新型的诊断肿瘤的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一类DNA表观修饰相关的疾病标志物，所述标志物在患有肿瘤的患者中表现出显著性的甲基化状态的差异。所述肿瘤标志物可作为临床肿瘤的诊断、筛查、分型、检测、预后的标志物，也可作为肿瘤临床辅助诊断或预后的新型分子，或可用于设计诊断试剂及试剂盒。

New tumor markers and their application

【技术实现步骤摘要】
新型的诊断肿瘤的标志物及其应用
本专利技术属于疾病诊断标志物领域，更具体地，本专利技术涉及新型的诊断肿瘤的标志物及其应用。
技术介绍
表观遗传学(Epigenomics)是研究基因在不发生DNA序列改变的情况下，基因功能的可遗传的变化，并最终导致表型变化的一门学科。表观遗传学主要包括DNA甲基化(DNAmethylation)，组蛋白修饰(histonemodification)，microRNA水平变化等生化过程。DNA甲基化是研究较为深入的表观遗传学机制，在包括诊断和治疗在内的肿瘤临床实践中有着应用前景。DNA甲基化是指生物体内在DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferase，DMT)的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体，将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化可以发生在腺嘌呤的N-6位、胞嘧啶的N-4位、鸟嘌呤的N-7位或胞嘧啶的C-5位等。在哺乳动物中DNA甲基化主要发生在5’-CpG-3’的C上，生成5-甲基胞嘧啶(5mC)。在基因组中98％以上的CpG二核苷酸散在的分布位于具有转录依赖性的转座潜能的重复序列中。在正常细胞中，这些CpG处于高度甲基化/转录沉默的状态，而在肿瘤细胞中这些CpG发生了广泛的去甲基化，导致重复序列的转录、转座子的活化，基因组的高度不稳定性和原癌基因转录增强。余下的占总量2％左右的CpG密集地分布于较小的区域(CpG岛)。约40-50％的基因启动子区域或其附近存在CpG岛，暗示DNA甲基化可能参与该类基因转录调控机制。在肿瘤细胞中，一些原本在正常细胞中处于低甲基化状态的CpG岛会发生高甲基化而导致基因的转录失活。受影响的基因包括DNA修复基因，细胞周期控制基因和抗凋亡基因等抑癌基因。基因组DNA经亚硫酸氢盐处理后，进行PCR(甲基化特异PCR，MSP)检测可有效地确定受试DNA片段的特定位点的甲基化状态。人类基因组全序列尽管已经被人们所掌握，但是基因组序列纷繁复杂，哪些基因或哪些区段与疾病密切相关，仍然是目前本领域研究的重要课题。因此，有必要结合表观遗传学技术筛选有用于疾病诊断的新标志物。在本专利技术人的前期研究中，找到了一部分基于甲基化修饰的肿瘤标记物。但是，仍然有必要找到更多的新型肿瘤标志物，从而为肿瘤的诊断提供更多的途径。将来的肿瘤诊断必然需要多种标志物的联合运用，以提高诊断的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新型的诊断肿瘤的标志物及其应用。在本专利技术的第一方面，提供分离的人核酸或其转变而来的核酸在制备肿瘤筛查、诊断、检测或预后评估的试剂或试剂盒中的用途；其中，所述的人核酸包括(1)SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸或核酸组合，或含有所述序列中至少1个，如包括2～80个(可以是2～80的正整数的任一数)或3～77个(可以是3～77的正整数的任一数)修饰的CpG位点的核酸修饰的CpG位点的核酸或核酸组合；或(2)与(1)的核酸在序列上互补的核酸或核酸组合；其中，所述由人核酸转变而来的核酸为对应于(1)或(2)的核酸，其非修饰的胞嘧啶转变为T或U，而其修饰的CpG位点的胞嘧啶C不变。在另一优选例中，与SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸互补的核酸分别是SEQIDNO:17、23、29、35、41、47、53、59、65、71、77、83、89、95、101、107所示核苷酸序列的核酸。在另一优选例中，所述肿瘤的样本包括：组织样本、石蜡包埋样本、血液样本、胸腔积液样本以及肺泡灌洗液样本、腹水及灌洗液样本、胆汁样本、粪便样本、尿液样本、唾液样本、痰液样本、脑脊液样本、细胞涂片样本、宫颈刮片或刷片样本、组织及细胞活检样本。在本专利技术的另一方面，提供一种分离的人核酸或核酸组合，包括：(1)SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸，或含有所述序列中至少1个修饰的CpG位点的核酸；或(2)与(1)的核酸在序列上互补的核酸。较佳地，所述“含有所述序列中至少1个修饰的CpG位点的核酸”具有约20～1392bp的长度，如长度30、40、50、60、70、80、100、150、200、300、500、1000bp。在一个优选例中，所述修饰的CpG位点包括发生5-醛甲基化修饰、5-羟甲基化修饰、5-甲基化修饰或5-羧甲基化修饰的CpG位点。在另一个优选例中，所述分离的人核酸包括选自下组的核酸：SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸；SEQIDNO:1中第122～175位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:2中第35～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:3中第52～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:4中第33～70位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:5中第273～291位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:6中第2～43位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:7中第112～167位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:8中第16～46位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:9中第1～28位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:10中第27～40位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:11中第63～91位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:13中第1～39位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:14中第21～32位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:15中第497～536位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；或SEQIDNO:16中第44～76位核苷酸序列或其互补的序列的核酸。在本专利技术的另一方面，提供一种由前述所述分离的核酸或核酸组合转变而来的核酸或核酸组合，对应于前述分离的核酸，其非修饰的胞嘧啶转变为T或U，而其修饰的CpG位点的胞嘧啶C不变。在另一优选例中，所述经转变而来的核酸或核酸组合由对应于前述分离的如SEQIDNO:1～16的核酸或核酸组合，经过亚硫酸氢盐或重亚硫酸氢盐处理转变而来。较佳地，包括：如SEQIDNO:18、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108所示核苷酸序列的核酸或核酸片段，或如SEQIDNO:19、25、31、37、43、49、55、61、67、73、79、85、91、97、103、109所示核苷酸序列的核酸或核酸片段；所述核酸片段包括至少1个(如包括2～80个，可以是2～80的正整数的任一数)修饰的CpG位点。较佳地，所述核酸片段具有约20～1392bp的长度，如长度30、40、50、60、70、80、100、150、200、300、500、1000bp。在另一优选例中，所述的核酸的片段中包括：SEQIDNO:18中第122～175位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:24中第35～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:30中第52～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；SEQIDNO:36中第3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的人核酸或其转变而来的核酸或核酸组合在制备肿瘤筛查、诊断、检测或预后评估的试剂或试剂盒中的用途；/n其中，所述的人核酸包括(1)SEQ ID NO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸或核酸组合，或含有所述序列中至少1个修饰的CpG位点的核酸或核酸组合；或(2)与(1)的核酸在序列上互补的核酸或核酸组合；/n其中，所述由人核酸转变而来的核酸为对应于(1)或(2)的核酸，其非修饰的胞嘧啶转变为T或U，而其修饰的CpG位点的胞嘧啶C不变。/n

【技术特征摘要】
1.分离的人核酸或其转变而来的核酸或核酸组合在制备肿瘤筛查、诊断、检测或预后评估的试剂或试剂盒中的用途；
其中，所述的人核酸包括(1)SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸或核酸组合，或含有所述序列中至少1个修饰的CpG位点的核酸或核酸组合；或(2)与(1)的核酸在序列上互补的核酸或核酸组合；
其中，所述由人核酸转变而来的核酸为对应于(1)或(2)的核酸，其非修饰的胞嘧啶转变为T或U，而其修饰的CpG位点的胞嘧啶C不变。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤的样本包括：组织样本、石蜡包埋样本、血液样本、胸腔积液样本以及肺泡灌洗液样本、腹水及灌洗液样本、胆汁样本、粪便样本、尿液样本、唾液样本、痰液样本、脑脊液样本、细胞涂片样本、宫颈刮片或刷片样本、组织及细胞活检样本。


3.分离的人核酸或核酸组合，其特征在于，包括：(1)SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸或核酸组合，或含有所述序列中至少1个修饰的CpG位点的核酸或核酸组合；或(2)与(1)的核酸在序列上互补的核酸或核酸组合。


4.如权利要求1～3任一所述，其特征在于，所述修饰的CpG位点包括发生5-醛甲基化修饰、5-羟甲基化修饰、5-甲基化修饰或5-羧甲基化修饰的CpG位点。


5.如权利要求3所述的分离的人核酸或核酸组合，其特征在于，包括选自下组的核酸或核酸组合：
SEQIDNO:1～16任一所示核苷酸序列的核酸；
SEQIDNO:1中第122～175位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:2中第35～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:3中第52～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:4中第33～70位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:5中第273～291位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:6中第2～43位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:7中第112～167位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:8中第16～46位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:9中第1～28位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:10中第27～40位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:11中第63～91位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:13中第1～39位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:14中第21～32位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:15中第497～536位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；或
SEQIDNO:16中第44～76位核苷酸序列或其互补的序列的核酸。


6.由权利要求3～5任一所述分离的核酸或核酸组合转变而来的核酸或核酸组合，对应于权利要求3或5的核酸或核酸组合，其非修饰的胞嘧啶转变为T或U，而其修饰的CpG位点的胞嘧啶C不变。


7.如权利要求6所述的核酸或核酸组合，其特征在于，包括选自下组的核酸或核酸组合：SEQIDNO:18、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108所示核苷酸序列的核酸或核酸片段，或SEQIDNO:19、25、31、37、43、49、55、61、67、73、79、85、91、97、103、109所示核苷酸序列的核酸或核酸片段；所述核酸片段包括至少1个修饰的CpG位点。


8.如权利要求7所述的核酸或核酸组合，其特征在于，所述的核酸片段中包括：
SEQIDNO:18中第122～175位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:24中第35～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:30中第52～65位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:36中第33～70位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:42中第273～291位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:48中第2～43位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:54中第112～167位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:60中第16～46位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:66中第1～28位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:72中第27～40位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:78中第63～91位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:90中第1～39位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:96中第21～32位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；
SEQIDNO:102中第497～536位核苷酸序列或其互补的序列的核酸；或
SEQIDNO:10...

【专利技术属性】
技术研发人员：李振艳，罗怀兵，
申请(专利权)人：上海奕谱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31