miRNA-196b在作为非小细胞肺癌分子标志物和治疗靶点中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miRNA‑196b在作为非小细胞肺癌分子标志物中的应用。本发明专利技术首次发现抑癌基因QKI‑5基因沉默能够促进miRNA‑196b在肺癌细胞中的表达，并且miR‑196b的表达能够促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和细胞周期进程通过抑制其靶基因GATA6和TSPAN12，从而提高动物体内肿瘤繁殖能力。

Mirna-196b as a molecular marker and therapeutic target of NSCLC

【技术实现步骤摘要】
miRNA-196b在作为非小细胞肺癌分子标志物和治疗靶点中的应用
本专利技术涉及分子生物学和肿瘤防治
，尤其涉及miRNA-196b在作为非小细胞肺癌分子标志物和治疗靶点中的应用。
技术介绍
在我国，肺癌的发病率和死亡率在恶性肿瘤中长期居于首位，其中以非小细胞肺癌(NSCLC)最为普遍，占发病总数的80％以上。随着新的化疗药物，靶向药物的问世和手术治疗技术的不断改进提高了部分肺癌患者的治疗效果，但5年生存率仍然仅为15％左右。其主要原因是肺癌的生物学特性十分复杂，恶性程度高，且由于早期症状的隐匿性，多数肺癌患者在确诊时已经属于晚期。因此，迫切需要找出敏感及特异性的早期肺癌生物标志物和有效的治疗靶点。RNA结合蛋白QKI在许多恶性肿瘤中被认为是抑癌基因。QKI是一个保守的STAR(signaltransductionandactivationofRNA)家族蛋白、有4个蛋白亚型(QKI-5,QKI-6,QKI-7和QKI-7b)，主要差别在于它们的C末端不同。非小细胞肺癌(NSCLC)中QKI-5是显性亚型，QKI-5的下调与早期肺癌患者的生存时间缩短密切相关，但其对于NSCLC的抑癌作用机制仍有待阐明。微小RNA(miRNA)在肿瘤中的表达具有组织特异性，不仅可以做为肿瘤标志物，还可以成为治疗靶点。这些具有组织特异性的miRNA表达在肿瘤的发展和转移过程中起至关重要的作用，调控这些具有致癌或抑癌功能的特异性miRNA表达可能可以成为治疗肺癌的新的辅助手段。基于此，本专利技术拟系统研究NSCLC中QKI-5相关的miRNA，并分析QKI-5与miRNA的相互作用在NSCLC发展和转移过程中的作用机制。同时深入研究QKI-5调控miRNA的分子机制和miRNA及其靶基因在肺癌发展和转移过程中的作用模式。本专利技术为NSCLC的早期诊断提供新的生物标志物，并为治疗提供有效的靶点。
技术实现思路
本专利技术提供了抑癌基因QKI-5调控的miRNA-196b和其靶基因在作为非小细胞肺癌分子标志物、治疗靶点以及制备或筛选治疗非小细胞肺癌药物中的应用，首次发现QKI-5基因沉默能够促进miR-196b在肺癌细胞中的表达。miRNA-196b的表达能够促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和细胞周期进程，通过抑制其靶基因GATA6和TSPAN12，从而提高动物体内肿瘤繁殖能力。具体技术方案如下：本专利技术提供了miRNA-196b在作为非小细胞肺癌分子标志物和治疗靶点中的应用。进一步地，所述miRNA-196b的检测试剂用于制备非小细胞肺癌早期诊断和预后诊断的体外诊断产品。本专利技术提供了miRNA-196b在制备或筛选治疗非小细胞肺癌药物中的应用。进一步地，所述治疗非小细胞肺癌药物为miRNA-196b的抑制剂，用于抑制非小细胞肺癌细胞的增殖，迁移和/或非小细胞肺癌细胞G1期向S期转换。本专利技术还提供了转录因子GATA6在作为非小细胞肺癌分子标志物、治疗靶点以及制备或筛选治疗非小细胞肺癌药物中的应用。进一步地，所述转录因子GATA6的检测试剂用于制备非小细胞肺癌早期诊断和预后诊断的体外诊断产品。本专利技术还提供了抑癌基因TSPAN12在作为非小细胞肺癌分子标志物、治疗靶点以及制备或筛选治疗非小细胞肺癌药物中的应用。进一步地，所述抑癌基因TSPAN12的检测试剂用于制备非小细胞肺癌早期诊断和预后诊断的体外诊断产品。进一步地，所述非小细胞肺癌为肺腺癌和/或肺鳞癌。miRNA-196b的RefSeq为MIMAT0001080；GATA6的RefSeq为NM_005257.5；TSPAN12的RefSeq为NM_012338.3。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术首次发现基因沉默抑癌基因QKI-5能够促进miR-196b在肺癌细胞中的表达，并且miR-196b的表达能够促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和细胞周期进程，从而提高动物体内肿瘤繁殖能力。(2)本专利技术还发现转录因子GATA6和TSPAN12是miR-196b的靶基因，GATA6和TSPAN12在非小细胞肺癌组织中的表达显著下调，并与miR-196b的表达水平呈负相关；基因沉默GATA6更倾向于促进非小细胞肺癌的细胞迁移，而基因沉默TSPAN12更倾向于提高细胞增殖以及促进细胞周期进程；动物实验显示，基因沉默TSPAN12显著促进动物体内肿瘤增殖，但基因沉默GATA6不影响动物体内肿瘤增殖。(3)本专利技术还发现miR-196b启动子领域的低甲基化涉及miR-196b在非小细胞肺癌的高表达。附图说明图1.A.实时荧光定量PCR检测肺癌组织和正常肺组织中QKI-5信使RNA的表达。配对的肺癌组织和正常肺组织各30例中提取总RNA，合成cDNA，然后采用Taqman基因表达分析试剂盒进行实时荧光定量PCR。用wilcoxon秩和检验比较肺癌组织和正常肺组织中QKI-5的表达水平。B.KaplanMeier法分析QKI表达水平与1882例非小细胞肺癌患者生存期间之间的关系。C.实时荧光定量PCR检测肺癌细胞株和正常肺细胞株中QKI-5信使RNA的表达。D.QKI-5基因沉默48小时后蛋白质印迹法检测QKI-5蛋白表达水平；siQKI1和siQKI2表示靶向QKI-5的不同的siRNA，siCTL表示不靶向任何基因的对照siRNA。QKI-5基因沉默对H1299肺癌细胞增殖活性(E)的影响；siQKI1和siQKI2表示靶向QKI-5的不同的siRNA，siCTL表示不靶向任何基因的对照siRNA。QKI-5基因沉默对H1299肺癌细胞集落形成能力的影响(F)；siQKI1和siQKI2表示靶向QKI-5的不同的siRNA，siCTL表示不靶向任何基因的对照siRNA。图2.A.从NanoStringmiRNA表达谱芯片实验中发现的10个显著差异表达miRNA；siCTL表示不靶向任何基因的对照siRNA，siQKI5表示靶向QKI-5的siRNA，相同于上述的siQKI1；B.实时荧光定量PCR检测H1299QKI5基因沉默细胞和对照组细胞的miR-196表达水平；H1299/siQKI5表示转染siQKI5的H1299细胞，H1299/siCont表示转染siCTL的H1299细胞。t检验比较实验组和对照组之间的表达差异。C-D.皮尔逊相关分析分析肺腺癌(C)和肺鳞癌(D)中QKI5与miR-196b表达相关。基因表达原始数据来自TCGA数据库。图3.A-B.分析miR-196b在468肺腺癌组织和46邻近正常肺组织(A)，和198肺鳞癌和40邻近正常肺组织(B)的表达水平；lungADC表示肺腺癌，lungSSC表示肺鳞癌，NAT表示邻近正常肺组织。miRNA表达原始数据来自TCGA数据库。t检验比较肺癌组织与邻近正常肺组织之间miR-196b的表达差异。C.miR-196b在70对NSCLC组织及其配对的NATs中的表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miRNA-196b在作为非小细胞肺癌分子标志物和治疗靶点中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.miRNA-196b在作为非小细胞肺癌分子标志物和治疗靶点中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA-196b的检测试剂用于制备非小细胞肺癌早期诊断和预后诊断的体外诊断产品。


3.miRNA-196b在制备或筛选治疗非小细胞肺癌药物中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述治疗非小细胞肺癌药物为miRNA-196b的抑制剂，用于抑制非小细胞肺癌细胞的增殖，迁移和/或非小细胞肺癌细胞G1期向S期转换。


5.转录因子GATA6在作为非小细胞肺癌分子标志物、治疗靶...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔日，孟威，竺王玉，梁广，黄翔杰，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33