本发明专利技术提供了用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的ITS引物，其特征在于所述引物为：IT?S-1：5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′ITS-2：5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′。本发明专利技术的有益效果主要体现在：本发明专利技术提供了用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的ITS引物，为口腔扁平苔藓白色念珠菌基因分型提供了基础，可真正从基因水平来为临床上制定及时有效的防治措施提供可靠依据，以及为念珠菌分子流行病学的深入研究奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的特异性引物及其应用。
技术介绍
扁平苔藓(lichen planus, LP)是一种伴有慢性浅表性炎症的皮肤黏膜角化异常性疾病，其病因复杂，至今尚不明确，并且病程长，有一定的癌变率(0.4 5%)，对患者造成很大的困扰。口腔扁平苔藓(OLP)的典型病理表现为上皮过度不全角化、基底层液化变性以及固有层有密集的淋巴细胞呈带状浸润。在口腔扁平苔藓的病因学的研究中，念珠菌与扁平苔藓的关系很早就得到国内外学者的关注，但至今尚不能给念珠菌是共生菌还是始动致病菌下结论。对口腔扁平苔藓的念珠菌进行明确的研究，从而有效地预防和治疗口腔粘膜病，首先需要准确的菌种鉴定分类的方法，特别是菌株间关系的分析判断。传统的表型分型虽具有一定的研究价值，但存在鉴别能力弱、重复性差、不稳定等局限性。随着现代生物分子技术的快速发展，从基因水平对念珠菌进行分型已成为可能和必然。基因分型的目的在于追踪口腔扁平苔藓中念珠菌的感染是来自患者自身、还是外源性的感染；明确是否存在特定菌株与扁平苔藓之间的相关性；了解念珠菌的感染除了与宿主全身及局部易感因素有关外，其本身的遗传型是否与感染有关，是否存在易感菌株或易感基因，从而探求口腔扁平苔藓的发病和进展机理。ITS 指核糖体 DNA(rDNA)的内转录间隔区(internal transcribedspacer region, ITS)。念珠菌的rDNA是一个串联排列的重复序列，包括18S、5. 8S和26S。而分隔这些基因亚单位的是ITS，称为非编码区。ITS1-ITS2部分进化较快，具有种间特异性和种内保守性，可以将菌株鉴定到种或亚种。
技术实现思路
本专利技术目的是基于PCR ITS1-ITS2基因分型方法，提供一种用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的ITS引物及其应用。本专利技术采用的技术方案是用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的ITS引物，其特征在于所述引物为IT S-I :5，-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3‘ITS-2 :5， -GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3，。本专利技术还涉及所述的引物在扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列中的应用，使用本专利技术引物扩增出来的特征序列，可进一步作为基因分型的研究对象。具体的，所述应用为以口腔扁平苔藓病人含漱液DNA为模板，以ITS-l、ITS-2为引物进行PCR扩增，得到口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列，可根据所得到的特征序列，进一步对待测样品进行基因分型。根据扩增出的特征序列，可判断其是否属于II型、IIIa型或Inb型中的一种。各基因型特征序列如下II 型5' -TGGAAGTAAAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACA GTATTCTTTTGCCAGCGCTTAACTGCGCGGCGAAAAACCTTACACACAGTGTCTTTTTGATACAGAACTCTTGCTTT GGTTTGGCCTAGAGATAGGTTGGGCCAGAGGTTTAACAAAACACAATTTAATTATTTTTACAGTTAGTCAAATTTTG AATTAATCTTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCAA-3'；IIIa 型5‘ -GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTG ATTTGCTTAATTGCACCACATGTGTTTTTCTTTGAAACAAACTTGCTTTGGCGGTGGGCCCAGCCTGCCGCCAGAGG TCTAAACTTACAACCAATTTTTTATCAACTTGTCACACCAGATTATTACTTAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGAT CTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCCA-3‘；IIIb 型5' -TGGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGAC TATTAGTAATAATCTGGTGTGACAAGTTGATAAAAAATTGGTTGTAAGTTTAGACCTCTGGCGGCAGGCTGGGCCCA CCGCCAAAGCAAGTTTGTTTCAAAGAAAAACACATGTGGTGCAATTAAGCAAATCAGTAATGATCCTTCCGCAGGTT CACCTACGGAAACCTTGTTACGACTTTTACTTCCCA-3‘。若通过基因诊断确定基因型为上述之一，采用特定药物针对性干预白念的局部治疗，可缩短疗程至1周左右(通常一般疗程为2 3周)，为临床诊断提供了基础。本专利技术的有益效果主要体现在本专利技术提供了用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的ITS引物，为口腔扁平苔藓白色念珠菌基因分型提供了基础，可真正从基因水平来为临床上制定及时有效的防治措施提供可靠依据，以及为念珠菌分子流行病学的深入研究奠定基础。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此实施例1 1材料与方法1. 1研究对象病例组白色念珠菌分离株来源于2010. 2. 16 2010. 6. 1就诊于浙江大学第二附属医院口腔科及黏膜病专科并确诊为OLP的患者。OLP患者的诊断依据其典型的临床表现以及实验室检查确诊，主要的病损表现为大多左右对称，由粟粒大小的白色或灰白色丘疹组成的线条构成网状、环状、树枝状、斑块状病损，病变区域与正常粘膜之间无清晰的界限， 白色线条间及四周可为正常粘膜或有充血、糜烂，甚或溃疡。健康对照组均无口腔粘膜疾病，无任何口腔粘膜病的临床症状、体征及病史。研究对象的排除条件为①全口义齿配戴者；②长期或近期(3月内)使用广谱抗菌药物者；③近期(3月内)使用抗真菌药物者；④长期使用肾上腺皮质激素或其他免疫抑制剂者；⑤患有糖尿病、甲状腺功能低下、免疫缺陷等系统性疾病者。本实验所有参加对象均签署知情同意书。1. 2实验设备1.2. 1隔水式恒温培养箱(GNP-9050型，上海，中国)41.2.2API 20C AUX 念珠菌鉴定系统(Biomerieux，France)1. 2. 3 冰箱(-4°C，-20"C ) (SIEMENS,中国)1. 2. 4 移液枪(Gilson，France)1. 2. 5 紫外分光光度计(Parmacia biotech, USA)1. 2. 6PCR 仪(BIOMETRA，GERMANY)1. 2. 7 紫外成像仪(KAISER，GERMANY)1. 3实验试剂1. 3. 1真菌基因组DNA提取试剂盒(biof lux，China)1. 3. 2Primer ITS-I (5，-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3，)Primer ITS-2 :(5， -GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3，)(Invitrogen, China)1.3. 3Primer STAR HS DNA Polymerase (TaKaRa, China)1.3.4100bp DNA ladde本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．用于扩增口腔扁平苔藓白色念珠菌特征序列的ＩＴＳ引物，其特征在于所述引物为：ＩＴ Ｓ－１：５’－ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ－３’ＩＴＳ－２：５’－ＧＣＴＧＣＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧＣ－３’。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何虹，杨海萍，董研，范艳，赵丹萍，黄剑奇，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86
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