The invention provides a dual qPCR method for rapid detection of Chlamydia trachomatis and primers and probes, including the following steps: (1) preliminary preparation procedure; (2) nucleic acid extraction and purification; (3) primer/probe design, synthesis and labeling; (4) qPCR amplification and result judgment; (5) lower detection limit and amplification linear range test; (6) diagnostic sensitivity and specificity calculation; (7) statistical method; and the invention. The advantages of this method are as follows: the detection limit is as low as 2 copies/PCR, the linear range of amplification is 1.0 *102_1.0 *108 copies/mL, and the sensitivity and specificity for the diagnosis of Chlamydia trachomatis are 100.0% (134/134) and 99.3% (1142/1150), respectively, from sample processing to report results less than 2.0 hours; the patented method is simple, rapid, sensitive and specific, which can not only improve Chlamydia trachomatis. The diagnostic ability of infection can also achieve rapid detection, and gain time for early and precise treatment.
【技术实现步骤摘要】
快速检测沙眼衣原体双重qPCR方法及引物和探针
本专利技术涉及一种沙眼衣原体双重qPCR方法,尤其涉及一种快速检测沙眼衣原体双重qPCR方法及引物和探针。
技术介绍
沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,CT)是一种专性胞内寄生病原,不同的血清型可以造成不同的疾病和并发症,包括生殖道感染(血清型D-K),沙眼(血清型A-C)和性病淋巴肉芽肿(血清型L1-L3)[1-3]。作为最常见的性传播病原,沙眼衣原体可以引起严重的盆腔炎、异位妊娠和输卵管性不孕[4],给家庭和社会带来巨大的压力和医疗消耗。每年全球范围内新增沙眼衣原体泌尿生殖道感染病例约9200万例,大约50%的男性感染者和70%的女性感染者不表现出临床症状,造成大量的沙眼衣原体感染者得不及时诊断和正规治疗[5],从而成为传染源继续传播疾病。细胞培养因其良好的特异性而被认为是沙眼衣原体检测的金标准[6]。但由于其成本高、耗时长、技术难度大、灵敏度低,已不再作为沙眼衣原体的常规检测手段[7]。目前许多替代的血清学技术,如酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫胶体金技术(ICGT)可以大大缩短检测时间,但不适用于诊断急性CT感染[8]。核酸扩增试验(NAATs)以其高灵敏度、高特异性和快速的特点成为临床微生物实验室最推荐的沙眼衣原体感染诊断方法[9,10]。事实上,实时荧光定量PCR(quantitativeReal-timePCR,qPCR)和多重qPCR(multiplexqPCR)等现代PCR技术的出现可以将报告时间缩短至2小时内[11,12]。然而,真正可以用于沙眼衣原体检测的 ...
【技术保护点】
1.快速检测沙眼衣原体双重qPCR引物和探针,采用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real‑time PCR,qPCR),其特征在于:沙眼衣原体cryptic plasmid和23S rRNA基因检测引物与探针的序列与标记表为:
【技术特征摘要】
1.快速检测沙眼衣原体双重qPCR引物和探针,采用实时荧光定量PCR技术(QuantitativeReal-timePCR,qPCR),其特征在于:沙眼衣原体crypticplasmid和23SrRNA基因检测引物与探针的序列与标记表为:2.根据权利要求1所述的快速检测沙眼衣原体双重qPCR方法,其特征在于:同时检测沙眼衣原体隐性质粒的nt:1755-1880片段和23SrRNA基因的nt:51-169片段,所用引物和探针是经过我国流行分布株筛选后确定,避开变异区或突变点设计而成。3.根据权利要求1所述的快速检测沙眼衣原体双重qPCR试剂,其特征在于:(1)多重qPCR体系:2×PlatinumTMMultiplexPCRM...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘和录,马彩凤,杜纪坤,窦宇红,何维娜,袁晓雪,李玉霞,赵丽君,刘平,
申请(专利权)人:深圳市宝安区沙井人民医院,刘和录,
类型:发明
国别省市:广东,44
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