一种同时检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的方法技术

本发明专利技术公开了一组基于环介导等温扩增技术检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的引物，分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的fimY基因、志贺氏菌的ipaH基因进行扩增。利用这组引物进一步构建了金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的检测方法和试剂盒。本发明专利技术构建的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌检测方法及其试剂盒用于这三种菌的扩增和检测分析，特异性好，灵敏度高，可检测多个细菌的混合样品，进一步通过酶切反应可以区分不同细菌；由于本反应在61～66℃均可进行，进行过程不需要变温，因此在条件简陋的实验室以及发展中国家都可以得到推广。

A Method for Simultaneous Detection of Staphylococcus aureus, Salmonella and Shigella

The invention discloses a set of primers for detecting Staphylococcus aureus, Salmonella and Shigella based on loop-mediated isothermal amplification technology, and amplifies NUC gene of Staphylococcus aureus, fimY gene of Salmonella and ipaH gene of Shigella respectively. Using these primers, the detection methods and kits for Staphylococcus aureus, Salmonella and Shigella were further constructed. The detection method of Staphylococcus aureus, Salmonella and Shigella and its kit constructed by the invention can be used for the amplification and detection analysis of these three bacteria, with good specificity and high sensitivity, and can detect mixed samples of multiple bacteria, and further differentiate different bacteria by enzyme digestion reaction; since the reaction can be carried out at 61-66 (?) C, and the process does not need to change temperature, so the method is suitable for the detection and analysis of these three bacteria. Simple laboratories and developing countries can be promoted.

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的方法
本专利技术涉及肺微生物检测
，更具体地，涉及一种同时检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌在全球都被作为食源性微生物重点监控对象。在我国发布的果、蔬汁饮料卫生标准[GB19297-2003]中，明确规定：致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌)不得检出。对食源性致病菌的控制关键在于对食品的严格监控，快速、灵敏、准确的检测方法是确保监控有效性的基础，对检验检疫及疾病控制都有重要作用。目前常规检测采用传统培养方法，每种病菌需进行单独的培养，单独进行检测，工作量大；而使用荧光定量单个检测方法逐个操作，配置反应体系数目多，要消耗大量的试剂、人力、物力和时间；免疫学方法检测需要寻找高灵敏度和特异性的抗原，且试剂昂贵，操作复杂。因此需要一种简单便捷，高效准确的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌现有检测技术的不足，提供利用多重环介导等温扩增技术检测这三种食源性病原菌的方面。该方法不仅能够有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组基于环介导等温扩增技术同时检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的引物组，其特征在于，包括分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的fimY基因、志贺氏菌的ipaH基因进行扩增的引物。

【技术特征摘要】
2018.08.29 CN 20181099814911.一组基于环介导等温扩增技术同时检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的引物组，其特征在于，包括分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的fimY基因、志贺氏菌的ipaH基因进行扩增的引物。2.根据权利要求1所述引物组，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1～12所示，或为SEQIDNO：1～12所示的核苷酸序列的互补序列。3.权利要求1所述引物组在检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌或制备检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的试剂盒中的应用。4.一种同时检测待测样品金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及志贺氏菌的方法，其特征在于，以待测样品的核酸为模板，利用权利要求1或2所述引物组进行环介导等温扩增，根据扩增产物判断待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和/或志贺氏菌。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，环介导等温扩增的条件为反应温度为61...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐匆，罗鸿斌，李艳芳，罗华建，黄皓，梁卫驱，胡珊，胡楚维，陈仕丽，钟鸣，
申请(专利权)人：东莞市农业科学研究中心，东莞理工学院，
类型：发明
国别省市：广东,44