-3大鼠单克隆抗体（Clone344823，由R&DSystems制造）和抗人TIM-3小鼠单克隆抗体（CloneF38-2E2，由R&DSystems制造）。相关技术专利文献专利文献1：WO96/27603专利文献2：WO2003/063792专利文献3：WO2009/091547非专利文献非专利文献1：HaflerDA等，JExpMed.205:2699-701（2008）非专利文献2：AndersonAC等，Science318:1141-3（2007）非专利文献3：MonneyL等，Nature415:536-41（2002）非专利文献4：KoguchiK等，JExpMed.203:1413-8（2006）非专利文献5：MajetiR等，ProcNatlAcadSciUSA2009Mar.3;106（9）:3396-401.
技术实现思路
本专利技术要解决的问题然而，还没有关于具有ADCC活性的针对人TIM-3的单克隆抗体的报道。因此，本专利技术的目的是提供与TIM-3的胞外区的氨基酸序列或三维结构结合并表现出ADCC活性的单克隆抗体或抗体片段。此外，本专利技术的目的是通过筛选与所述单克隆抗体或其抗体片段竞争的抗人TIM-3抗体来提供具有高ADCC活性的抗人TIM-3抗体。此外，本专利技术将提供生产所述抗体的杂交瘤，编码所述抗体的DNA，包含所述DNA的载体，通过转化所述载体而获得的转化体，使用所述杂交瘤或转化体生产抗体或其抗体片段的方法，以及使用所述抗体或其抗体片段作为活性成分的诊断剂或治疗剂。问题的解决方案本专利技术的要点涉及下列项。（1）单克隆抗体或其抗体片段，其与人TIM-3的胞外区结合，同时与选自下面（i）至（iii）的一种抗体竞争：（i）抗体，其包括含有互补决定区（在后文中称为“CDR”）1至3的抗体重链（在后文中称为“H链”），所述互补决定区1至3包含分别由SEQIDNO：1至3表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗体轻链（在后文中称为“L链”），所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：4至6表示的氨基酸序列，（ii）抗体，其包括含有CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：11至13表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：14至16表示的氨基酸序列，（iii）抗体，其包括含有CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：21至23表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：24至26表示的氨基酸序列。（2）上面（1）中所描述的单克隆抗体或其抗体片段，其中所述单克隆抗体与选自上面（i）至（iii）的一种抗体所结合的相同表位结合。（3）单克隆抗体或其抗体片段，其与人TIM-3的胞外区结合，同时与选自下面（a）和（b）的一种抗体竞争：（a）抗体，其包括含有由SEQIDNO：8表示的氨基酸序列的抗体VH，并包括含有由SEQIDNO：10表示的氨基酸序列的抗体VL，（b）抗体，其包括含有由SEQIDNO：18表示的氨基酸序列的抗体VH，并包括含有由SEQIDNO：20表示的氨基酸序列的抗体VL。（4）上面（3）中所描述的单克隆抗体或其抗体片段，其与选自上面（a）或（b）的一种抗体所结合的相同表位结合。（5）上面（1）至（4）任一项中所描述的单克隆抗体或其抗体片段，其是重组抗体。（6）上面（5）中所描述的单克隆抗体或其抗体片段，其是选自人嵌合抗体、人源化抗体和人抗体的重组抗体。（7）单克隆抗体或其抗体片段，其是选自下面（i）至（iii）的一种：（i）单克隆抗体及其抗体片段，其包括含有CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：1至3表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：4至6表示的氨基酸序列，（ii）单克隆抗体及其抗体片段，其包括含有CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：11至13表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：14至16表示的氨基酸序列，（iii）单克隆抗体及其抗体片段，其包括含有CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：21至23表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3包含分别由SEQIDNO：24至26表示的氨基酸序列。（8）单克隆抗体及其抗体片段，其是选自下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.11 US 61/3538361.单克隆抗体或其抗体片段，其与人TIM-3的胞外区结合，其中所述单克隆抗体是选自(i)和(ii)的单克隆抗体：(i)单克隆抗体，其包括含有互补决定区CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3分别由SEQIDNO：1至3表示的氨基酸序列组成；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3分别由SEQIDNO：4至6表示的氨基酸序列组成，和(ii)单克隆抗体，其包括含有CDR1至3的抗体H链，所述CDR1至3分别由SEQIDNO：21至23表示的氨基酸序列组成；并包括含有CDR1至3的抗体L链，所述CDR1至3分别由SEQIDNO：24至26表示的氨基酸序列组成，其中所述抗体片段是选自Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗体片段。2.权利要求1的单克隆抗体或其抗体片段，其与人TIM-3的胞外区的三维结构结合。3.单克隆抗体或其抗体片段，其与人TIM-3的胞外区结合，其中所述单克隆抗体是选自(a)的单克隆抗体：(a)单克隆抗体，其包括由SEQIDNO：8的第20至第140位的氨基酸序列组成的抗体VH，并包括由SEQIDNO：10的第21至第127位...

【专利技术属性】
技术研发人员：高柳晋一郎，户村瞳，俵知纪，稻垣好昌，久保田丽夫，赤司浩一，菊繁吉谦，
申请(专利权)人：协和发酵麒麟株式会社，国立大学法人九州大学，
类型：
国别省市：