实时荧光定量PCR检测PD-L1基因表达量的方法、引物及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种实时荧光定量PCR检测PD‑L1基因表达量的方法、引物及试剂盒，所述方法，包括如下步骤：(1)同步抽提样本中的DNA及mRNA；(2)以待测mRNA为模板，通过特殊的反转录引物合成第一链cDNA；(3)分别采用反转录引物上的特异序列所对应的引物及参照基因对应的特异性引物，以反转录产物cDNA及参照基因DNA为模板，进行双通道实时荧光定量PCR扩增，同时扩增目的基因cDNA与参照基因，并以参照基因和目的基因序列连接构建的质粒为标准品，根据各自的标准曲线，计算样本中目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的表达水平，本发明专利技术同步修正各种实验操作误差，保证了结果的可靠性和可重复性。

Detection of PD-L1 gene expression by real-time fluorescence quantitative PCR: method, primer and kit

【技术实现步骤摘要】
实时荧光定量PCR检测PD-L1基因表达量的方法、引物及试剂盒
本专利技术涉及对PD-L1基因表达量进行检测的方法。
技术介绍
程序性细胞死亡因子配体1(processeddeath-1ligand1，PD-L1)又称为B7-H1、CD274，是由CD274基因编码的一个抑制性共刺激分子。PD-L1属I型跨膜糖蛋白，有290个氨基酸，包括胞外区、疏水跨膜区和尾部胞浆区。PD-L1蛋白则广泛表达于淋巴细胞，如活化T和B细胞、巨噬细胞、树突状细胞、胸腺内皮细胞等细胞以及心脏和胎盘等部位，同时也在多种肿瘤细胞及肿瘤微环境中的免疫细胞中高表达，如肺癌、食管癌、乳腺癌、淋巴瘤等，所述的PD-L1在文献：Dong,H.etal.(2002)NatMed8,793-800、hompson,R.H.etal.(2006)CancerRes66,3381-5.和Pardoll,D.M.(2012)NatRevCancer12,252-64.中有详细的报道。肿瘤细胞免疫逃逸是肿瘤躲避免疫系统清除的重要原因之一。表达于肿瘤细胞表面的PD-L1与PD-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.以待检测的PD-L1mRNA为模板的反转录引物基因序列，如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.以待检测的PD-L1mRNA为模板的反转录引物基因序列，如SEQIDNO:1所示。


2.一组以PD-L1反转录cDNA为模板的特异性引物基因序列，如SEQIDNO:2，和SEQIDNO:3所示。


3.一组以PD-L1反转录cDNA为模板的特异性探针，如SEQIDNO:4所示。


4.一组参照基因RPPH1的特异性引物基因序列，如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6，所示。


5.参照基因RPPH1的特异性探针，如SEQIDNO:7所示。


6.标准品的基因序列，如SEQIDNO:8所示。


7.实时荧光定量PCR检测PD-L1基因表达量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)反转录反应：同步提取样本中的RNA/DNA，以待检测的mRNA片段作为模板，通过权利要求1所述的反转录引物基因序列SEQIDNO:1在反转录酶的作用下，自模板的3’端向5’端进行延伸反应，合成第一链cDNA；
(2)实时荧光定量PCR扩增反应：分别采用cDNA对应的特异性引物SEQIDNO:2、SEQIDNO:3及参照基因对应的特异性引物SEQIDNO:4、SEQIDNO:5为扩增引物，SEQIDNO:4、SEQIDNO:7为...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐向荣，唐志君，张冀申，
申请(专利权)人：上海康派尼恩医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31