一种检测土壤木聚糖酶活性的分析方法技术

本发明专利技术涉及一种检测土壤中木聚糖酶活性的分析方法：１）称取筛分的土壤风干样品ｎ份于ｎ支粗试管中，向各试管中加入醋酸缓冲溶液，使用旋涡振荡器振荡，在振荡条件下取土壤悬液至９６微孔板，向ｎ－１个孔中加入４－ＭＵＢ－７－β－Ｄ－木糖苷底物溶液，另一孔中加入等量水作为无底物对照，向第ｎ＋１个孔中加入等量底物溶液和等量水作为无土壤对照，恒温条件下振荡培养；２）培养结束后向微孔板中加入ＮａＯＨ终止反应；３）多功能酶标仪对反应产物进行荧光测定；４）计算木聚糖酶活性。本发明专利技术的优点为：１）与传统方法相比，减短了培养时间，省略了过滤等操作程序，简化了操作步骤；２）微孔板内的荧光物质可通过多功能酶标仪在１５ｓ内同时获得测定数据，允许大量样品同时进行测定；３）准确度高，易操作；４）结果稳定可靠，重现性好。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测土壤中木聚糖酶活性的分析方法，其特征在于：　１）以已知系列浓度的ＭＵＢ溶液为标准物，采用酶标仪进行荧光检测，发射光波长３６５ｎｍ，测定光波长４７０ｎｍ；作为测定的标准曲线；以ＭＵＢ标准溶液的系列浓度和测定的吸光值Ａ｀制作工作标 准曲线，得到斜率ｂ；　２）分别称取ｎ份３－５ｇ过１－２ｍｍ筛的土壤风干样品于ｎ支粗试管中，ｎ为≥３的正整数，向各试管中加入３０－５０ｍｌ　０．４５－０．５５ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ｐＨ５．０－６．０的醋酸缓冲溶液，使用微量进液枪在旋涡振荡 条件下从粗试管中取１００μｌ土壤悬液加入微孔板中，占有ｎ个微孔，向其中ｎ－１个孔中加入１０ｍＭ　４－ＭＵＢ－β－Ｄ－木糖苷的底物溶液１００μｌ，另一孔中加入１００μｌ水作为无底物对照；向第ｎ＋１个孔中加入１００μｌ底物溶液和１００μｌ水作为无土壤对照；２５℃－３０℃条件下振荡培养２．５－３．５ｈ；分别向孔内加入１００μｌ　２－２．５ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＮａＯＨ终止反应；　３）将微孔板置入多功能酶标仪进行荧光检测，发射光波长３６５ｎｍ，测定光波长４７０ｎｍ；在多功能酶标仪 上测定荧光度为Ａ；　４）根据吸光值Ａ和斜率ｂ，计算所测滤液中ＭＵＢ的浓度Ｓ，Ｓ＝Ａ＊ｂ；　５）根据ＭＵＢ的量计算出酶活性；计算公式为：ｘ＝［Ｓ＊（３０－５０）］／（Ｖ＊ｂ＊Ｔ）　式中：ｘ为木聚糖酶活性（单位：μｍｏｌ　ＭＵ Ｂ.ｇ↑［－１］.ｈ↑［－１］），Ｓ为步骤４所获得的荧光物质的浓度，Ｖ为反应体系内的溶液总体积（单位ｍｌ），ｂ为称取的土壤重量（单位：ｇ），Ｔ为培养时间（单位：ｈ）。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽莉，武志杰，陈利军，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]