血吸虫虫卵粗抗原纯化方法、相关的纯化抗原和血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种血吸虫虫卵粗抗原纯化方法，采用Sephacryl?S-300HR柱层析分离血吸虫虫卵粗抗原，去除分子量<10kDa组分。较佳地，最后用截留10kDa分子量的超滤管进一步分离纯化。收集血吸虫虫卵，加入生理盐水制成匀浆，然后超声粉碎并离心，所得上清即为血吸虫虫卵粗抗原。还提供了血吸虫虫卵纯化抗原、其应用以及血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒。本发明专利技术的血吸虫虫卵粗抗原纯化方法设计巧妙，操作简便，由此得到的纯化抗原作为血吸虫抗体检测抗原，可以减少血清用量，增加检测灵敏度，降低交叉反应率，扩大应用范围，检测效果准确可靠，操作简便易行，成本降低，更适用于血吸虫病低度流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断，适于大规模推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白纯化和检测
，特别涉及抗原纯化和抗体检测
，具体是指一种血吸虫虫卵粗抗原纯化方法、相关的纯化抗原和血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒。
技术介绍
血吸虫病免疫学诊断方法是较可靠的辅助诊断方法，也是流行病学调查最常用的工具。在血吸虫病免疫学诊断方法中，目前常用的有酶联免疫法、间接血凝法、胶体染料试纸条法、胶体金斑点免疫渗滤法。虽然这些方法各有利弊，但在血吸虫病检测的敏感性和特异性方面没有明显区别，都纳入了中华人民共和国卫生行业标准一血吸虫病诊断标准(WS261-2006)。胶体金免疫层析试纸条是备受世界卫生组织推崇的“高技术制备，低技术应用”的免疫学诊断方法，其优势在于操作简便、反应快速，不需任何专门设备，不需工作人员特殊培训，既可用于血清流行病学调查，又能作为单份检测个别病例的免疫学诊断工具。但是，目前我国应用效果较好的几种血吸虫病免疫诊断试剂盒,不仅胶体金免疫层析试纸条,而且包括酶联免疫法、间接血凝法、渗滤法等,均将血吸虫虫卵粗抗原(SEA)作为检测用抗原，以检测血清中特异性抗体。这就不可避免的与其他寄生虫病如并殖吸虫病和华支睾吸虫病等存在着不同程度的交叉反应。原因在于SEA组分复杂，且与其它虫种存在一定的交叉抗原，其诊断效能受到较大限制。其次，在血吸虫病免疫学诊断方法中，与ELISA比较，胶体金免疫层析试纸条敏感性较低，受检的血清量较大(50 100 μ I)等缺陷依然存在，受检者需静脉抽血，增加疼痛和心理压力，依从度降低，不便于现场工作人员采样，使其现场大规模应用受到限制。再次，这些试剂盒适用对象单一，只针对人或者动物，增加现场流行病学调查成本和工作强度。因此，需要提供一种具有血清用量少，交叉反应低，应用范围广等特点，更适用于血吸虫病低度流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断的快速检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种血吸虫虫卵粗抗原纯化方法、相关的纯化抗原和血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒，该血吸虫虫卵粗抗原纯化方法设计巧妙，操作简便，由此得到的纯化抗原作为血吸虫抗体检测抗原，可以减少血清用量，增加检测灵敏度，降低交叉反应率，扩大应用范围，检测效果准确可靠，操作简便易行，成本降低，更适用于血吸虫病低度流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断，适于大规模推广应用。为了实现上述目的，在本专利技术的第一方面，提供了一种血吸虫虫卵粗抗原纯化方法，其特点是，采用Sephacryl S-300HR柱层析分离血吸虫虫卵粗抗原,去除分子量〈lOkDa组分。较佳地，最后用截留IOkDa分子量的超滤管进一步分离纯化。所述血吸虫虫卵粗抗原实际上是指破碎的血吸虫虫卵浸出物。较佳地，所述血吸虫虫卵粗抗原通过下述方法制备:从病兔肝收集分离血吸虫虫卵，加入生理盐水制成匀浆并超声粉碎，4°C冷浸3天后离心，所得上清即为所述血吸虫虫卵粗抗原。在本专利技术的第二方面，提供了一种血吸虫虫卵纯化抗原，其特点是，采用上述的血吸虫虫卵粗抗原纯化方法制备而成。在本专利技术的第三方面，提供了上述的血吸虫虫卵纯化抗原在制备检测血吸虫抗体的检测产品中的应用。在本专利技术的第四方面，提供了一种血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒，其特点是，包括血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的硝酸纤维素膜上包被有上述的血吸虫虫卵纯化抗原作为检测物质。较佳地，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的硝酸纤维素膜上包被有上述的血吸虫虫卵纯化抗原免疫家兔获得的抗体作为质控物质。较佳地，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的金标垫上具有胶体金标记的上述的血吸虫虫卵纯化抗原。更佳地，所述金标垫采用聚酯膜作为吸附材料，所述聚酯膜预先采用0.l%Triton-100溶液浸泡IOmin作亲水处理。更佳地，所述的胶体金标记的上述的血吸虫虫卵纯化抗原在吸附至所述金标垫上之前保存在金标保存液中，所述金标保存液的配方为:0.01mol/L pH8.0PB, 1%BSA,0.2%PEG20000,0.01%迭氮钠，其余是蒸馏水。更佳地，所述的胶体金标记的上述的血吸虫虫卵纯化抗原在吸附至所述金标垫上之时采用金标稀释剂稀释，所述金标稀释剂的配方为:0.01mol/L pH8.0PB,1.6%NaCl,0.01% 土温-20，20%蔗糖，1%BSA, 0.01%迭氮钠，其余是蒸馏水。较佳地，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒还包括样品缓冲液，所述样品缓冲液的配方为:0.02mol/L pH8.0PB, 1%BSA,0.05%PEG20000,0.02%迭氮钠，其余是蒸馏水。本专利技术的有益效果具体在于:1、本专利技术的血吸虫虫卵粗抗原纯化方法采用S^hacryl S-300HR柱层析分离血吸虫虫卵粗抗原，去除分子量〈lOkDa组分，以之为血吸虫抗体检测抗原，可以减少血清用量，增加检测灵敏度，降低交叉反应率，扩大应用范围，检测效果准确可靠，操作简便易行，成本降低，更适用于血吸虫病低度流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断，适于大规模推广应用。2、本专利技术的血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒包括血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的硝酸纤维素膜上包被有上述的血吸虫虫卵纯化抗原作为检测物质，可以减少血清用量，增加检测灵敏度，降低交叉反应率，扩大应用范围，检测效果准确可靠，操作简便易行，成本降低，更适用于血吸虫病低度流行区现场流行病学调查、疾病筛查以及免疫学诊断，适于大规模推广应用。附图说明 图1是本专利技术的血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的一具体实施例的侧视示意图，其中I为硝酸纤维素膜；2为T线；3为C线；4为金标垫；5为样品垫；6为吸水纸；7为底板。图2是图1所示的具体实施例的俯视示意图，其中I为硝酸纤维素膜；2为T线；3为C线；4为金标垫；5为样品垫；6为吸水纸。图3是采用图1所示的具体实施例对最低阳性检出参考品(P16)测试结果，其中左起依次为P16原液、P16原液的1:4的稀释液、P16原液的1:8的稀释液、P16原液的1:16的稀释液、P16原液的1:32的稀释液、阴性参照。具体实施例方式为了能够更清楚地理解本专利技术的
技术实现思路
，特举以下实施例详细说明。请参见图1 图2所示，本专利技术的血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的硝酸纤维素膜(NC膜)上包被有血吸虫虫卵纯化抗原作为检测线即T线。首先制备血吸虫虫卵粗抗原(可溶性SEA):取经皮接种1500条日本血吸虫尾蝴45d的家兔肝脏，按文献(毛守白.血吸虫生物学与血吸虫病的防治[M].北京:人民卫生出版社，1990:465.)方法收集分离虫卵，依次经200孔/25.4mm和300孔/25.4mm尼龙絹过滤，收集滤渣，即为较纯净的血吸虫虫卵。然后加入10倍量的生理盐水，置玻璃匀浆器内制成匀浆，用超声粉碎机超声处理(lmin，10次)，液氮冻融3次，4°C冷浸3天后，以IOOOOr/min离心30min，上清液即为SEA，用分光光度计测定蛋白含量，分装后一 20°C冻存备用。其次,血吸虫虫卵粗抗原纯化:本专利技术采用Sephacryl S-300HR柱层析分离SEA抗原，去除分子量〈lOkDa组分，并将蛋白液置截留IOkDa分子量的超滤管内进一步分离纯化，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血吸虫虫卵粗抗原纯化方法，其特征在于，采用Sephacryl?S?300HR柱层析分离血吸虫虫卵粗抗原，去除分子量<10kDa组分。

【技术特征摘要】
1.一种血吸虫虫卵粗抗原纯化方法,其特征在于,采用Sephacryl S-300HR柱层析分离血吸虫虫卵粗抗原，去除分子量〈lOkDa组分。2.根据权利要求1所述的血吸虫虫卵粗抗原纯化方法，其特征在于，最后用截留IOkDa分子量的超滤管进一步分尚纯化。3.根据权利要求1所述的血吸虫虫卵粗抗原纯化方法，其特征在于，所述血吸虫虫卵粗抗原通过下述方法制备:收集血吸虫虫卵，加入生理盐水制成匀浆并超声粉碎，4°C冷浸3天后离心，所得上清即为所述血吸虫虫卵粗抗原。4.一种血吸虫虫卵纯化抗原，其特征在于，采用根据权利要求1 3任一所述的血吸虫虫卵粗抗原纯化方法制备而成。5.根据权利要求4所述的血吸虫虫卵纯化抗原在制备检测血吸虫抗体的检测产品中的应用。6.一种血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒，其特征在于，包括血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的硝酸纤维素膜上包被有根据权利要求4所述的血吸虫虫卵纯化抗原作为检测物质。7.根据权利要求6所述的血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒，其特征在于，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析卡的硝酸纤维素膜上包被有根据权利要求4所述的血吸虫虫卵纯化抗原免疫家兔获得的抗体作为质控物质。8.根据权利要求6所述的血吸虫抗体检测胶体金免疫试剂盒，其特征在于，所述血吸虫抗体检测胶体金免疫层析...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋守富，刘静，张小萍，
申请(专利权)人：上海市疾病预防控制中心，上海疾控生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：