一种腈水解酶活性的荧光检测方法技术

技术编号:2583313 阅读:474 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供了一种腈水解酶活性的荧光检测方法,所述方法是以腈水解酶水解荧光探针形成荧光物质,测定荧光强度,获得腈水解酶活性数据;所述荧光探针为水杨腈类化合物;所述水杨腈类化合物结构如式(Ⅰ)所示。本发明专利技术的有益效果主要体现在:(1)所用荧光探针制备所需要的设备简单,操作过程简便,原料来源都已商品化容易得到,并且所制备的这种新型的腈水解酶荧光探针性质很稳定,纯度也很高(99%以上);(2)与目前所用的检测腈水解酶活性的基本方法-HPLC法相比较,其精确度、灵敏度和检测速率(可以同时检测96种腈水解酶的活性,耗时仅需几分钟)都有很大的提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,尤其是一种以水杨腈类化合物为荧光探针的腈水解酶活性的荧光检测方法
技术介绍
腈水解酶是一类非常重要的水解酶,它可将腈基直接水解为羧酸和铵。研究表明,在生物体内它参与多种重要物质的生物合成,如植物荷尔蒙以及3-羧基吲哚。此外,腈水解酶作为一种生物催化剂,在羧酸及衍生物的不对称合成中占有极其重要的地位。目前对于腈水解酶活性的检测,基本上采用高效液相色谱。但是这种方法费时费力,并不适合高通量检测。最近,一些新的检测方法,例如Berthelot法和Fourier-transform IR的腈水解酶催化活性实时探测法得到了一定的应用。但是这两种方法本身都存在着较大的缺陷前者是将腈水解后释放的NH3与苯酚/次氯酸试剂作用,在640nm处测定其分光度,这个方法的最大缺点是它的灵敏度低,并且需要腐蚀性的试剂,这限制了它的大规模应用。后者是利用了硅探针,尽管这个方法和腈水解反应的动力学契合得比较好,但是却受到了设备方面的限制,而且硅探针还不能做到十分有效,这些都降低了这些方法的有用性。因此,设计出一种更为快速、灵敏、有效的腈水解酶的检测方法是相当必要和迫切的,比较好的选择是应用荧光本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种腈水解酶活性的荧光检测方法,所述方法是以腈水解酶水解荧光探针形成荧光物质,测定荧光强度,获得腈水解酶活性数据;其特征在于:所述荧光探针为水杨腈类化合物;所述水杨腈类化合物结构如式(1)所示:***(Ⅰ)式中,R为H、 或Cl、或Br、或F、或OCH↓[3]、或CH↓[3]、或Ph、或COOH、或COOCH↓[3]、或COOC↓[2]H↓[3]。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:朱勍
申请(专利权)人:浙江工业大学
类型:发明
国别省市:86[中国|杭州]

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