受体GPR86的用途制造技术

我们公开了鉴定适合于治疗、预防或减轻ＧＰＲ８６相关疾病，特别是炎性疾病或疼痛的分子的方法，该方法包括确定候选分子是否是ＧＰＲ８６多肽的激动剂或拮抗剂，其中所述ＧＰＲ８６多肽包含ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３、ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：７中所示氨基酸序列、其片段或与其至少９０％相同的序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】领域本专利技术涉及核酸和由它们编码的多肽的新鉴定功能，以及它们的生产和用途。更具体的说，核酸和多肽涉及G蛋白偶联受体(GPCR)，下文称为“GPR86”，和GPCR的嘌呤受体家族的成员。本专利技术还涉及抑制或活化这种核酸和多肽的作用。背景已经明确确定许多医学上重要的生物学进程是由参与涉及G蛋白和/或第二信使例如cAMP的信号转导途径的蛋白质介导的(Lefkowitz，Nature，1991，351353-354)。这些蛋白质称为参与G蛋白途径的蛋白质或“PPG蛋白”。这些蛋白质的一些实例包括GPC受体，诸如肾上腺素能药剂和多巴胺的那些受体(Kobilka，B.K.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1987，8446-50；Kobilka，B.K.et al.，Science，1987，238650-656；Bunzow，J.R.et al.，Nature，1988，336783-787)、G蛋白本身、效应物蛋白质例如磷脂酶C、腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶、及驱动物(actuator)蛋白质例如蛋白激酶A和蛋白激酶C(Simon，M.I.et al.，Science，1991，252802-8)。例如，在一种形式的信号转导中，激素结合的效果是活化细胞内部的腺苷酸环化酶。激素对酶的活化依赖于核苷酸GTP的存在。GTP还影响激素结合。G蛋白将激素受体连接到腺苷酸环化酶上。据显示G蛋白受激素受体活化时，将结合的GDP交换成GTP。然后携带GTP的形式就结合活化的腺苷酸环化酶。G蛋白本身催化GTP水解成GDP，使G蛋白返回到基础的无活性形式。因此，G蛋白作为将信号从受体转播到效应器的中间物和控制信号持续时间的计时器而起双重作用。G蛋白偶联受体(GPCR)的膜蛋白基因超家族已经鉴定出具有七个推定的跨膜域。认为这些结构域代表由胞外环或胞质环连接的跨膜α螺旋。G蛋白偶联受体包括范围广泛的生物学活性受体，诸如激素、病毒、生长因子和神经受体。G蛋白偶联受体(又名7TM受体)已经鉴定为包含约20-30个氨基酸的这七个保守疏水片段，连接至少八个分散的亲水环。偶联受体的G蛋白家族包括结合用于治疗精神和神经障碍的精神安定药的多巴胺受体。该家族成员的其它实例包括但不局限于降钙素、肾上腺素、内皮素、腺苷、毒蕈碱(muscarinic)、血清素、组胺、凝血酶、激肽、促卵泡激素、视蛋白、内皮分化基因-1、视紫红质、气味(odorant)和巨细胞病毒受体。大多数G蛋白偶联受体在前两个胞外环每一个中具有单个保守半胱氨酸残基，认为它们所形成的二硫键稳定功能性蛋白质结构。7个跨膜区命名为TM1、TM2、TM3、TM4、TM5、TM6和TM7。TM3已经与信号转导联系起来。半胱氨酸残基的磷酸化和脂化(lipidation)(棕榈基化(palmitylation)或法尼基化(farnesylation))能影响有些G蛋白偶联受体的信号转导。大多数G蛋白偶联受体在第三个胞质环和/或羧基末端内包含潜在的磷酸化位点。对于几种G蛋白偶联受体，诸如β-肾上腺素受体，蛋白激酶A和/或特异受体激酶的磷酸化介导受体脱敏。对于有些受体，认为G蛋白偶联受体的配体结合位点包含由几个G蛋白偶联受体跨膜域形成的亲水槽，该槽由G蛋白偶联受体的疏水残基包围。认为每个G蛋白偶联受体跨膜螺旋的亲水面都面向内部，并形成极性的配体结合位点。TM3因为具有配体结合位点，诸如TM3天冬氨酸残基，而与几种G蛋白偶联受体有关。TM5丝氨酸、TM6天冬酰胺及TM6或TM7苯丙氨酸或酪氨酸也与配体结合有关。G蛋白偶联受体能通过异源三聚体G蛋白在胞内偶联各种胞内酶、离子通道和转运蛋白(参见Johnson et al.，Endoc.Rev.，1989，10317-331)。不同的G蛋白α亚基优先刺激特定效应器在细胞中调节各种生物学功能。已经鉴定G蛋白偶联受体细胞质残基的磷酸化是调节G蛋白偶联有些G蛋白偶联受体的重要机制。在哺乳动物宿主内的许多部位发现了G蛋白偶联受体。在过去的15年中，近350种靶向7跨膜(7TM)受体的治疗剂已经成功引入市场。因此，G蛋白偶联受体具有确定的、经过证明的作为治疗靶的历史。显然，需要鉴定和表征能在预防、改善或矫正机能障碍或疾病中起作用的更多受体。概述依照的本专利技术的第一方面，我们提供了鉴定适合于治疗、预防或减轻GPR86相关疾病，特别是炎性疾病或疼痛的分子的方法，该方法包括确定候选分子是否是GPR86多肽的激动剂或拮抗剂，其中所述GPR86多肽包含SEQ ID NO3、SEQ ID NO5或SEQ ID NO7中所示氨基酸序列、其片段或与其至少90％相同的序列。优选的是，所述GPR86多肽是由SEQ ID NO1、SEQ ID NO2或SEQID NO4中所示核酸序列或与其至少90％相同的序列编码的。优选的是，该方法包括将候选分子暴露于GPR86多肽并确定候选分子是否结合GPR86多肽。优选的是，通过使所含GPR86受体与GPR86偏爱的G蛋白Gi偶联的细胞接触候选化合物并确定所述细胞中GPCR敏感性标志物诸如环腺苷酸(cAMP)的水平是否由于所述接触而降低来鉴定激动剂。优选的是，通过使所含GPR86受体与GPR86偏爱的G蛋白Gi偶联的细胞接触候选化合物并确定所述细胞中GPCR敏感性标志物诸如环腺苷酸(cAMP)的水平是否由于所述接触而提高来鉴定拮抗剂。优选的是，通过使所含GPR86受体与混杂的刺激性G蛋白诸如Gα16偶联的细胞接触候选化合物并确定所述细胞中GPCR敏感性标志物诸如环腺苷酸(cAMP)的水平是否由于所述接触而提高来鉴定激动剂。优选的是，通过使所含GPR86受体与混杂的刺激性G蛋白诸如Gα16偶联的细胞接触候选化合物并确定所述细胞中GPCR敏感性标志物诸如环腺苷酸(cAMP)的水平是否由于所述接触而降低来鉴定拮抗剂。优选的是，该方法包括(a)提供野生型动物或内源GPR86基因的功能遭到破坏的转基因非人动物；(b)将野生型或转基因非人动物暴露于候选分子；并(c)确定动物的生物学参数是否由于所述接触而改变。优选的是，所述生物学参数选自对刺激的反应、对热的反应、对光的反应、免疫反应、炎性反应、对疼痛的反应，优选对疼痛的反应。优选的是，该方法包括(a)提供野生型细胞或内源GPR86基因的功能遭到破坏的细胞，优选从内源GPR86基因的功能遭到破坏的转基因非人动物中分离的细胞；(b)将细胞暴露于候选分子；并(c)确定GPR86多肽的生物学活性是否由于所述接触而改变。依照本专利技术的第二方面，提供了野生型动物或内源GPR86基因的功能遭到破坏的转基因非人动物在鉴定用于治疗、预防或减轻GPR86相关疾病，特别是炎性疾病或疼痛的GPR86多肽激动剂或拮抗剂的方法中的用途。内源GPR86基因的功能遭到破坏的转基因非人动物或其分离的细胞或组织作为GPR86相关疾病，特别是炎性疾病或疼痛模型的用途。优选的是，所述转基因非人动物包含功能遭到破坏的GPR86基因，优选在GPR86基因或其部分中包含删除。优选的是，与野生型动物相比，转基因非人动物在下列任一项或多项表型中显示出变化对刺激的反应、对热的反应、对光的反应、免疫反应、炎性反应、对疼痛的反应，优选对疼痛的本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴定适合于治疗、预防或减轻ＧＰＲ８６相关疾病，特别是炎性疾病或疼痛的分子的方法，该方法包括确定候选分子是否是ＧＰＲ８６多肽的激动剂或拮抗剂，其中所述ＧＰＲ８６多肽包含ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３、ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：７中所示氨基酸序列、其片段或与其至少９０％相同的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：尼古拉布赖斯，马克卡尔顿，约翰狄克逊，艾伦亨德里克，伊莎贝拉马林奇，索菲梅塞杰，德克赞，
申请(专利权)人：帕拉迪姆医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]