一种白色念珠菌细胞壁甘露聚糖的制备方法技术

本发明专利技术涉及真菌的多糖制备领域。具体而言，本发明专利技术涉及制备白色念珠菌细胞壁的甘露聚糖。本发明专利技术提供了一种利用十六烷基三甲基溴化铵来制备白色念珠菌细胞壁甘露聚糖的方法。白色念珠菌细胞经过在柠檬酸盐溶液中高温高压处理后，上清液在甲醇中沉淀得甘露聚糖粗品，接下来使用十六烷基三甲基溴化铵先沉淀杂蛋白及核酸，然后与甘露聚糖络合形成沉淀，络合物沉淀用乙酸溶解后，用乙醇沉淀多糖，得到纯化甘露聚糖。本发明专利技术中制备白色念珠菌细胞壁甘露聚糖的方法，不需要凝胶层析过程，制备工艺简单，利于甘露聚糖的工艺化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及真菌的多糖制备领域。具体而言，本专利技术涉及制备白色念珠菌细胞壁的甘露聚糖。
技术介绍
白色念珠菌是一种条件致病真菌，人体在正常情况下不会受到白色念珠菌的感染，只有机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调时，可能感染白色念珠菌，引起深部感染，甚至全身散播性感染。甘露聚糖是白色念珠菌细胞壁的主要抗原成分。对于白色念珠菌感染的诊断，除了传统的培养方法，测定血清中白色念珠菌甘露聚糖抗 原，逐渐成为白色念珠菌早期诊断的简单、快捷的方法。而测定抗原作为白色念珠菌感染诊断方法的关键，便是得到制备单克隆抗体的免疫原甘露聚糖。国内对于白色念珠菌细胞壁甘露聚糖制备的研究，主要是林飞卿等人所采用的热酚法和热甲酰胺法(林飞卿等，中国免疫学杂志，1987年，第3卷，第5期，288-292页)。热酚法简述如下1)除蛋白向白念菌菌粉中加入含45%苯酚的1/15M pH7. 2的磷酸盐缓冲液，匀浆透析过夜除去苯酚，离心得到沉淀物，沉淀用无水乙醇洗尽苯酚，加少量水，100°C水浴抽提I小时；离心得到沉淀物，加10倍体积的3% NaOH，在饱和氮气流下，10(TC水浴抽提6小时；再进行离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白色念珠菌细胞壁甘露聚糖的制备方法，包括以下步骤：(a)白色念珠菌细胞经过柠檬酸盐的处理后，上清液加入到甲醇中，静置产生沉淀，离心分离沉淀即为粗制甘露聚糖；(b)将(a)步骤得到粗制甘露聚糖溶于去离子水，加入十六烷基三甲基溴化铵，产生沉淀，离心，上清液加入硼酸溶液；(c)步骤(b)所得混液用氢氧化钠调节pH值至碱性，生成十六烷基三甲基溴化铵?甘露聚糖络合物沉淀，收集沉淀；(d)用乙酸钠洗涤步骤(c)所得沉淀，沉淀在乙酸中溶解后，所得溶液中加入乙醇，从而形成甘露聚糖沉淀；(e)步骤(d)所得沉淀用乙酸乙醇溶液洗涤后，溶于水，用氢氧化钠调节pH值至中性，蒸馏水中透析，冻干，即为纯化甘露聚糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王东东，何永胜，周泽奇，李宁，粟艳，史东东，刘春龙，
申请(专利权)人：天津贻诺琦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：