【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疾病诊断的抗原，具体说是一种用于I型登革热血清学诊断的重组抗原及其快速金标诊断试纸条。
技术介绍
登革热是一种由伊蚊传播的病毒性传染病，主要流行于东南亚、美州等热带、亚热带国家和地区，一百多个国家有地方性登革热传播，每年均出现几百万病例，是全球性公共卫生问题。近年来，我国东南沿海省份常年有输入性病例报告，且由此造成的本地扩散及暴发流行越来越频繁。由于登革热主要的传播媒介-白蚊伊蚊在国内分布广泛，因此其传播速度快，容易造成不良的社会影响，同时对当地的经济发展，特别是旅游业的发展造成冲击，我国已将登革热列为重点控制的传染病之一。由于缺乏有效的登革疫苗，加强登革热实验室准确快速的检测，及时发现、控制传染源，对于控制疫情起着至关重要的作用。 目前登革热的实验室诊断主要包括病毒分离、基因诊断技术和血清学检测。由于登革热的病毒血症期很短，通常在发热前2-3天到发热开始4-5天内，因此病毒分离和基因诊断受到标本采集时间的限制，同时对设备、实验室条件及人员素质要求很高，不利于推广。传统的血清学方法主要包括血凝抑制实验、补体结合实验、中和实验和免疫荧光法。但这些方法大多敏感性和特异性不高，且操作繁烦，有的需要特殊检测设备，目前已较少应用。而ELISA法、免疫层析法具有较高的敏感性和特异性，且操作简便快速，是目前大多数实验室采用的主要方法。国外已有多个国家生产销售此类试剂盒，但大多数质量不尽人意，仅以澳大利亚Panbio公司生产的检测试剂盒质量最好，该试剂也是目前国内实验室采用的主要试剂。但其价格昂贵，一般实验室难以承受，且运送时间长，难以应对突发事件。而国内...
【技术保护点】
一组1型登革热快速金标诊断试纸条的溶液组分，其特征是：(1)重组抗原溶解液：SDS？？？？？？？？？0.1％？？？？？？？？？？？？？？？？？？？甘氨酸？？？？？？250mmol/L？？？？？？？？？？？？？？？？？？？Tris.C1？？？？？25mmol/L其中，重组抗原为重组抗原pro？DEN1EDIII，其核苷酸序列为：gacaaactga？ccttaaaagg？gatgtcatat？gtgatgtgca？caggctcatt？caagttagag？60aaagaagtgg？ctgagaccca？gcatggaact？gttctagtgc？aggttaaata？cgaaggaaca？120gatgcaccat？gcaagatccc？cttttcgacc？caagatgaga？aaggagtaac？ccagaatggg？180agattgataa？cagccaaccc？catagtcact？gacaaagaaa？aaccagtcaa？cattgaggca？240gaaccacctt？ttggtgagag？ttacatcgtg？gtaggagcag？gtgaaaaagc？tctgaa...
【技术特征摘要】
1.一组I型登革热快速金标诊断试纸条的溶液组分，其特征是 (1)重组抗原溶解液SDS0. 1% 甘氛酸 250mmol/L Tris. Cl 25mmol/L 其中，重组抗原为重组抗原pro-DENlEDIII，其核苷酸序列为 gacaaactga ccttaaaagg gatgtcatat gtgatgtgca caggctcatt caagttagag 60 aaagaagtgg ctgagaccca gcatggaact gttctagtgc aggttaaata cgaaggaaca 120 gatgcaccat gcaagatccc cttttcgacc caagatgaga aaggagtaac ccagaatggg 180 agattgataa cagccaaccc catagtcact gacaaagaaa aaccagtcaa cattgaggca 240 gaaccacctt ttggtgagag ttacatcgtg gtaggagcag gtgaaaaagc tctgaaacta 300 agctggttca agaaaggaag cagcataggg aaaatgcttg aagcaactgc ccgaggagca 360 cgaaggatgg ccatccta378 其所编码的氨基酸序列为Asp Lys Leu Thr Leu Lys Gly Met Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Ser151015Phe Lys Leu Glu Lys Glu Val Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu202530Val Gln Val Lys Tyr Glu Gly Thr Asp Ala Pro Cys Lys He Pro Phe354045 Ser Thr Gln Asp Glu Lys Gly Val Thr Gln Asn Gly Arg Leu He Thr 505560Ala Asn Pro He Val Thr Asp Lys Glu Lys Pro Val Asn He Glu Ala65707580Glu Pro Pro Phe Gly Glu Ser Tyr He Val Val Gly Ala Gly Glu Lys 859095Ala Leu Lys Leu Ser Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser He Gly Lys Met100105110Leu Glu Ala Thr Ala Arg Gly Ala Arg Arg Met Ala He Leu115120125 (2)胶体金溶液0.03 0. 05%的四氯金酸，加I 2%柠檬酸三钠制备成胶体金颗粒; (3)二抗羊抗人IgG单抗、羊抗人y链单抗，羊抗鼠IgG单抗； (4)包被缓冲液含I 3%蔗糖的磷酸盐缓冲液； (5)基础缓冲液由厦门波生生物技术有限公司研制，主要含牛血清白蛋白的缓冲液； (6)反应缓冲液0.01 -0. 05% NaN3的磷酸盐缓冲液； (7)磷酸盐缓冲液为在800ml蒸馏水中溶解8gNaCUO. 2g KC1、1. 44g Na2HPO4和0.24gKH2P04，用盐酸调节溶液的pH值至7. 2 7. 6，加水定容至1L。2.制备I型登革热快速金标诊断试纸条重组抗原pro-DENlEDIII的工艺流程，其特征是(1)以I型登革病毒株为Hawaii株基因组为模板，以F1/R1为PCR扩增引物，用用一步法RT-PCR扩增得到外膜蛋白基因全长片段，其大小为2065bp，用TA克隆技术将此片段克隆A TA载体pMD 18-T中，获得重组质粒T-DENlE ； (2)以该重组质粒T-DENlE为模板，以FlD、RlD为引物，从中扩增出长度约378bp的E基因DIII区片段，将片段定向插入原核表达载体pET-30a，构建重组表达质粒pET30a-DENlEDIII，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达；蛋白免疫印迹实验证实该重组抗原pro-DENIEDIII能被I型登革病毒感染者血清所识别； E基因DIII区片段DEN1EDIII表达的重组抗原pro-DENlEDIII的核苷酸序列为 gacaaactga ccttaaaagg gatgtcatat gtgatgtgca caggctcatt caagttagag 60 aaagaagtgg ctgagaccca gcatggaact gttctagtgc aggttaaata cgaaggaaca 120 gatgcaccat gcaagatccc cttttcgacc caagatgaga aaggagtaac ccagaatggg 180 agattgataa cagccaaccc catagtcact gacaaagaaa aaccagtcaa cattgaggca 240 gaaccacctt ttggtgagag ttacatcgtg gtaggagcag gtgaaaaagc tctgaaacta 300 agctggttca agaaaggaag cagcataggg aaaatgcttg aagcaactgc ccgaggagca 360 cgaaggatgg ccatccta378 其所编码的氨基酸序列为Asp Lys Leu Thr Leu Lys Gly Met Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Ser151015Phe Lys Leu Glu Lys Glu Val Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu202530Val Gln Val Lys Tyr Glu Gly Thr Asp ...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。