一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物、试剂盒与方法技术

本发明专利技术公开了一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物、试剂盒与方法。本发明专利技术针对杀白细胞毒素的特异性靶序列pvl保守区的特异区域设计了一对检测引物，为靶点pvl检测引物Ft和靶点pvl检测引物Bt，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示，该引物保证了检测结果的可靠性。本发明专利技术中还提供了一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的试剂盒，其具有灵敏度高、特异性好，操作简便快速，结果准确可靠，检测成本低等优点。本发明专利技术利用该引物或试剂盒对待测样品进行聚合酶螺旋扩增反应，可通过显色剂对结果直接进行肉眼判读，快速、准确的检测出待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素。

A Primer, Kit and Method for Detecting Leukocyte Killing Toxin of Staphylococcus aureus by PSR

The invention discloses a PSR primer, a kit and a method for detecting leucocyte-killing toxin of Staphylococcus aureus. The present invention designs a pair of detection primers for the specific target sequence PVL conservative region of leucocyte-killing toxin, Ft for target PVL detection primer and Bt for target PVL detection primer, whose nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO.1-2, which ensures the reliability of detection results. The invention also provides a PSR kit for detecting Staphylococcus aureus leucopenicide toxin, which has the advantages of high sensitivity, good specificity, simple and fast operation, accurate and reliable results, low detection cost, etc. The method uses the primer or kit to treat the tested sample for polymerase helix amplification reaction. The result can be directly interpreted by the naked eye through the color reagent, and the leucocyte killing toxin of Staphylococcus aureus can be quickly and accurately detected in the tested sample.

【技术实现步骤摘要】
一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物、试剂盒与方法
本专利技术属于生物
，特别涉及一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物、试剂盒与方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌是医院和社区获得性感染的主要病原菌之一，该病原菌的致病性同其它多种毒素因子携带密切相关。而杀白细胞毒素(panton—valentineleukocidin，PVL)是金葡菌的重要毒力蛋白。杀白细胞毒素是金葡菌产生的一种外毒素，可以特异性地吸附作用于白细胞学，改变细胞的通透性，造成大量白细胞损伤，从而损害机体的免疫系统。杀白细胞毒素阳性金葡菌感染会导致皮肤软组织反复脓肿感染，以及坏死性肺炎等疾病。因此杀白细胞毒素毒力基因阳性菌株的致病性不容忽视。目前杀白细胞毒素的检测主要依靠分子生物学方法，如实时定量PCR，由于此类方法要求特殊仪器设备且繁琐费时成本高，在我国比较多的临床实验室尤其是社区医院，杀白细胞毒素的检测多使用PCR进行。但该方法耗时长根据实验现象判断鉴定结果，很难满足快速鉴定的需要。而免疫学检测方法，如ELISA，免疫层析等，灵敏度高，但是操作过程复杂，成本偏高，不宜于大规模检测样品。目前应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物，其特征在于：包括靶点pvl检测引物Ft和靶点pvl检测引物Bt，其核苷酸序列如下所示：靶点pvl检测引物Ft:5’‑AGTTCTATAGCTTTCTTGTTAACGGCTTATCAGGT‑3’；靶点pvl检测引物Bt：5’‑TGTTCTTTCGATATCTTGATGTGCTTCAACATCCC‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物，其特征在于：包括靶点pvl检测引物Ft和靶点pvl检测引物Bt，其核苷酸序列如下所示：靶点pvl检测引物Ft:5’-AGTTCTATAGCTTTCTTGTTAACGGCTTATCAGGT-3’；靶点pvl检测引物Bt：5’-TGTTCTTTCGATATCTTGATGTGCTTCAACATCCC-3’。2.一种PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物。3.根据权利要求2所述的PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的试剂盒，其特征在于：所述的PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的引物中靶点pvl检测引物Ft和靶点pvl检测引物Bt的浓度均为50μM。4.根据权利要求2或3所述的PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的试剂盒，其特征在于，还包括如下组分：A、2×反应缓冲液：40.0mM的Tris-HCl，20.0mM的硫酸铵，20.0mM的氯化钾，16.0mM的硫酸镁，0.2％(v/v)的Tween20，1.4M的甜菜碱，10.0mM的dNTPs；B、BstDNA聚合酶；C、钙黄绿素和氯化锰的混合溶液。5.根据权利要求4所述的PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的试剂盒，其特征在于：组分B中所述的BstDNA聚合酶为浓度8U/μL的BstDNA聚合酶水溶液。6.根据权利要求4所述的PSR检测金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素的试剂盒，其特征在于，所述的黄绿素和氯化锰的混合溶液通过如下方法制备得到：(i)将钙黄绿素溶于二甲基亚砜中，配制终浓度为50μM的钙黄绿素溶液；将氯化锰溶于水中，配制...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽艳，徐振波，陆泽荣，徐行勇，刘君彦，陈玲，苏健裕，李冰，李琳，李晓玺，张霞，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44