一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法，包括下列步骤：1)采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中6种常见病原菌的DNA；2)在含有上述细菌DNA的反应体系中，加入一种可以同时检测6种细菌特异性序列的PCR引物系统进行扩增；3)配制2％琼脂糖凝胶进行凝胶电泳，电压：120V，时间：45min，随后进行电泳紫外成像。该方法基于多重聚合酶链式反应技术，可实现同时检测大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓隐秘杆菌、乳房链球菌、奇异变形杆菌和绿脓杆菌6种细菌，较测序、单重PCR等技术操作更简便、成本更低、且有较高的灵敏度和特异性，极大的缩短了临床细菌检测鉴定周期。

A Rapid Method for Detecting Pathogens in Dairy Cow Endometritis

The invention discloses a method for rapid detection of pathogenic bacteria in dairy cow endometritis, which comprises the following steps: 1) extracting DNA of six common pathogenic bacteria from uterine secretions cultured overnight by kit method; 2) adding a PCR primer system to the reaction system containing the above bacterial DNA for amplification; 3) preparing 2% agarose; Gel electrophoresis, voltage: 120V, time: 45min, followed by electrophoresis ultraviolet imaging. Based on multiplex polymerase chain reaction (MPCR), this method can simultaneously detect six kinds of bacteria: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Cryptococcus pyogenes, Streptococcus mammae, Proteus mirabilis and Pseudomonas aeruginosa. Compared with sequencing and single-PCR, this method is simpler, cheaper, more sensitive and specific, and greatly shortens the detection and identification cycle of clinical bacteria.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法
本专利技术属于微生物检测领域，具体涉及一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法。
技术介绍
奶牛子宫内膜炎(endometritis)是奶牛由于病原微生物感染等因素引起子宫内膜发生炎症反应，从而造成子宫内膜层出现病理变化的一种疾病。此病大多数发生在奶牛分娩或产后期间，是奶牛最为常见的繁殖障碍性疾病，由子宫内膜炎引起的不孕症可占疾病性不孕的60.0％-70.0％。该病可导致患牛屡配不孕，甚至死亡，对奶牛生殖系统带来长期不可逆转的影响，由此带来的饲养成本增加、泌乳量下降甚至淘汰率升高等问题，给奶牛场带来严重的经济损失。因此实现快速灵敏的分析鉴定,是控制疾病的首要选择。研究调查表明奶牛子宫内膜炎感染菌株中，细菌占有大部分的比例。在这些病原菌中，大肠埃希菌、化脓隐秘杆菌和链球菌占绝大多数，其次为葡萄球菌、奇异变形杆菌和铜绿假单胞菌。目前临床上奶牛子宫内膜炎细菌感染状况，主要依靠实验室传统细菌分离方法，通常情况下，进行样品采集后，先将样品转种于血平板，进行细菌分离纯化，然后做鉴定和药敏试验，一般细菌的分离鉴定结果需要一周左右，不能满足临床细菌快速检测需本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法，其特征在于，具体包括下列步骤：1)细菌基因组DNA的提取：采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中的大肠埃希菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)、乳房链球菌(S.uberis)、奇异变形杆菌(P.mirabilis)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)的DNA；2)多重PCR：在含有上述细菌DNA的反应体系中，加入一种可以同时检测6种细菌特异性序列的PCR引物系统进行扩增；3)电泳紫外成像：配制2％琼脂糖凝胶进行凝胶电泳，电压：120V，时间：45min，随后进行电泳紫外成像；所述PCR...

【技术特征摘要】
1.一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法，其特征在于，具体包括下列步骤：1)细菌基因组DNA的提取：采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中的大肠埃希菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)、乳房链球菌(S.uberis)、奇异变形杆菌(P.mirabilis)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)的DNA；2)多重PCR：在含有上述细菌DNA的反应体系中，加入一种可以同时检测6种细菌特异性序列的PCR引物系统进行扩增；3)电泳紫外成像：配制2％琼脂糖凝胶进行凝胶电泳，电压：120V，时间：45min，随后进行电泳紫外成像；所述PCR引物系统包括：1)扩增大肠埃希菌(E.coli)特异性序列的引物SEQIDNo：1和SEQIDNo：2...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勤凡，王宁宁，王晶，范玉堂，许信刚，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61