一种免仪器酶联免疫吸附测定方法技术

技术编号:21684175 阅读:68 留言:0更新日期:2019-07-24 14:10
本发明专利技术公开了一种免仪器酶联免疫吸附测定方法。该方法通过在96孔板中进行抗原‑抗体特异性免疫反应,捕获样本中的分析物抗原或抗体,随后引入纳米颗粒催化氯金酸‑还原剂之间生成纳米金的反应,并使用手表或手机记录混合溶液呈现红色所需的时间,该时间与样品中目标抗原或抗体的浓度呈负相关,即完成免仪器酶联免疫吸附测定。本发明专利技术使用随处可见的手表或手机进行信号读取,降低了定量分析的成本。它还协同使用脂质体包裹大量纳米颗粒以及它们对氯金酸被还原剂还原生成纳米金反应的高效催化活性,放大单个抗原‑抗体特异性结合反应的响应信号,提高了检测灵敏度。

An instrument-free enzyme-linked immunosorbent assay

【技术实现步骤摘要】
一种免仪器酶联免疫吸附测定方法
本专利技术属于酶联免疫吸附测定(Enzyme-LinkedImmune-SorbentAssay,简写为ELISA)
,具体涉及一种免仪器酶联免疫吸附测定方法。
技术介绍
酶联免疫吸附测定(ELISA)方法是以免疫学反应为基础,将抗体、抗原的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种具有高特异性和高灵敏度的实验技术。根据样品中待测目标物的种类及性质不同,可以设计出各种不同类型的ELISA方法,包括抗体夹心法、抗原夹心法、竞争法、间接法及捕获包被法等。自1971瑞典斯德哥尔摩大学的Engvall和Perlmann首次建立酶联免疫吸附测定方法,经过40余年的不断发展和完善,ELISA方法已经被广泛应用于临床诊断、医学研究、食品安全、环境监测等诸多领域。目前传统的ELISA方法主要借助酶标仪、荧光仪等光学分析仪器实现目标物的定量检测。但是,这些光学仪器价格较为昂贵且体积庞大,导致传统ELISA方法的分析成本较高,同时不能用于现场分析和即时检测(Point-of-CareTesting,POCT)。此外,在一些重要的应用方面,例如,疾病的早期诊断,还本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免仪器酶联免疫吸附测定方法,其特征在于具体步骤为:步骤一,在96孔板中固定抗体或抗原;步骤二,封闭96孔板的剩余活性位点;步骤三,依次加入样品溶液、生物素标记的抗体或二抗、链霉亲和素标记的包裹了具有催化活性的纳米颗粒的脂质体探针;步骤四,超声作用下裂解脂质体以释放催化活性纳米颗粒,随后加入氯金酸和还原剂的混合水溶液,在催化活性纳米颗粒的催化作用下,氯金酸被还原剂快速还原生成纳米金,通过目视观测溶液颜色变化,同时使用手表或手机记录自加入氯金酸和还原剂的混合水溶液到混合溶液完全呈现红色所需的时间,该时间与样品中目标抗原或抗体的浓度呈负相关;所述步骤一中的抗体或抗原在96孔板中的固定方式为物...

【技术特征摘要】
1.一种免仪器酶联免疫吸附测定方法,其特征在于具体步骤为:步骤一,在96孔板中固定抗体或抗原;步骤二,封闭96孔板的剩余活性位点;步骤三,依次加入样品溶液、生物素标记的抗体或二抗、链霉亲和素标记的包裹了具有催化活性的纳米颗粒的脂质体探针;步骤四,超声作用下裂解脂质体以释放催化活性纳米颗粒,随后加入氯金酸和还原剂的混合水溶液,在催化活性纳米颗粒的催化作用下,氯金酸被还原剂快速还原生成纳米金,通过目视观测溶液颜色变化,同时使用手表或手机记录自加入氯金酸和还原剂的混合水溶液到混合溶液完全呈现红色所需的时间,该时间与样品中目标抗原或抗体的浓度呈负相关;所述步骤一中的抗体或抗原在96孔板中的固定方式为物理吸附和共价结合中的一种;所述步骤二中的96孔板的剩余活性位点的封闭过程通过加入封闭试剂溶液来实现,封闭试剂在96孔板中的固定方式与抗体或抗原在96孔板...

【专利技术属性】
技术研发人员:张云刘召应聂瑾芳黄锦坤
申请(专利权)人:桂林理工大学
类型:发明
国别省市:广西,45

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