烟曲霉半乳甘露聚糖抗原的提取与纯化方法技术

烟曲霉半乳甘露聚糖抗原的提取与纯化方法。本发明专利技术涉及真菌的多糖制备领域。具体而言，本发明专利技术涉及制备烟曲霉菌分泌型的半乳甘露聚糖。本发明专利技术提供了一种醇沉和脱色、超滤联用来制备烟曲霉菌分泌型的半乳甘露聚糖的方法。烟曲霉分泌到胞外的半乳甘露聚糖经醇处理后，得到沉淀即半乳甘露聚糖粗提物，然后使用活性炭对粗提物进行脱色处理，然后用超滤的方法对脱色后的多糖提取液进行纯化，最终得到纯化的半乳甘露聚糖纯品。本发明专利技术中制备烟曲霉菌分泌型的半乳甘露聚糖的方法，不需要酸水解、柱层析等过程，制备工艺简单，质量易控制，有利于半乳甘露聚糖的工艺化生产及进行抗体制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诊断用抗体制备领域,特别是用于半乳甘露聚糖(Galactomannan)的抗体制备过程中免疫动物所需抗原的提取及纯化。
技术介绍
近年来，随着抗生素的大量滥用和免疫抑制剂在临床的广泛使用，侵袭性深部真菌感染的发病率和病死率越来越高。其中，曲霉特别是烟曲霉(Aspergillus fumigatus)已经逐渐成为临床上ー种重要的致病真菌。目前侵袭性曲霉菌感染检测的金标准是无菌体液培养和组织活检。然而侵袭性曲霉感染病情进展很快，传统的分离培养的方法阳性率低、周期长，往往造成漏诊、误诊，致使贻误病情。因此，检测烟曲霉抗原是目前临床公认的快速早期诊断烟曲霉菌感染的有效方法。烟曲霉分泌性抗原为半乳甘露聚糖抗原，在感染早期可从患者血液中发现。基于此，从烟曲霉菌中分离提取其半乳甘露聚糖抗原并制备单克隆抗体是实现烟曲霉感染早期免疫学诊断的重要·策略。本专利技术建立了 ー种可用于免疫动物实现抗体制备的半乳甘露聚糖抗原提取与纯化方法。烟曲霉分泌到胞外的半乳甘露聚糖抗原为ー种多糖，一般从该菌的培养液中提取得到。国内对半乳甘露聚糖抗原提取纯化的研究不多，目前从培养液中分离提纯半乳甘露聚糖抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟曲霉分泌型半乳甘露聚糖的制备与纯化方法，包括以下步骤：(a)烟曲霉菌液体培养液经过高压灭菌处理后，过滤的方法除去菌体；(b)向(a)步骤得到菌液上清中，加入无水乙醇或其他浓度的甲醇或乙醇溶液，产生沉淀，离心，沉淀用乙醇溶液洗涤，再用烘干或冻干等方法保存；(c)步骤(b)所得沉淀用水或生理盐水、PBS等能溶解多糖的溶液溶解，；(d)向步骤(c)所得的溶液中，加入活性炭等脱色物质，或用脱色物质制成脱色柱，对GM粗提物溶液进行脱色；(e)步骤(d)所得溶液经滤膜过滤后，用超滤管超滤，冻干，即为纯化甘露聚糖。

【技术特征摘要】
1.ー种烟曲霉分泌型半乳甘露聚糖的制备与纯化方法，包括以下步骤 (a)烟曲霉菌液体培养液经过高压灭菌处理后，过滤的方法除去菌体； (b)向(a)步骤得到菌液上清中，加入无水こ醇或其他浓度的甲醇或こ醇溶液，产生沉淀，离心，沉淀用こ醇溶液洗涤，再用烘干或冻干等方法保存； (c)步骤(b)所得沉淀用水或生理盐水、PBS等能溶解多糖的溶液溶解，； (d)向步骤(C)所得的溶液中，加入活性炭等脱色物质，或用脱色物质制成脱色柱，对GM粗提物溶液进行脱色； (e)步骤(d)所得溶液经滤膜过滤后，用超滤管超滤，冻干，即为纯化甘露聚糖。2.如权利要求1所述方法，其特征在于，用滤膜过滤除去菌体，得到无菌体的培养液上清。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，用こ醇或甲醇溶液处理烟曲霉培养液上清，得到半...

【专利技术属性】
技术研发人员：史东东，何永胜，周泽奇，李宁，王东东，粟艳，彭洁，
申请(专利权)人：天津贻诺琦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：